基于紫外-可見分光光度法的黔東南不同產(chǎn)地太子參中總皂苷含量測(cè)定

劉光海 吳庭柱 王文春

(黔東南州中醫(yī)醫(yī)院，貴州 凱里 556000)

基于紫外-可見分光光度法的黔東南不同產(chǎn)地太子參中總皂苷含量測(cè)定

劉光海 吳庭柱 王文春

(黔東南州中醫(yī)醫(yī)院，貴州 凱里 556000)

目的：測(cè)定黔東南不同產(chǎn)地太子參藥材中總皂苷的含量，為分析黔東南太子參藥材質(zhì)量提供參考。方法以人參皂苷Rb1為對(duì)照品，采用紫外-可見分光光度法測(cè)定分析。結(jié)果黔東南不同產(chǎn)地9個(gè)藥材樣品中總皂苷含量在0.20%～0.70%，平均加樣回收率為97.97%，RSD為1.35%。黔東南不同產(chǎn)地太子參藥材中總皂苷的含量差異不太大，其中施秉縣牛大場(chǎng)太子參中總皂苷含量最高。結(jié)論此方法準(zhǔn)確、可行，可作為太子參藥材的質(zhì)量分析方法。

太子參;總皂苷;紫外-可見分光光度法

太子參為石竹科植物孩兒參Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥塊根，太子參味甘、微苦，性平。歸脾、肺經(jīng)，具有益氣健脾，生津潤(rùn)肺之功效，用于脾虛體倦，食欲不振，病后虛弱，氣陰不足，自汗口渴等病癥[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，太子參中皂苷類成分具有抗疲勞、抗氧化、抗缺氧、抗衰老等作用，其應(yīng)用在肝炎、糖尿病以及冠心病等疾病的臨床治療中取得了新的進(jìn)展[2]，太子參具有增強(qiáng)免疫力的作用既有理論支撐也有實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)[3]。黔東南地區(qū)的侗族稱太子參為“門辰細(xì)”，苗族叫做“娃兒參”，苗醫(yī)侗醫(yī)用于治療脾虛、納差、體質(zhì)虛弱病癥的藥物，在苗族侗族民間常用作滋補(bǔ)品與肉類食物共同燉煮食用，作為強(qiáng)身健體的食藥，黔東南自治州亦為太子參栽種地區(qū)；但未見黔東南州太子參質(zhì)量的相關(guān)對(duì)比研究報(bào)道，州不同產(chǎn)地的太子參皂苷的含量可能具有差異性；據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，皂苷類化合物的提取一般的提取方法通常有回流提取法、索式提取法、超聲提取法等，前2種提取方法較為繁瑣，且超聲提取提取法樣品的吸收度與前2種方法差別不大，亦具有簡(jiǎn)單、快捷的特點(diǎn)[4]。因此，以人參皂苷Rb1為指標(biāo)，采用紫外分光光度法對(duì)黔東南州太子參中總皂苷進(jìn)行含量測(cè)定以確保藥材的質(zhì)量和初步探索其適宜栽種地區(qū)具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義，同時(shí)，為全面評(píng)價(jià)太子參藥材質(zhì)量提供參考材料。

1 儀器與材料

1.1 儀器:紫外分光光度計(jì)(型號(hào)：GBC Cintra 20，廠家：澳大利亞照生公司)，臺(tái)式超聲波清洗器(型號(hào)：科導(dǎo)SK8210HP，廠家：上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，十萬分之一電子天平(型號(hào)：Sartorius，廠家：德國賽多利斯)，量筒，移液管，洗耳球，燒杯，玻棒等。

1.2 材料:人參皂苷Rb1對(duì)照品(批號(hào)：150312-201502，中國藥品生物制品檢定所)；濃硫酸(批號(hào)：20130531，廠家：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、甲醇(批號(hào)：20130101，廠家：重慶川東化工(集團(tuán))有限公司)、乙醇(批號(hào)：20130101，廠家：重慶川東化工(集團(tuán))有限公司)、冰醋酸(批號(hào)：20120815，廠家：四川西隴化工有限公司)、無水乙醇(批號(hào)：20130316，重慶川東化工(集團(tuán))有限公司)、香草醛(批號(hào)：791081，廠家：新華香料廠)等試劑均為分析純；太子參采自黔東南州麻江谷洞、凱里爐山、施秉縣牛大場(chǎng)、黃平縣舊州、黎平縣大稼、榕江縣樂里、三穗款場(chǎng)、從江加鳩、天柱邦洞9個(gè)地方太子參藥材樣品，均經(jīng)鑒定為石竹科植物孩兒參Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的干燥塊根。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的配制:精密稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品1.2mg，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成每1mL含0.12mg人參皂苷Rb1的對(duì)照品溶液。

2.2 樣品溶液的制備:取產(chǎn)自凱里爐山的太子參樣品粉末約0.2 g(過藥典七號(hào)篩)，精密稱定，加入無水乙醇30mL，超聲提取120min，濾過，取續(xù)濾液5mL于蒸發(fā)皿中，水浴揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0mL量瓶中，作為供試品溶液以備用。

2.3 顯色方法及測(cè)定波長(zhǎng)的選擇:精密吸取人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液0.5mL至具塞試管中，水浴揮干溶劑，以空白試劑作為對(duì)照，加入新配制的8%香草醛-乙醇溶液0.2 mL，搖勻，加入60%硫酸溶液5mL，混勻后于60℃水浴中保溫20min，取出，冷卻，于200～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,選取最大吸收波長(zhǎng)560 nm為測(cè)定波長(zhǎng)，見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:分別精密吸取對(duì)照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6 mL，分別置于10mL具塞試管中，隨行試劑做空白對(duì)照，參照“2.3”項(xiàng)下自“水浴揮干溶劑”起依法操作，在560 nm處測(cè)定吸光度，以對(duì)照品含量(mg)(X)為橫坐標(biāo)，吸光度(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖2)，并計(jì)算回歸方程得：Y=0.0089X+0.0470，r=0.9992。結(jié)果表明人參皂苷Rb1對(duì)照品濃度在6-96μg·mL-1范圍內(nèi)，結(jié)果見表1，圖2。

表1 線性關(guān)系考察表

濃度(μg·mL-1)61224487296吸光度0．0960．1590．2640．4660．7050．899

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液0.5mL于具塞試管中，平行6份，參照 “2.3”項(xiàng)下自“水浴揮干溶劑”起依法操作，在560nm處測(cè)定吸光度，檢測(cè)吸光度結(jié)果分別為0.312，0.310，0.309，0.315，0.312，0.314，平均為0.312 ，RSD為0.73%，表明精密度較好，見表2。

表2 精密度考察表

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):精密吸樣品溶液0.5ml于具塞試管中，參照“2.3”項(xiàng)下自“水浴揮干溶劑”起依法操作，顯色后不同時(shí)間測(cè)定其吸光度變化，放置15min、30min、45min、60min、90min、120min、150 min后，分別測(cè)定其吸光度，測(cè)定結(jié)果分別為0.258、0.267、 0.265、0.270、0.261 、0.269，平均0.265，RSD為1.77%，結(jié)果表明此顯色反應(yīng)在15～150 min內(nèi)穩(wěn)定，見表3。

表3 穩(wěn)定性考察表

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn):取同一批凱里爐山太子參樣品，精密稱取6份樣品0.200g、0.202g、0.199g、0.201g、0.199g、0.202g，照樣品溶液制備方法制備,精密吸取各樣品溶液0.5mL，參照“2.3”項(xiàng)下自“水浴揮干溶劑”起依法操作，在560 nm處測(cè)定吸光度，測(cè)定結(jié)果分別為0.260、 0.259、0.264、 0.270、0.269、 0.265，平均值0.266，RSD為1.70%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性較好，見表4。

表4 重復(fù)性考察表

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn):取已知含量的凱里爐山太子參樣品精密稱0.099g、0.102g、0.105g、0.103g、0.109g、0.101g、0.103g、0.100g、0.108g,分別加入上訴配制的人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液：6.25mL人參皂苷Rb1對(duì)照品，照供試品溶液制備方法制備加樣回收供試品溶液，精密吸取各樣品溶液適量，參照“2.3”項(xiàng)下自“水浴揮干溶劑”起依法操作，在560nm處測(cè)定吸光度。加樣回收率為97.97% ，RSD為1.35%，見表5。

表5 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.9 樣品中總皂苷的含量測(cè)定:精密稱取各地樣品粉末0.200g左右照樣品溶液的制備方法制備，平行6份，吸取各樣品溶液適量于具塞磨口試管中, 參照“2.3”項(xiàng)下自“水浴揮干溶劑”起依法操作，隨行試劑做空白,在560 nm處測(cè)定樣品液的吸光度值，計(jì)算不同產(chǎn)地太子參樣品中總皂苷的含量。貴州省不同產(chǎn)地太子參藥材總皂苷含量測(cè)定結(jié)果見表6。

表6 黔東南不同地方太子參總皂苷含量測(cè)定結(jié)果表

3 討論

經(jīng)查閱《中華人民共和國藥典》和參考文獻(xiàn)，太子參總皂苷含量測(cè)定中缺少從太子參中分離得到的對(duì)照品，所以考慮選擇化學(xué)結(jié)構(gòu)相近的人參皂苷Rb1為對(duì)照品,皂苷類與香草醛-硫酸反應(yīng)在可見區(qū)均能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。

實(shí)驗(yàn)采用香草醛-硫酸顯色法來測(cè)定太子參中總皂苷含量，在顯色反應(yīng)過程中，吸光度會(huì)隨著水浴溫度和加熱時(shí)間的變化而變化，因此通過考察不同的顯色溫度(50，55，60，65，70℃)、顯色時(shí)間(5，10，15，20，25，30 min)，確定水浴溫度60℃，加熱顯色時(shí)間20 min。采用此法來測(cè)定太子參中總皂苷的含量，操作方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、結(jié)果可靠，可以作為太子參總皂苷的質(zhì)量控制方法。

黔東南9個(gè)產(chǎn)地樣品中太子參總皂苷含量在0.20%～0.70%，我州施秉縣牛大場(chǎng)的太子參總皂苷含量最高0.70%，而黎平大稼太子參總皂苷含量為0.2%；施秉、黃平、凱里以及麻江一帶太子參總皂苷含量總體較高。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部[S].中國醫(yī)藥科技出版社,2015,68.

[2]劉訓(xùn)紅,韓樂,王麗娟,等.太子參藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥房,2010,19(21):1969.

[3]陳耀金,陳建洪,劉偉招,等.太子參膠囊增強(qiáng)免疫力作用實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥臨床雜志,2015,27(8):1172-1174.

[4]陳蔚東,劉知遠(yuǎn),蔡小楓,等.太子參總皂苷含量測(cè)定方法的研究[J].海峽藥 學(xué),2014,26(6):78.

DeterminationoftheTotalSaponinContentinRadixPseudostellariaebyUVspectrophotometryfromQiandongnandifferentRegions

Liu Guang-hai Wu ting-zhu Wangwen-chun

Qian dong nan prefecture hospital of Chinese Medicine, Guizhou Kaili 556000

Objective To determine the content of total saponins in different areas of Qiandongnan county seat in Radix Pseudostellariae, providing the reference for the analysis of the quality of Radix pseudostellariae. Methods: with ginseng saponin Rb1 as control, the total saponins was determined by UV spectrophotometry. Results: the content of total saponins in Guizhou Province 9 samples from different habitats in 0.20% ～ 0.70%, the range of the spotting recovery rate was 97.97%,RSD was 1.35%. Differences in the content of total saponins in Radix Pseudostellariae from different habitats was small, and the content of total saponins in Qiandongnan Shibing County cattle big is supreme. Conclusion: this method is accurate and reliable, and can be used as the quality of Radix Pseudostellariae analysis method.

Radix Pseudostellariae，total saponins，UV spectrophotometry

R29

B

1006-6810(2017)06-0045-03

2017年月日收稿