不同滅菌方法對蒙藥讓·阿嘎日-8滅菌效果及目標成分的影響

楊烏日娜 薩日蓋 烏仁圖雅 賀喜格達來

(內蒙古自治區鄂爾多斯市蒙醫研究所,內蒙古 鄂爾多斯 017000)

不同滅菌方法對蒙藥讓·阿嘎日-8滅菌效果及目標成分的影響

楊烏日娜 薩日蓋 烏仁圖雅 賀喜格達來

(內蒙古自治區鄂爾多斯市蒙醫研究所,內蒙古 鄂爾多斯 017000)

目的：考察4種滅菌方法對于讓·阿嘎日-8藥粉滅菌的效果以及滅菌過程中對目標成分沒食子酸含量的影響。方法分別用鈷60-γ射線、高壓、紫外、微波4種滅菌方法對讓·阿嘎日-8藥粉進行滅菌處理，檢測滅菌前后藥粉的微生物限度指標；用高效液相法測定滅菌后廣棗中沒食子酸含量。結果微生物檢測結果表明鈷60-γ射線、高壓滅菌效果較好，紫外、微波滅菌效果不太穩定。目標成分檢測結果表明鈷60-γ射線、高壓滅菌和紫外對沒食子酸影響較小，微波滅菌對沒食子酸影響較大。結論綜合滅菌效果和對目標成分的影響，讓·阿嘎日-8藥粉滅菌方法可選用鈷60-γ射線或高壓滅菌。

沒食子酸;高效液相;微生物

當前，蒙藥制劑生產質量控制已成為實現蒙藥現代化的瓶頸問題，而微生物限度指標的控制又是確保蒙藥制劑質量的關鍵之一。蒙藥讓·阿嘎日-8是由沉香，廣棗，肉豆蔻，北沙參等八味藥組成的制劑。氣香，味苦，微酸。具有清肺心之“赫伊”，止咳等作用。用于胸肋悶痛，心悸氣短，咳嗽，前胸后背刺痛[1-2]。

本文選用蒙藥讓·阿嘎日-8為研究對象，對其進行鈷60-γ射線、高壓、紫外、微波4種不同方法的滅菌處理，考察不同滅菌方法對細菌和霉菌的滅菌效果；選擇廣棗中的沒食子酸為目標成分，測定其在滅菌后制劑中的含量。現將研究結果報道如下。

1 材料

1.1 儀器：L6-P6高效液相色譜儀，DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥，HPX-9082MBEX型數顯電熱培養箱，LDZX-75KBS型立式高壓滅菌鍋，紫外線消毒器，HY-2A型振蕩器，JJ-CJ-IFD型潔凈工作臺，SPX-150B-Z型生化培養箱，Galanz微波爐。

1.2 試藥：沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110831-201204)，讓·阿嘎日-8散劑(鄂爾多斯蒙醫研究所蒙藥實驗室配制)，玫瑰紅鈉瓊脂培養基(02-087)，營養瓊脂培養基(20150701)，乳糖膽鹽發酵培養基(02-007)，蛋白胨(01-001)，氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，甲醇，三乙胺，磷酸等均為分析純。

2.2 微生物檢查：取滅菌后的讓·阿嘎日-8藥粉參照《中華人民共和國藥典》2010年版附錄XIII C微生物檢查法[3]。即環境潔凈度萬級以下的局部潔凈度百級的單向流空氣區域內進行。檢查過程嚴格遵守了無菌操作，防止了二次污染。

本實驗檢查法中細菌及控制菌培養溫度為35℃；霉菌培養溫度為27℃。檢驗量即供試品的檢驗量為10g。

2 方法與結果

2.1 滅菌處理：分別稱取8味藥材，粉碎后過100目篩，按表1所列滅菌設備及主要工藝參數進行處理，得滅菌藥粉。

表1 滅菌設備及主要參數

供試品檢查：本法使用平皿法按已驗證的計數方法進行供試品的細菌、霉菌數的測定。按計數方法的驗證試驗確認的程序進行供試液制備。用稀釋液稀釋成1:10稀釋劑的供試液。

平皿法：根據菌數報告規則取相應稀釋級的供試液1mL，置直徑90mn的無菌平皿中，注入15～20mL濕度不超過45℃的熔化的營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基，混勻，凝固，倒置培養。每稀釋級每種培養基至少制備2個平板。

陰性對照試驗：取試驗用的稀釋液1mL，置無菌平皿中，注入培養基，凝固，倒置培養。每種計數用的培養基各制備2個平板，均不得有菌長。

培養和計數：細菌培養3d、霉菌培養5d，逐日觀察菌落生長情況，點計菌落數，菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。若同稀釋級2個平板的菌數平均數不小于15，則2個平板的菌落數不能相差1倍或以上。一般營養瓊脂培養基用于細菌計數；玫瑰紅鈉瓊脂培養基用于霉菌計數。

菌數報告規則：細菌、酵母菌宜選取平均菌落數小于300cfu、霉菌宜選取平均菌落數小于100cfu的稀釋級，作為菌數報告(取2位有效數字)的依據。以最高的平均菌落數乘以稀釋倍數的值報告1g、1mL或10cm2供試品中所含的菌數。

從圖1、2可以看出，對于細菌的滅菌效果強弱依次是鈷60-γ射線(Go-60)>高壓>微波>紫外。對于霉菌的滅菌效果強弱依次是鈷60-γ射線(Go-60)>高壓>微波>紫外。

2.3 實驗結果：見圖1，圖2。

表2 4種滅菌法的細菌和霉菌限度檢查結果

方劑名稱滅菌法微生物限度合格與否Go-60滅菌--紫外滅菌++讓·阿嘎日-8高壓滅菌--微波滅菌++未滅菌++

注：-表示檢查項合格項； +表示檢查不合格項。

2.4 對目標成分的影響

2.4.1 色譜條件： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長:273 nm；流動相:乙腈-0.1%三乙胺 0.3%磷酸溶液(1：99)；流速:1mL/min；柱溫:25 ℃。進樣量：20μL。外標法。

2.4.2 溶液的配制：對照品溶液的制備：精密稱取一定量的沒食子酸，用50%的甲醇配制成30μg/mL沒食子酸對照品溶液。

供試品溶液的制備：精密稱取讓·阿嘎日-8藥粉5g置廣口瓶，加50%的甲醇25mL，稱其重量，超聲30min，再稱重量，將減少的部分用50%的甲醇補足，搖勻，抽濾，取繼濾液即可。

陰性對照品溶液的制備：精密稱取沒有加廣棗的讓·阿嘎日-8藥粉5g置廣口瓶，按供試品溶液的制備方法制備。

2.4.3 專屬性實驗：分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液注入色譜儀，按2.4.1 項下色譜條件進樣，結果見圖3，4，5。

由圖可見供試品溶液在對照品溶液出特征峰的相應時間段里出峰而陰性對照溶液不出峰，表明其專屬性良好。

3 樣品含量測定

取不同方法滅菌后的讓·阿嘎日-8藥粉，按照2.4.1項下色譜條件進行測定，色譜圖見圖6～9。結果，鈷60-γ射線、高壓、紫外、微波4種方法滅菌后的讓·阿嘎日-8目標成分含量分別為0.0053%，0.0055%，0.0043%，0.0002%。由此可見，各滅菌方法對于目標成分的影響大小依次為高壓>鈷60-γ射線>紫外>微波。

4 討論

鈷60-γ射線(一定劑量)輻射蒙藥，滅菌效果好、效率高。但其費用高，增加了成品藥的成本。我院制劑室每年藥物滅菌達15噸，每年就滅菌一項要用去約10多萬的費用。從經濟效益上看是不夠理想的。除此用鈷60-γ射線滅菌能否對藥品產生放射性物質的污染，目前尚不清楚。本次實驗初步探索效果好、成本低、毒性殘留物少的滅菌方法，實驗結果表明，高壓滅菌法是較為理想的滅菌方法。但在實際應用中多少存在著局限性，因此有待進一步深入研究。

[1]巴嘎那等.蒙藥方劑學[M].赤峰：內蒙古科學技術出版社,1984, 81-82

[2]內蒙古自治區衛生廳.內蒙古蒙成藥標準[S].赤峰：內蒙古科學技術出版社,1987,279

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).[S].北京：中國醫藥科技出版社,2010,附錄79-85.

R291.2

B

1006-6810(2017)06-0037-03

2017年3月10日收稿