藏藥材勒哲的質量標準研究△

2017-12-22 03:17:20東知多杰多杰拉旦賽桑杰馬志良尼瑪才讓何長廷才增卓瑪

中國民族醫藥雜志 2017年6期

東知多杰多杰拉旦賽桑杰馬志良尼瑪才讓何長廷才增卓瑪

(1.青海省藏醫藥研究院，青海西寧 810016；2.藏藥研發國家重點實驗室，青海西寧 810016)

項目名稱：懸鉤木等三種常用藏藥材的質量標準研究項目編號：2015-ZJ-910

藏藥材勒哲的質量標準研究△

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(1.青海省藏醫藥研究院，青海西寧 810016；2.藏藥研發國家重點實驗室，青海西寧 810016)

目的：建立藏藥材勒哲質量標準。方法采集不同產地的10批藥材進行采用基源考證、以勒哲藥材為對照組，建立本品的顯微鑒別和薄層色譜鑒別、含量測定方法。結論該方法簡便、可行、操作性強。

藏藥；鑒別；含量測定

本品為防己科植物勒哲(中華青牛膽)Tinospora sinensis (Lour.)Merr.的干燥莖，生長于青海、西藏、云南、廣東、廣西；分布于錫金、印度、斯里蘭卡和中南半島北部。該藥材味甘、苦、澀、辛。具有治風熱，除時疫熱，效緩，能調和和合紊亂，治衰老病，風濕病等常用藥材。勒哲始載于8世紀藏醫學經典著作《四部醫典》。續而《藍琉璃》、《晶珠本草》等藏醫經典著作以及其它醫學專著均予收載，沿用至今[1-2]。本文對藏藥材勒哲進行化學成分分析、活性成分研究，建立藏藥材勒哲的鑒別方法和含量測定方法，為提高勒哲質量標準提供科學的依據[3]。

1 儀器、試劑及材料

1.1 儀器：顯微鏡(型號：BX51日本奧林巴斯)；電子天平(型號：AE200瑞士梅特勒)；電熱恒溫干燥箱(型號：GZX—DH．500—BS—Ⅱ 上海躍進醫療器械廠)；雙槽薄層展開缸(規格100×100mm)；三用紫外分析儀(型號：ZF—2上海市安亭電子儀器廠)；數控超聲波清洗器(型號：KQ—500D昆山市超聲波儀器廠)；OLYMPUS FSX100倒置顯微鏡。

1.2 試劑：乙醇(AR)、環己烷(AR)、乙酸乙酯(AR)、甲酸、涂層厚度0.20～0.25mm，規格100×100mm，青島海洋化工廠分廠，批號：2014年6月12日；點樣毛細管(直徑0.3mm，長100mm)、苯(AR)、古倫賓為對照品(中國藥品生物制品檢定院)、石油醚(60-90℃) (AR)、冰乙酸(AR)、硫酸(AR)、香草醛等。試驗用水均為純化水，符合《分析實驗室用水規格和試驗方法》(GB/T6682—2008)及《中國藥典》2015年版二部純化水的要求。水合氯醛試液。

1.3 材料：通過實地調查目前市場，收集來自不同地方的10批勒哲藥材，經基源鑒定為防己科中華青牛膽Tinospora sinensis(Lour.)Merr.以藤莖入藥。見表1。

表1 勒哲藥材收集情況

2 顯微鑒別

選取具有代表性的勒哲原植物樣本，對其粉末(過80目篩)進行了制片觀察，記錄了相關特征。對比分析了它們的典型共有特征，特別是粉末中規則結晶物的特征，并通過2015版《中國藥典》中粉末鑒別常見結晶物的鑒別反應確定了勒哲藥材粉末結晶物的種類[3]。

該藥材粉末呈淺黃色。木栓細胞類方形或類長方形，黃棕色。草酸鈣簇晶較多，棱角圓鈍或棱角稍尖，大小不等。木纖維成束或單個散在，韌皮纖維較粗，具網紋導管。

結果見圖1。

3 薄層色譜鑒別[4]

取勒哲藥材粉末1.0g，加甲醇20 mL，超聲60min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，取濾液作為供試品溶液。另取古倫賓對照品，加甲醇制成每1 mL各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述3種溶液各2μl，分布點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨(10:9:6:1)為展開劑，置避光處展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的顏色斑點。結果見圖2。

4 含量測定[5-7]

4.1 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以含0.1%磷酸水溶液為流動相B，以乙腈-0.1%磷酸水溶液=20：80等度洗脫；檢測波長：210 nm；理論塔板數按古倫賓計算應不低于5000。結果見圖3。

4.2 溶液配置

4.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取對照品古倫賓5.0mg，用乙腈溶于100 mL量瓶中，加乙腈定容至刻度，搖勻，得古倫賓0.05mg/ mL的對照品儲備液。

4.2.2 供試品溶液的制備：取勒哲藥材粉末0.500g藥材粉末0.500g于100 mL具塞三角瓶中，加甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲40min，放涼后，密塞，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

4.3 含量測定方法學考察

4.3.1 標準曲線：精密吸取古倫賓0.05mg/ mL的對照品溶液，等倍稀釋為原溶液濃度的1、1/2、1/4、1/8、1/16倍，按照上述色譜條件測定各色譜峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，古倫賓含量為橫坐標，進行線性回歸，得到回歸曲線。

古倫賓回歸曲線方程及相關系數：Y = 137509x - 2549，r=0.9996；測定結果表明，古倫賓在3.13～50μg/ mL范圍內呈良好的線性關系。

4.3.2 方法的準確性：對已測定指標成分古倫賓含量的樣品，即樣品LZ-1中古倫賓含量為0.19mg/g；分別精密稱取9份樣品，每份樣品約稱量0.5g，分別加入約0.5、1.0和2.0倍指標成分總量的對照品，按照樣品溶液制備方法和優化的色譜條件分析，計算指標成分的3種加入量的回收率。從古倫賓加樣回收率表格可以看出，本研究所建立的含量測定方法有較好的準確度。數據見表2。

表2 古倫賓加樣回收試驗結果

4.3.3 儀器精密度：精密吸取含古倫賓0.05mg/ mL的對照品溶液5μL，重復進樣6次，記錄峰面積，計算RSD值，結果見表3。結果表明，在該條件下，峰面積的儀器精密度良好。

表3 含量測定方法峰面積精密度實驗數據

4.3.4 重復性：精密稱取同一批樣品(LZ-1)6份，每份約0.500g，依照5.2項下供試品處理方法進行處理制成待測溶液，進樣，測定各指標成分含量并計算6份樣品各指標成分含量的RSD %值，從表4的數據可以看出本論文建立的定量檢測方法的重復性對古倫賓同一批6個樣品的含量的RSD%都在3.0%以下，顯示了較好的重復性。結果見表4。

表4 樣品中指標成分檢測方法的重復性試驗數據

4.3.5 穩定性：取同一批供試品溶液，按含量測定法分別在0，4，8，12，24 h進樣，測定樣品中古倫賓成分的含量。計算RSD為1.42%。實驗表明，供試品溶液24h內穩定性良好。

4.3.6 檢出限：根據藥典委員會“中藥分析方法驗證指導原則實施細則”中檢測限研究的信噪比法進行了古倫賓指標成分檢測限的研究。即：先進1針空白溶劑，測出噪音，進已知濃度的對照品，根據其對應的峰高值，將對照品溶液稀釋至約3倍信噪比的濃度，該濃度即為檢測限。結果表明，古倫賓的檢出限為0.6μg/ mL。

4.3.7 定量限：根據藥典委員會“中藥分析方法驗證指導原則實施細則”中定量限研究的信噪比法進行了古倫賓指標成分檢測限的研究。即：先進1針空白溶劑，測出噪音，進已知濃度的對照品，根據其對應的峰高值，將對照品溶液稀釋至約10倍信噪比的濃度，重復進樣6次，計算峰面積的RSD值，此濃度即為定量限。結果表明古倫賓的定量限為2.0μg/ mL。