正交試驗優(yōu)選蒙藥烏珠莫口服液制備工藝

宋曉玲 潘俊英 閆 暾 宋 淼 劉全禮*

(1.包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2.呼和浩特市中蒙醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010030)

工藝與制備

正交試驗優(yōu)選蒙藥烏珠莫口服液制備工藝

宋曉玲1潘俊英2閆 暾1宋 淼1劉全禮1*

(1.包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2.呼和浩特市中蒙醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010030)

目的：用正交試驗法優(yōu)選烏珠莫口服液的制備工藝。方法在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選取烏珠莫口服液的提取次數(shù)、醇沉濃度、pH值為考察因素和水平，以甘草酸的含量作為指標，正交試驗設(shè)計優(yōu)化烏珠莫口服液的制備工藝。結(jié)果烏珠莫口服液的最佳制備工藝為溶劑用量為10倍量水，提取次數(shù)2次，醇沉濃度為70%，pH值為5.0，此條件下制備的烏珠莫口服液中甘草酸含量為1004.61 mg·L-1。結(jié)論優(yōu)化得到的烏珠莫口服液穩(wěn)定、制備工藝可靠，沉淀較少。

烏珠莫;口服液;正交試驗;制備工藝

烏珠莫口服液為內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范2007版(第一冊)所收載[1]。處方由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院提供，全方由甘草32kg、紅花12kg、石榴皮20kg、木香24kg、沙棘29kg、梔子10kg、白葡萄干40kg、香附23kg、石膏24kg、肉桂12kg 10味藥材組成的口服制劑，具有清肺、止咳、化痰、定喘等功效，主要用于感冒咳嗽、急慢性支氣管炎、肺炎等病癥。原規(guī)范記載制備工藝缺少部分具體制備工藝參數(shù)，我們對其制備工藝進行研究，以期獲得有效成分含量高、沉淀較少、質(zhì)量穩(wěn)定的口服液制劑。本研究以方中主藥甘草中的甘草酸為主要考察指標，采用正交試驗法進行了烏珠莫口服液工藝條件的優(yōu)選，確定了最佳制備工藝條件。

1 材料與儀器

1.1 材料： 甘草酸對照品(含量測定用，批號：111685-200802 ) 由中國藥品生物制品檢定研究院提供；處方中所有藥材均購于內(nèi)蒙古華聚醫(yī)藥有限責任公司，經(jīng)生藥教研室董永和鑒定均為符合2015版《中國藥典》規(guī)定的合格藥材及飲片；乙醇(分析純，南京化學(xué)試劑有限公司)，乙腈(色譜純，德國默克公司)，水(杭州娃哈哈公司)，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器： 高效液相儀及其色譜工作站LC-20AT，CBM-20A9 (島津企業(yè)管理(中國)有限公司)；DGG-9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海森信試驗儀器有限公司)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；BS2242S 電子天平(北京賽多利斯器系統(tǒng)有限公司)；DHT型磁力加熱攪拌電熱套(山東甄城華魯電熱儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備方法： 將以上藥材分別粉碎成粗粉。稱取處方量的肉桂、木香、香附藥材粗粉，置1000mL圓底燒瓶，10倍蒸餾水浸泡后，圓底燒瓶上連接揮發(fā)油提取器和回流冷凝器，進行加熱回流提取，揮發(fā)油及提取液備用。剩余藥渣與剩余處方量的藥材粗粉一同置5000mL圓底燒瓶，適量蒸餾水浸泡后，回流提取。合并提取液，過濾。提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至相對密度為1.10、醇沉、靜置、濾過。濾液回收乙醇至無醇味，加入揮發(fā)油、調(diào)節(jié)液體總量至200mL，靜置、過濾，用NaOH調(diào)節(jié)pH，分裝，既得。

2.2 甘草酸的含量測定： 采用HPLC測定甘草酸的含量[2]。

2.2.1 色譜條件：Diamonsil C18色譜柱(250mm*4.6mm，250μm)；流動相：甲醇(A)-0.2moL·L-1醋酸銨溶液(B)-冰醋酸(C)(66:33:1)；流速：1.0mL·min-1;檢測波長：250nm；柱溫：25℃；進樣量：20μl。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液：取甘草酸單銨對照品10.215mg于50mL容量瓶中，精密稱定，加甲醇配成204.3μg·mL-1的對照品溶液(甘草酸單銨對照品20μg，折算成甘草酸19.32μg)。

2.2.2.2 供試品溶液： 精密量取烏珠莫口服液2.0mL，置于水浴上蒸干，加入甲醇使溶解、定容、濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗： 取對照品溶液、供試品溶液適當稀釋在上述色譜條件進樣25μL，得HPLC圖譜，結(jié)果見圖1。可知甘草酸單銨保留時間約為12.7min，基線平穩(wěn)，甘草酸單銨與其它組分分離較好，理論塔板數(shù)以甘草酸單銨計算為3000。

2.2.4 線性關(guān)系考察： 精密稱取“2.2.2”項下的甘草酸單銨對照品貯備液加甲醇稀釋成質(zhì)量濃度為4.086μg·mL-1、8.172μg·mL-1、16.344μg·mL-1、32.688μg·mL-1、49.032μg·mL-1、65.376μg·mL-1的一系列對照品溶液，按2.2.1項下色譜條件進行測定，以峰面積積分值為縱坐標、樣品質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準曲線。結(jié)果表明甘草酸單銨進樣濃度在4.086～65.376μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。回歸方程為Y=22.87X-112.9(r=0.9998)

2.2.5 精密度試驗： 取上述甘草酸對照品貯備液按上述色譜條進行測定6次，記錄峰面積A，計算RSD值，結(jié)果RSD值為1.38% ，說明該儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗： 取供試品溶液，分別在0h，2h，4h，8h，12h，24h進樣，連續(xù)測定甘草酸的峰面積A，計算RSD值為0.85%，表明供試品液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 回收率試驗： 取甘草酸對照品溶液6份，各加入當量的甘草酸對照品，甲醇定容至刻度HPLC測定，計算平均回收率101.8%，RSD為0.45%(n= 6)。說明該方法穩(wěn)定性良好。

2.3 制備工藝的單因素試驗

2.3.1 溶劑用量對烏珠莫口服液中甘草酸的影響： 以水為提取溶劑，加水量分別是藥材量的6倍，8倍，10倍，12倍，14倍，16倍，18倍，20倍，按照2.1項下制備方法操作，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結(jié)果見圖2。

由圖2可知，在加水量10倍以上時，烏珠莫口服液中甘草酸的含量變化不大，故選擇加水量10倍，12倍，14倍為正交試驗加水量因素的3個水平。

2.3.2 提取次數(shù)對烏珠莫口服液中甘草酸的影響 固定溶劑用量為10倍量水，提取次數(shù)分別為1次、2次、3次、4次、5次，按照2.1項下制備方法操作，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結(jié)果見圖3。

由圖3可知，提取次數(shù)對烏珠莫口服液中甘草酸的含量影響變化并沒有明顯趨勢范圍，故選擇提取次數(shù)為1、2、3次作為正交試驗提取次數(shù)因素的3個水平。

2.3.3 醇沉濃度對烏珠莫口服液中甘草酸的影響 ： 固定溶劑用量為10倍量水，提取次數(shù)為3次，按照2.1項下制備方法操作，醇沉濃度分別為40%、50%、60%、70%、80%、90%，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結(jié)果見圖4。

由圖4可知，醇沉濃度對烏珠莫口服液中甘草酸的含量影響較大，當醇沉濃度大于70%時，甘草酸含量明顯下降，可能是大量沉淀包裹有效成分所致，而醇沉濃度為40%時沉淀較少，口服液較渾濁，說明雜質(zhì)較多；故選擇醇沉濃度為50%、60%、70%作為正交試驗因素的3個水平。

2.3.4 pH對烏珠莫口服液中甘草酸的影響： 固定溶劑用量為10倍量水，提取次數(shù)為3次，按照2.1項下制備方法操作，醇沉濃度為60%，HPLC測定烏珠莫口服液中甘草酸的含量。結(jié)果表明隨pH值增加，甘草酸含量下降，當pH超過6.0時，藥液顏色明顯加深且有沉淀產(chǎn)生，說明pH值高藥液不穩(wěn)定。因此將pH值定為5.0～6.0為宜。

2.4 正交試驗設(shè)計[3]：烏莫口服液制備工藝中，將提取揮發(fā)油后剩余藥渣與剩余處方量的藥的后續(xù)制備工藝采用正交試驗設(shè)計優(yōu)化。在單因素考察的基礎(chǔ)上，選擇提取次數(shù)，溶劑用量、醇沉濃度、pH為烏珠莫口服液的提取工藝影響因素。并對每個因素設(shè)立3個水平，因素水平見表1，按正交試驗表L9(34)安排試驗，試驗設(shè)計及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 烏珠莫口服液制備工藝優(yōu)選因素水平表

表2 烏珠莫口服液制備工藝正交試驗設(shè)計表

表3 甘草酸含量方差分析表

由表2極差可知，各因素對烏珠莫口服液中甘草酸含量的影響由大到小的順序依次為B>C>A>D；由表3方差分析表明，因素B、C對甘草酸含量的影響差異有統(tǒng)計學(xué)意義，因此，因素B選擇2水平、因素C選擇3水平，因素A、D對甘草酸含量的影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義，從節(jié)約成本考慮，溶劑用量選低水平，從單因素考察考慮口服液穩(wěn)定性，因素D選5.0；優(yōu)選水平組合為A1B2C3D1。即：烏珠莫口服液最佳制備工藝為加10倍量水提取，提取次數(shù)為2次，醇沉濃度為70%，調(diào)節(jié)pH至5.0。

2.5 驗證試驗： 按處方量稱取藥材，按優(yōu)選的制備工藝進行3次驗證試驗，結(jié)果甘草酸的含量分別為1004.61 mg·L-1、1097.25 mg·L-1、1113.78 mg·L-1，說明該優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

烏珠莫口服液由甘草、紅花、石榴皮、木香、沙棘、梔子、白葡萄干、香附、石膏、肉桂10味藥材組成的口服制劑，其中甘草為主藥且用量較大，因此選取測定甘草酸的含量作為制備工藝考察指標。實驗過程發(fā)現(xiàn)pH值會影響口服液的澄清度，一般口服液pH值在5～6.5時，其外觀質(zhì)量和口感均較好，本品因含沙棘果實等，果酸含量較多，pH較低(調(diào)節(jié)前實際測得4.2左右)，口感和穩(wěn)定性差；口服液的相對密度應(yīng)多在1.03～1.20(25℃)，大于1.20時口服液比較濃稠[4,5]，本實驗制備的烏珠莫口服液的相對密度為1.07，粘稠度適中。

應(yīng)用優(yōu)化的工藝制備的烏珠莫口服液外觀紅棕色，澄明度較好，熱壓滅菌后，室溫下放置4wk后，沉淀較少。

[1]內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范注釋一部.[S].2007

[2]中國藥典一部.[S].2015

[3] 斯欽,代那音臺,王青虎.蒙藥皂礬三味漱口液的提取工藝的研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2013(12):2910-2913.

[4]金國泰,李博,代龍.改善中藥口服液澄清度工藝研究進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013.15(12):245-247

[5]俞泉淑,蔣延明.中藥口服液的制備工藝及澄明度的影響因素[J].長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1995.11(49):53-54

宋曉玲(1978-)，女，碩士，講師，研究方向為中蒙藥制劑與質(zhì)量控制研究。Tel:13664874586 E-mail:songxiaoling0205@163.com

*通訊作者 劉全禮(1963-)，男，碩士，教授，研究方向為中藥制劑研究。Tel:13604720421 E-mail:lql04720421@sina.com

R291.2

A

1006-6810(2017)05-0070-03

2017年1月9日收稿