薄層色譜法檢查藏藥二十味沉香丸中士的寧的限量方法研究

格 央 貢 布

(西藏自治區(qū)藏醫(yī)藥研究院，西藏 拉薩 850000)

薄層色譜法檢查藏藥二十味沉香丸中士的寧的限量方法研究

格 央 貢 布

(西藏自治區(qū)藏醫(yī)藥研究院，西藏 拉薩 850000)

目的：建立二十味沉香丸中士的寧的限量檢查方法。方法用薄層色譜法對(duì)該處方中的士的寧做了限量檢查。結(jié)果薄層斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，空白對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單易行，可以有效控制本處方中的士的寧限量。

藏藥；馬錢(qián)子；士的寧；薄層色譜法；限量檢查

二十味沉香丸是由沉香、丁香、肉豆蔻、藏木香、馬錢(qián)子(制)等20味藥材加工制成的復(fù)方制劑，為藏族經(jīng)典驗(yàn)方，已有300多年的歷史。具有調(diào)和氣血，安神鎮(zhèn)靜之功效。用于偏癱，高血壓，神志紊亂，口眼歪斜，肢體麻木，失眠。原方收載于《中華人民共和國(guó)藏藥標(biāo)準(zhǔn)》(1995年)中，標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)對(duì)士的寧的限量檢查，為了保證用藥安全性，故對(duì)本方中的士的寧限量檢查方法，做了如下研究。

1 儀器與試藥

士的寧對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，11075-200306)；二十味沉香丸、空白對(duì)照(由西藏自治區(qū)藏醫(yī)院制劑室提供)；濃氨試液、三氯甲烷、硅膠G薄層板(青島海洋化工廠(chǎng)分廠(chǎng))。試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取細(xì)粉10g，置具塞錐形瓶中，精密加三氯甲烷50mL，濃氨試液4mL，密塞，輕輕振搖，稱(chēng)定重量。放置24h，再稱(chēng)定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過(guò)，全部濾液置分液漏斗中，用硫酸溶液(3→100)振搖提取5次，每次20mL，合并硫酸提取液，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用三氯甲烷振搖提取5次，每次20mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，放冷，殘?jiān)尤燃淄?.5mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2 空白對(duì)照液的制備：取空白對(duì)照藥10g，按上述方法制成空白對(duì)照液、空白加對(duì)照品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備：取士的寧對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.4 方法： 照薄層色譜法(中國(guó)藥典，2010年，一部附錄VI B) 試驗(yàn)，精密吸取上述供試品溶液、空白對(duì)照液各3μL和對(duì)照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇(16.5:2.5)(濃氨水飽和層析缸)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，出現(xiàn)的斑點(diǎn)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)，且顏色淺于對(duì)照品斑點(diǎn)。空白對(duì)照未見(jiàn)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3 方法學(xué)考察

3.1 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取6批本品，依法檢查。結(jié)果薄層色譜斑點(diǎn)清晰，且供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，出現(xiàn)的斑點(diǎn)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)顏色淺于對(duì)照品斑點(diǎn)。表明方法重現(xiàn)性良好。見(jiàn)圖2。

3.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)：照薄層色譜法(中國(guó)藥典，2010年，一部附錄VI B ) 試驗(yàn)。精密吸取供試品溶液、空白對(duì)照液各3μL和對(duì)照品溶液5μL，按2.4項(xiàng)下方法操作，檢視斑點(diǎn)大小及顏色。結(jié)果在空白對(duì)照液色譜中，與對(duì)照品溶液色譜斑點(diǎn)相同位置上不出現(xiàn)斑點(diǎn)，其他斑點(diǎn)則與供試品溶液色譜相同，說(shuō)明空白無(wú)干擾，方法專(zhuān)屬性好。見(jiàn)圖3。

3.3 回收試驗(yàn)：取空白樣品10g，加入對(duì)照品溶液1mL(2.5mg/mL)，照供試品溶液制備方法制備溶液，分別精密吸取該溶液1、2、3、4、5μL以及對(duì)照品溶液5μL，依法檢查。溶液色譜中，在與對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)顏色隨點(diǎn)樣量增加而加深。見(jiàn)圖4。

4 討論

4.1 馬錢(qián)子為常用藥材，具通絡(luò)止痛，散結(jié)消腫之功效。其主要成分亦即主要毒性成分士的寧(番木鱉堿)，成人用5～10mg即可發(fā)生中毒現(xiàn)象，30mg可致死。本品排泄緩慢，有蓄積作用，故使用不宜過(guò)長(zhǎng)。藥典中，對(duì)其含量有限度要求，本文采用薄層色譜法對(duì)其限度進(jìn)行控制，方法簡(jiǎn)單易行，對(duì)本方質(zhì)量控制有較好的效果。

4.2 提取方法的選擇：用堿性三氯甲烷超聲提取的方法，雖操作簡(jiǎn)便，但薄層色譜圖中供試品色譜斑點(diǎn)不清晰，受其他組分干擾明顯，且不易點(diǎn)樣。因此，參照《中國(guó)藥典》中仁青芒覺(jué)[含量測(cè)定]項(xiàng)下的提取方法提取供試品，供試品色譜斑點(diǎn)清晰，未見(jiàn)其他成分干擾，故確定采用該提取方法。

4.3 展開(kāi)系統(tǒng)的選擇：根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，試驗(yàn)了5種展開(kāi)系統(tǒng)。Ⅰ甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液(4:5:0.6:04)；Ⅱ乙酸乙酯-甲醇-濃氨水(16.5:2.5:1)；Ⅲ 乙酸乙酯-甲醇(16.5:2.5)，濃氨水飽和層析缸；Ⅳ乙酸乙酯-甲醇-濃氨水(17:2:1)、Ⅴ環(huán)己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5:4:1)等展開(kāi)系統(tǒng)。因乙酸乙酯-甲醇(16.5:2.5)，濃氨水飽和層析缸展開(kāi)效果最佳，選Ⅲ系統(tǒng)。其他展開(kāi)系統(tǒng)分離效果尚可，但受溫度影響較大，致Rf值略小。

4.4 點(diǎn)樣量限度的確定：參考《中藥大辭典》：成人用鹽酸士的寧5-10mg即可發(fā)生中毒現(xiàn)象，確定士的寧對(duì)照品的點(diǎn)樣量為5μL(1mg/mL)，供試品溶液的點(diǎn)樣量3μL(4g/mL)，即相當(dāng)于2日服用量與對(duì)照品斑點(diǎn)對(duì)比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3μL供試液斑點(diǎn)與5μL對(duì)照品斑點(diǎn)比較，供試液斑點(diǎn)比對(duì)照品斑點(diǎn)小，所示本品士的寧用量在安全范圍以?xún)?nèi)。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1986:293.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部,北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]田薇，陳朝暉，等，薄層色譜法檢查仁青芒覺(jué)膠囊中烏頭堿、士的寧的限量[J].甘肅省化學(xué)會(huì)成立六十周年學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)暨二十三屆年會(huì)論文集.

[4]孫桂明,史丁一,張曉燕,等.對(duì)2005年版《中國(guó)藥典》一部馬錢(qián)子及其制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的幾點(diǎn)修訂建議[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006,7(5).

格央，女，36歲，主管藥師，現(xiàn)供職于西藏自治區(qū)藏醫(yī)藥研究院，主要從事藏藥研究。

R291.4

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1006-6810(2017)05-0040-03

2017年1月13日收稿