子癇前期患者25-OH-VD、VDR蛋白水平變化及維生素D干預效果的研究

邱海凡 王榮躍 邱笑飛 王繁

子癇前期患者25-OH-VD、VDR蛋白水平變化及維生素D干預效果的研究

邱海凡 王榮躍 邱笑飛 王繁

目的探討血清25-羥基維生素D（25-OH-VD）水平、胎盤絨毛膜組織中維生素D受體（VDR）蛋白表達水平與子癇前期的關系，并觀察維生素D的干預效果。方法選取200例剖宮產終止妊娠的孕婦為研究對象，其中無妊娠期并發癥的正常晚期孕婦80例（對照組），子癇前期孕婦120例（觀察組）；觀察組又隨機分為觀察組A（不干預）與觀察組B（維生素D干預，診斷為子癇前期后即開始服用維生素D滴劑，600IU/d），各60例。觀察并比較3組孕婦血清25-OH-VD水平，胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白表達水平，以及觀察組A與B的子癇前期分層情況。結果3組孕婦妊娠終止時的血清25-OH-VD水平均高于妊娠20周時的水平（均P＜0.05）；妊娠20周時，對照組血清25-OH-VD水平高于觀察組A及B（均P＜0.05），觀察組A與B比較差異無統計學意義（P＞0.05）；妊娠終止時，觀察組B、對照組血清25-OH-VD水平均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統計學意義（P＞0.05）。觀察組B、對照組絨毛膜組織中VDR蛋白表達水平均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統計學意義（P＞0.05）。在妊娠終止時，觀察組B進展為重度子癇前期的發生率明顯低于觀察組A（P＜0.05）。結論補充維生素D有助于提高子癇前期孕婦血清25-OH-VD水平，上調絨毛膜組織中VDR蛋白表達水平，從而減少子癇的發生。

25-羥基維生素D維生素D受體子癇前期

子癇前期是妊娠期特有的疾病，發病率較高，國外報道發病率為7%～12%，我國報道為9.4%。子癇前期是導致母嬰死亡的主要原因[1]，目前尚未完全闡明其病因及發病機制，亦無明確有效的治療方法。維生素D在鈣磷代謝、骨的礦物化、免疫功能、細胞增殖和疾病預防中具有重要作用。Hyppnen等[2]研究發現在妊娠早期，適當補充維生素D的孕婦發生子癇前期的概率較低，而具體機制需要進一步研究證實。那么，維生素D是否可作為一種便宜、安全、有效的藥物來預防子癇前期呢？筆者收集120例子癇前期孕產婦的臨床資料，探究其血清中25-羥基維生素D（25-OH-VD）水平、胎盤絨毛膜組織中維生素D受體（VDR）蛋白表達水平與子癇前期的關系，并觀察維生素D的干預效果。

1 對象和方法

1.1 對象選擇2015年1月至2017年6月在本院產科行剖宮產終止妊娠的200例孕產婦為研究對象，其中子癇前期孕產婦120例（觀察組），無妊娠期并發癥的正常晚期孕產婦80例（對照組）。觀察組隨機分為觀察組A（不干預）與觀察組B[干預，即診斷為子癇前期開始服用維生素D滴劑（600IU/滴，100滴/瓶，加拿大Ddrops公司生產），600IU/d]，各60例。觀察組A、觀察組B與對照組的年齡、妊娠周數、妊娠次數、分娩次數、BMI等方面比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表1。所有孕產婦簽署知情同意書，且本研究經醫院倫理委員會批準。子癇前期的診斷標準：孕20周后出現血壓≥140/90mmHg，尿蛋白（+～++++），輕～重度水腫[參照豐有吉主編的8年制《婦產科學》（第2版）]。排除雙胎妊娠，有慢性高血壓、心血管疾病、腎病、糖尿病及甲狀腺疾病等內分泌異常，自身免疫性疾病，孕期內患過感染性疾病的孕產婦。臨床試驗過程中，若孕產婦不能堅持本次研究，或出現嚴重不良反應、病情不穩定，或治療過程中同時采取其他治療方法，則退出試驗。

表1 3組的臨床資料比較

1.2 方法

1.2.1 標本采集在妊娠20周、妊娠終止時采集孕產婦晨起肘靜脈血5ml（空腹10～12h）；離心，取上清液，存放于-20℃冰箱待測。收集孕產婦2cm×2cm×2cm的胎盤組織，用滅菌0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈，固定于4%的多聚甲醛溶液中24h，石蠟包埋后用于免疫組化檢測。

1.2.2 血清25-OH-VD水平檢測采用電化學發光免疫分析法測定血清25-OH-VD水平，嚴格按照瑞士羅氏CSE170分析儀及配套試劑盒說明書進行操作。

1.2.3 胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白檢測采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接（SP）法檢測絨毛膜組織中VDR蛋白，嚴格按照SP免疫組化試劑盒50preps（中國上海研卉生物科技有限公司，批號：95-9641）說明書進行操作。結果判斷：細胞質內棕黃色顆粒即VDR蛋白表達。每例隨機選取10個高倍視野（×400），使用Image-Pro-Plus系統測定表達VDR蛋白細胞的面積積分吸光度（IA）值，計算其平均數；再根據陽性染色細胞占細胞的百分比來計算陽性指數，即VDR蛋白表達水平。陽性指數=IA平均數×陽性細胞百分比×100。

1.2.4 觀察子癇前期進展在妊娠終止時，統計觀察組A及B孕產婦進展為重度子癇前期的例數。依據人民衛生出版社《婦產科學》第8版重度子癇前期的診斷標準，即子癇前期患者出現下述任一不良情況可診斷為重度子癇前期：（1）血壓持續升高：收縮壓≥160mmHg和（或）舒張壓≥110mmHg；（2）24h蛋白尿≥5.0g或隨機蛋白尿（+++）及以上；（3）持續頭痛、視覺障礙或其他腦神經癥狀；（4）持續上腹部疼痛；（5）肝功能異常，如血清ALT或AST升高、微血管病性溶血-乳酸脫氫酶升高；（6）腎功能異常，即少尿或血清肌酐＞106μmol/L；（7）低蛋白血癥伴胸腔積液或腹腔積液；（8）PLT呈持續性下降且＜100×109/L；（9）心力衰竭、肺水腫；（10）胎兒生長受限或羊水過少；（11）早發型子癇前期。

1.3 統計學處理應用SPSS 15.0統計軟件。計量資料表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗；不同妊娠期比較采用配對樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組孕產婦血清25-OH-VD水平比較3組孕產婦妊娠終止時的血清25-OH-VD水平均高于妊娠20周，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。妊娠20周和妊娠終止時，3組孕產婦血清25-OH-VD水平比較，差異均有統計學意義（均P＜0.05）；妊娠20周時，對照組高于觀察組A及B（均P＜0.05），觀察組A與B比較差異無統計學意義（P＞0.05）；妊娠終止時，觀察組B、對照組均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 3組孕產婦不同妊娠期的血清25-OH-VD水平比較（ng/ml）

2.2 3組孕產婦胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白表達水平比較3組孕產婦胎盤絨毛膜組織中均有VDR蛋白表達；在絨毛滋養層細胞質中，呈棕黃色染色，見圖1。對照組、觀察組A、觀察組B孕產婦絨毛膜組織中VDR蛋白表達水平分別為0.37±0.14、0.20±0.09、0.34±0.15，3組比較差異有統計學意義（F=2.88，P＜0.05）；其中觀察組B、對照組均高于觀察組A（均P＜0.05），對照組與觀察組B比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

圖1 VDR在3組孕產婦絨毛滋養層細胞中的表達（SP免疫組化法，×400）

2.3 觀察組A與B進展為重度子癇前期的發生率比較在妊娠終止時，觀察組B進展為重度子癇前期的發生率為15.0%（9/60），明顯低于觀察組A的36.7%（22/60），差異有統計學意義（χ2=7.350，P＜0.05）。

3 討論

維生素D是一類具有生物活性的脂溶性維生素，屬固醇類衍生物，其主要的生理功能是調節體內鈣、磷代謝并維持血漿鈣、磷水平穩定，參與牙齒和骨骼的正常生長發育。人體血液循環中維生素D的主要存在形式為血清25-OH-VD，常被作為評價體內維生素D營養狀況的指標。25-OH-VD在腎內1α-羥化酶的作用下轉化成維生素D的活性形式1，25-二羥基維生素D，與類固醇激素相似，與細胞核內的VDR結合后，對靶基因的轉錄和翻譯進行調控，進而實現其生物學功能[3]。研究表明維生素D參與了母嬰葡萄糖代謝、中樞神經系統新陳代謝、胎兒心臟形成及生殖系統發育；因此，維生素D不足可能導致母體糖代謝異常、妊娠期糖尿病、子癇前期及細菌性陰道病等[4]。

本研究發現子癇前期孕產婦在妊娠20周、妊娠終止時，血清25-OH-VD水平均較正常孕婦低，與周俐等[5]研究結果一致。而補充維生素D后，子癇前期孕產婦在妊娠終止時的血清25-OH-VD水平可恢復至正常水平，此時胎盤絨毛膜組織中VDR蛋白表達水平也與對照組接近；故推測維生素D對VDR呈一種向上的調節作用。以往研究同樣表明1，25-二羥基維生素D3對VDR的調節作用主要呈一種向上的調節作用[6]。此外，給予維生素D干預治療后，子癇前期分層明顯改善。以上結果提示維生素D可以阻止子癇前期的進展，該作用機制考慮如下：（1）Tregs免疫缺陷導致滋養細胞侵襲功能障礙，使胎盤衍生血管收縮因子釋放，從而導致孕婦出現高血壓、蛋白尿[7]；（2）血管和心臟上VDR對心臟具有保護作用，骨化三醇通過調節腎素-血管緊張素-醛固酮系統影響內皮細胞和血管平滑肌細胞功能、控制炎癥反應，從而影響血壓調節[8]；（3）骨化三醇在免疫耐受及恢復、維持免疫穩態中具有重要作用。免疫細胞上VDR表達調節雌激素活化及分解代謝的關鍵酶，因此其有效性和可用性受到免疫細胞的調節。另外，骨化三醇能夠上調Tregs的免疫應答并下調促炎癥反應，影響母親的免疫耐受，從而降低子癇前期的發生風險[9]；（4）維生素D能增加毛細血管形成，促進補體嗜酸細胞趨化，從而減少子癇前期相關因素的負面效應[10]；（5）維生素D通過拮抗胎兒內皮集落形成細胞的數量與功能，在子癇前期病程中起到一定保護作用[11]。

綜上所述，補充維生素D有助于提高子癇前期孕產婦血清25-OH-VD水平，上調絨毛膜組織中VDR蛋白表達水平，從而減少子癇的發生，降低發生胎盤早剝及產后出血的風險，降低了母嬰死亡率。本研究為早期應用維生素D預防子癇前期提供了理論依據。

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Relationship of serum 25-hydroxy-vitamin D level and vitamin D receptor expression in placenta with preeclampsi a and intervention effect of vitamin D

QIU Haifan,WANG Rongyue,QIU Xiaofei,et al.
Department of Obstetrics and Gynecology,the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou 325027,China

Objective To investigate serum levels of 25-hydroxy-vitamin D(25-OH-VD)and expression of vitamin D receptor(VDR)protein in placenta chorion tissue of patients with preeclampsia,and the intervention effect of vitamin D.Methods Two hundred puerperants with cesarean section were enrolled in the study,including 80 cases of normal pregnancy(group C)and 120 cases with preeclampsia(the study group).The study group was further divided into two groups with 60 cases in each,group A had no vitamin D intervention and group B

vitamin D drops 600IU/d after the diagnosis of preeclampsia.Serum 25-OH-VD levels and the expression of VDR protein in placental chorion tissue were determined and compared among 3 groups.ResultsSerum 25-OH-VD levels at the termination of pregnancy were higher than those at the 20 week of gestation in all three groups(P＜0.05).At 20 weeks after pregnancy,the serum 25-OH-VD level of group C was higher than that of groups A and B(all P＜0.05),there was no significant difference between groups A and B(P＞0.05).At the termination of pregnancy,the serum 25-OH-VD levels of groups B and C were higher than those of group A(P＜0.05),there was no significant difference between group B and C(P＞0.05).The expression level of VDR protein in the chorion tissue of groups B and C was higher than that of group A at the termination of pregnancy(P＜0.05),there was no significant difference between group B and C(P＞0.05).The incidence of severe preeclampsia in group B was significantly lower than that in group A(P＜0.05).ConclusionVitamin D supplementation may improve serum 25-OH-VD levels in preeclampsia women,up-regulate VDR protein expression in chorion tissue,and reduce the occurrence of eclampsia.

25-hydroxy vitamin DVitamin Dreceptor Preeclampsia

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.23.2017-1916

溫州市科技局計劃項目（Y20160345）

325027溫州醫科大學附屬第二醫院婦產科

王繁，E-mail：wangfan75@hotmail.com

2017-08-09）

（本文編輯：陳丹）