寒熱交替刺激對正常及免疫低下大鼠一般情況的影響

程天虹，張瑞卿，楊 蓉，趙延龍，齊 錚，李俊蓮

（山西中醫學院，山西太原030024）

祖國醫學認為“肺為嬌臟，不耐寒熱”，又因“肺為華蓋”，位居諸臟之上，“外邪上受，首先犯肺”，肺極易感受外邪侵襲。玉屏風散益氣固表，現代藥理研究表明玉屏風散具有提高免疫、治療哮喘、抗變態反應［1］等作用。本實驗借助人工氣候箱模擬寒熱交替的氣候環境，皮下注射氫化可的松注射液建立免疫低下大鼠模型，采用玉屏風散進行干預，通過觀察寒熱交替刺激大鼠的飲食、體重、精神活動等，探討外邪對正常及免疫低下大鼠一般情況的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SPF級健康雄性 Wistar大鼠108只（由中國人民解放軍醫學科學院實驗動物中心提供），體重180~220 g，合格證號為SCXK-（軍）2012-0004。實驗動物環境設施符合I級標準。室溫20℃~25℃，相對濕度為60%~80%，自然采光。自由進食飲水，以清潔級飼料喂養，適應性飼養1 w后開始實驗。

1.1.2 藥物與試劑 氫化可的松注射液，批號：H12020887，天津金耀藥業有限公司。玉屏風顆粒，5 g×21 袋，批號：Z10930036，國藥集團廣東環球制藥有限公司。

1.1.3 實驗儀器 人工氣候箱：LRH-800-GSI型，韶關市泰宏醫療器械有限公司；電子天平：FA2204型，上海皓莊儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組 SPF級健康雄性Wistar大鼠108只，按照隨機數字表法分為6組，每組18只：正常常溫組、正常寒熱交替組、正常寒熱交替加中藥干預組、免疫低下常溫組、免疫低下寒熱交替組、免疫低下寒熱交替加中藥干預組。于造模前測體重，觀察大鼠精神狀態、活動情況、飲食飲水量、毛色、皮膚、關節及二便等情況。實驗期間每日定時觀察各組大鼠的精神活動、皮膚毛色、關節、鼻部分泌物、糞便等，并定時記錄各組大鼠的進食飲水量、體重等一般情況。

1.2.2 造模 免疫低下大鼠模型的制備［2］：適應性飼養結束后，低免各組大鼠均皮下注射免疫抑制劑氫化可的松注射液20 mg/（kg·d），連續5 d。

寒熱刺激大鼠模型的制備［3-5］：寒熱交替各組大鼠每天定時置于人工氣候箱喂養，并設定RH（空氣中實際含量占同等溫度下飽和含水量的百分比值）、T（溫度）。寒刺激設定 RH（50±4）%，T（0±2）℃，每天40 min；寒刺激結束后接著進行熱刺激，熱刺激設定 RH（50±4）%，T（33±2）℃，每天20 min；寒熱交替各組大鼠每天定時接受1次寒熱交替刺激，其余時間為常溫環境喂養。

1.2.3 給藥 中藥干預各組大鼠按中藥給藥劑量等效換算方法計算，將玉屏風顆粒成人每日所需藥量換算成大鼠所需藥量為25 g/kg［6］，連續灌胃28 d，實驗期間動物均自由進食飲水。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 精神狀態及毛色情況

大鼠在接受寒熱交替刺激7 d后均出現精神倦怠、背毛脫落明顯、背毛凌亂、毛色無光澤等外觀表現；寒刺激期間大鼠主要表現為扎堆、蜷縮、怕冷、背毛豎立、耳朵及尾巴顏色變淺；熱刺激期間大鼠主要表現為精神煩躁、抓撓鼠籠、活動度增加、身上出現明顯汗斑、皮膚顏色加深等。造模第14天后，以低免寒熱交替組大鼠的精神活動狀況最為不佳，多現嗜睡、嗜臥，且較其他各模型組實驗期間、大鼠死亡數量多。第28天正常寒熱交替組和低免寒熱交替組出現精神萎靡、扎堆蜷縮、毛色暗淡脫落的大鼠數量明顯增多，且低免寒熱交替組大鼠死亡數量較前增多。正常常溫組大鼠始終精神活動良好，毛色順滑，無異常改變。

2.2 鼻部分泌物情況

寒熱交替刺激7 d后大鼠出現鼻部分泌物，質地稀，而玉屏風顆粒藥物干預組與寒熱交替組相比，大鼠鼻部分泌物較少。14 d后寒熱交替組大鼠鼻部分泌物增多，尤以低免寒熱交替組大鼠表現明顯。至28 d寒熱交替組大鼠鼻部分泌物比7 d時明顯增多，且次數增加，而玉屏風顆粒藥物干預組大鼠的鼻部分泌物有所減輕，次數相對減少。正常常溫組大鼠無異常鼻部分泌物。

2.3 關節情況

大鼠在接受寒熱交替刺激7 d后，部分出現足背關節腫大、畸形、后肢伴糜爛等表現，并以低免寒熱交替組大鼠的關節病變比較顯著。至14 d后，低免寒熱交替組大鼠關節腫大、畸形的病變程度更為嚴重，且關節水腫處皮膚發紅，經玉屏風顆粒藥物干預后大鼠的病變情況有所減輕。至28 d，低免寒熱交替組大鼠關節及足背紅腫、糜爛、畸形的病變情況最為顯著，且病變大鼠的數量明顯增多。正常常溫組大鼠關節無異常改變。

2.4 大便情況

造模7 d后，低免常溫組和低免寒熱交替組大鼠便質較軟，正常常溫組大鼠便質無異常。至14 d后，低免寒熱交替組大鼠的便質最為稀溏，并伴黏液狀分泌物，而玉屏風顆粒藥物干預組大鼠的便質稍有好轉。至28 d，低免寒熱交替組出現便溏的大鼠數量明顯增多，且正常寒熱交替組部分大鼠也出現稀便。正常常溫組大鼠的糞便正常，呈顆粒狀，硬度適中，無異常表現。

2.5 進食飲水情況

隨著時間的延長，各組大鼠的進食量及飲水量都逐漸增加，但與正常常溫組相比，寒熱交替刺激組的大鼠進食及飲水量增長緩慢，低免寒熱交替組大鼠的進食飲水量最少，經玉屏風顆粒藥物干預后，大鼠的進食量和飲水量均有所增加。結果見表 1、表 2。

表1 寒熱交替刺激對大鼠進食量的影響 （g±s）

表1 寒熱交替刺激對大鼠進食量的影響 （g±s）

注：與同期正常常溫組相比，1）P＜0.01；與同期低免常溫組相比，2）P＜0.01；與同期正常寒熱交替組相比，3）P＜0.01；與低免寒熱交替組相比，4）P＜0.01

組別 n 第7天 第14天 第28天正常常溫組 6 124.83±3.43 156.33±3.61 172.33±2.34正常寒熱交替組 6 91.67±2.161） 109.50±5.091） 122.33±5.201）正常交替加干預組 6 110.17±1.173） 135.33±3.503） 143.17±3.603）低免常溫組 6 106.00±1.261） 114.50±2.661） 133.00±2.371）低免寒熱交替組 6 80.17±5.421）2）3） 96.83±2.641）2）3）107.33±2.731）2）3）低免交替加干預組 6 93.67±2.254） 106.00±2.834） 126.17±2.234）

表2 寒熱交替刺激對大鼠飲水量的影響 （mL，±s）

表2 寒熱交替刺激對大鼠飲水量的影響 （mL，±s）

注：與正常常溫組相比，1）P＜0.01；與低免常溫組相比，2）P＜0.01；與正常寒熱交替組相比，3）P＜0.05，4）P＜0.01；與低免寒熱交替組相比，5）P＜0.01

組別 n 第7天 第14天 第28天正常常溫組 6 292.67±17.36 389.17±6.49 418.17±19.29正常寒熱交替組 6 250.17±2.231） 315.67±3.611） 326.33±6.561）正常交替加干預組 6 266.33±3.613） 358.50±7.824） 371.67±10.764）低免常溫組 6 235.00±9.471） 325.50±4.761） 328.83±10.571）低免寒熱交替組 6 180.17±20.651）2）4） 269.83±15.131）2）4） 289.33±8.781）2）4）低免交替加干預組 6 212.00±6.725） 306.50±5.965） 308.00±6.075）

表1、表2顯示，正常寒熱交替組、低免常溫組、低免寒熱交替組與正常常溫組相比，分別于第7天、14天、28天時，大鼠進食量及飲水量都明顯下降（P＜0.01）。低免寒熱交替組與低免常溫組相比，分別于第7天、14天、28天大鼠的進食量及飲水量都明顯下降（P＜0.01）。與正常寒熱交替組相比，低免寒熱交替組分別于第7天、14天、28天的進食量及飲水量都明顯降低（P＜0.01）。與正常寒熱交替組相比，正常交替加干預組分別于第7天、14天、28天的進食量及飲水量都增加（P＜0.05或P＜0.01）。與低免寒熱交替組相比，低免交替加干預組經玉屏風顆粒藥物干預后，大鼠的進食量及飲水量增加（P＜0.01）。

2.6 體重變化情況

造模期間，各組大鼠的體重均呈增長趨勢，與正常常溫組相比，寒熱交替組大鼠的體重增長緩慢，低免寒熱交替組大鼠的體重減輕明顯，經玉屏風顆粒干預后，大鼠體重均有不同程度的增長。結果見表3。

表3 寒熱交替刺激對大鼠體重的影響 （g，±s）

表3 寒熱交替刺激對大鼠體重的影響 （g，±s）

注：與正常常溫組相比，1）P＜0.01；與低免常溫組相比，2）P＜0.01；與正常寒熱交替組相比，3）P＜0.05，4）P＜0.01；與低免寒熱交替組相比，5）P＜0.01

組別 n 第7天 第14天 第28天正常常溫組 6 283.50±17.28 338.83±12.40 388.33±10.29正常寒熱交替組 6 245.33±6.191） 299.17±6.651） 339.00±16.531）正常交替加干預組 6 269.17±7.334） 323.33±10.883） 371.83±10.133）低免常溫組 6 279.67±7.15 291.00±22.951） 256.67±11.891）低免寒熱交替組 6 226.33±23.831）2）3） 267.50±16.681）2）4） 315.67±6.801）2）4）低免交替加干預組 6 266.83±3.605） 278.00±17.92 334.00±8.105）

表3顯示，第7天時正常寒熱交替組、低免寒熱交替組與正常常溫組相比，大鼠的體重明顯減輕（P＜0.01）；正常寒熱交替組、低免常溫組、低免寒熱交替組與正常常溫組相比，第14天、28天時大鼠體重都明顯下降（P＜0.01）。與低免常溫組相比，低免寒熱交替組于第7天、14天、28天時體重均明顯減輕（P＜0.01）。與正常寒熱交替組相比，低免寒熱交替組分別于第7天、14天、28天時體重降低（P＜0.05 或P＜0.01）。正常交替加干預組與正常寒熱交替組相比，不同時段大鼠體重均有所增加（P＜0.05 或P＜0.01）。與低免寒熱交替組相比，低免交替加干預組分別于第7天、28天經玉屏風顆粒藥物干預后，大鼠體重皆有所增加（P＜0.01）；第14天與低免寒熱交替組比較，低免寒熱交替加干預組體重指數雖有增高，但差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

課題組前期研究認為［7］，機體發病的關鍵在于環境—微生物—機體三者之間的平衡失調，如氣候的突變、環境的惡化、微生物菌群失調、機體免疫機制紊亂等都能引起疾病的發生。自然界六淫外邪尤以寒熱之邪為陰陽兩類外環境致病的典型代表，其中寒為陰邪，其性收引、凝滯，易傷陽氣，寒邪侵襲肌表可損傷肺衛，導致衛陽郁閉；而熱為陽邪，易傷津耗氣。寒熱交替對大鼠刺激明顯，會使大鼠出現惡寒、發熱、流涕、倦怠嗜臥、蜷縮等一系列病理表現。此外，由于肺為嬌臟，外合于皮毛，因此寒熱之邪侵襲肌表，會使大鼠出現背毛脫落、凌亂，毛色無光澤；肺開竅于鼻，在液為涕，因此在寒熱交替刺激下大鼠的鼻部分泌物也會增多。玉屏風散由黃芪、白術、防風三味藥物組成，具有益氣固表止汗之功效，乃中醫“扶正固本”之良方。研究表明，玉屏風散可以提高低下的免疫力，抑制免疫亢進，對免疫失調性疾病療效頗佳，臨床上可以治療蕁麻疹、過敏性鼻炎、呼吸道感染、多汗癥等多種疾?。?］。本實驗觀察結果顯示，隨著時間的延長，正常及免疫低下大鼠在寒熱交替刺激環境下，其精神活動、皮膚毛色、鼻部分泌物、糞便、進食飲水量及體重等一般情況都會受到不同程度的影響，對于本身免疫力低下的大鼠影響更為顯著。顯示外邪刺激導致大鼠衛外力量減弱，通過玉屏風顆?？梢缘玫郊m正。