Neu-P11對急性高眼壓兔眼內壓的影響

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(1.常德市第一人民醫院檢驗科，湖南 常德 415000；2.衡陽市婦幼保健院重癥醫學科；3.南華大學心血管疾病研究所；4.以色列Neurim Pharmaceuticals Ltd)

·基礎醫學·

Neu-P11對急性高眼壓兔眼內壓的影響

張瑤1，吳鵬2,3，尹衛東3，賀鵬程3，田期先3，劉昌汶3，劉峰濤3，Moshe Laudon4，石金鳳3*

(1.常德市第一人民醫院檢驗科，湖南 常德 415000；2.衡陽市婦幼保健院重癥醫學科；3.南華大學心血管疾病研究所；4.以色列Neurim Pharmaceuticals Ltd)

目的研究吡羅美拉汀(Neu-P11)對急性高眼壓兔眼內壓的影響。方法采用特倫德倫伯臥位法建立急性高眼壓模型兔。建模后將33只急性高眼壓新西蘭大白兔分為局部給藥組和全身給藥組，給予生理鹽水，褪黑素(Mel)和不同劑量的Neu-P11處理，局部給藥通過眼角膜滴注固定體積(10 μL)藥物進行給藥，全身給藥通過灌胃固定體積(1 mL)藥物進行給藥，給藥后平位休息2 h，然后再次置于臥位45 min，平位每小時測量一次眼內壓，連續監測6 h，重復實驗一周。結果新西蘭大白兔經Trendelenburg臥位誘導后，眼內壓約升高為正常組的1.9倍。局部給藥組經Neu-P11和Mel治療后眼內壓明顯降低(P<0.05)，且Neu-P11低濃度治療組比高濃度組效果更佳。全身給藥組Neu-P11和Mel均可明顯降低眼內壓，且Neu-P11對眼壓的影響存在劑量依賴性，Neu-P11濃度越高眼內壓下降速度越快。結論Neu-P11和褪黑素均具有降低急性高眼壓兔眼內壓的作用。

Neu-P11； 褪黑素； 眼內壓

青光眼、白內障和黃斑變性是導致視力喪失的三個常見原因，是全球第二大不可逆轉的致盲疾病[1]。盡管引起青光眼的因素有很多，但眼壓升高毫無疑問是最主要的原因[2]。吲哚類神經內分泌激素褪黑素(Melatonin,Mel)，具有抗氧化、抗炎和降低眼內壓等廣泛的生物學作用，可以作為黃斑變性、青光眼以及心血管疾病的一種輔助治療藥物[3-4]。然而褪黑素藥物化學合成提取相當困難復雜，且有半衰期短、個體差異大等不足。Neu-P11(Piromelatine,N-(2-(5-methoxy-1H-indol-3-yl)ethyl)-4-oxo-4H-pyran-2 carboxamide)，是能夠克服以上缺陷的新型褪黑素非選擇性受體激動劑，具有抗抑郁、抗氧化和降低正常新西蘭大白兔眼內壓等的作用[5-7]。但Neu-P11是否能降低高眼壓動物的眼內壓目前尚未清楚。

1 材料與方法

1.1動物和材料健康新西蘭大白兔33只(購自南華大學動物部，體重為2～3 kg)，喂以普通飼料，自由飲水與進食(通風，溫度18～25 ℃，濕度40%，光照與黑暗時間各12 h)。Tonopen XL接觸式眼壓計購自美國Reichert公司，Neu-P11和褪黑素由以色列Neurim Pharmaceuticals Ltd公司提供。

1.2高眼壓模型建立與分組模型建立采用Trendelenburg臥位(頭低腳高80°位置)法，即每天上午固定時間(8∶00～9∶00 am)，動物被置于Trendelenburg臥位并監測眼壓(測量20 min內眼壓值，每 5 min測一次眼壓，共測量4次，取最大值為高眼壓值)[4]。建模后將33只新西蘭大白兔分為局部給藥組和全身給藥組，局部給藥通過對眼角膜滴注固定體積(10 μL)藥物或生理鹽水進行局部滴眼給藥治療，分為正常組，高眼壓組，100 μmol/L Mel組，100 μmol/L Neu-P11組和200 μmol/L Neu-P11 組，每組3只[4,8]。全身給藥通過口服灌胃固定體積(1 mL)藥物進行治療，分為正常組，高眼壓組，10 mg/kg褪黑素組，10 mg/kg Neu-P11組，20 mg/kg Neu-P11 組，30 mg/kg Neu-P11 組[9]。每天建模后分別進行局部和全身給藥，給藥后休息2 h再次置于Trendelenburg臥位 45 min，置于平面連續監測6 h內眼內壓值，每小時測量一次，重復以上實驗一周。

1.3統計分析統計分析用SPSS18.0軟件，數據結果采用均數±標準差表示。One-way ANOVA比較多組均數，q檢驗比較兩組均數，P<0.05表示差異有顯著性。

2 結 果

2.1 Trendelenburg臥位建立新西蘭大白兔高眼壓模型采用Trendelenburg臥位建立急性高眼壓兔模型，結果如圖1所示，經Trendelenburg臥位誘導后，模型組新西蘭大白兔的眼內壓約升高為正常組新西蘭大白兔的1.9倍(P<0.01)，即成功建立新西蘭大白兔急性高眼壓模型。

圖1 Trendelenburg 臥位對新西蘭大白兔眼內壓的影響與正常組比較，** P<0.01

2.2 Neu-P11局部用藥對急性高眼壓兔眼內壓的影響建模后分別用100/200 μmol/L Neu-P11和100 μmol/L褪黑素進行局部滴眼(10 μL)治療，再次倒立置于平位連續測量6 h眼內壓值(每小時測量一次)，重復處理一周。結果如圖2所示，與高眼壓組相比，Neu-P11和褪黑素治療組急性高眼壓兔眼內壓明顯下降(P<0.05)。

圖2 Neu-P11局部用藥對急性高眼壓兔眼內壓的影響與高眼壓組比較,*P<0.05

2.3 Neu-P11全身給藥對急性高眼壓兔眼內壓的影響建模后分別選用10/20/30 mg/kg Neu-P11和10 mg/kg 褪黑素對高眼壓兔進行灌胃治療，再次倒立置于平位連續測量6 h眼內壓值(每小時測量一次)，重復實驗一周。眼內壓均值比較如圖3，與高眼壓組相比，Neu-P11和褪黑素治療組眼內壓值均顯著降低(P<0.05)，且隨著藥物Neu-P11的濃度升高，降低眼壓的作用越明顯。

圖3 Neu-P11全身給藥對急性高眼壓兔眼內壓的影響與高眼壓組比較，*P<0.05

3 討 論

青光眼伴隨著眼內壓慢性升高，是不可逆轉的失明的重要原因之一。眼壓升高會導致神經節細胞凋亡，是青光眼最主要的危險因素[10]。眼內壓增加與青光眼的發展密切相關，大量研究主要關注降低青光眼眼壓治療。目前高眼壓模型的建立多采用前房灌注加壓法[11]。但這種建立模型的方法較為復雜，且對眼球的傷害較大。因此，許多研究人員正在努力開發一些新型的動物模型治療青光眼。Martinez-Aguila[4]研究顯示，仰臥位即Trendelenburg臥位(頭低腳高80°位置)可以構建高眼壓模型，能克服以上方法的缺陷。本實驗采用Trendelenburg臥位(頭低腳高80°位置)構建高眼壓模型，即動物被置于Trendelenburg臥位(高眼壓狀態)并監測眼壓，每5分鐘測一次眼壓，取20分鐘內眼壓的最大值[4]。在急性高眼壓兔建模實驗中，模型組兔眼內壓約為正常組的189.5%(P<0.05)，即眼內壓升高了約0.9倍，提示成功建立急性高眼壓兔模型(圖1)。

褪黑素是一類具有調節晝夜節律和強效抗氧化作用的吲哚類神經激素。大量實驗研究已經證實眼組織有褪黑素的存在，尤其是在眼內組織[5]。褪黑素可以收集來自外界的光信號信息，再將信號傳給體內相關組織與器官，以便使它們的功能活動能夠適應外界環境的變化[12]。MT1，MT2和MT3是褪黑素主要的三種受體，MT1受體的激活可抑制促心血管收縮相關激素分泌，MT2受體主要與調節晝夜節律，調節視網膜多巴胺的釋放相關，MT3受體參與機體炎癥反應和眼內壓的調節。相關實驗研究表明，褪黑素可以調節眼內壓的平衡，其受體MT2和MT3參與眼內壓的調控[5]。褪黑素受體激動劑與褪黑素有類似功能，如以色列新開發的藥物Neu-P11。以往實驗表明，Neu-P11能夠降低兔正常狀態下的眼內壓[7]。本實驗首次使用Neu-P11來降低兔高眼壓狀態下的眼內壓，這為青光眼類疾病的防治提供了新的思路和實驗依據。高眼壓模型建立成功后，對高眼壓實驗兔給予為期一周的局部或全身給藥Neu-P11和褪黑素治療。結果顯示，局部滴眼給藥100/200 μmol/L Neu-P11和褪黑素(100 μmol/L)治療后眼內壓明顯降低，且100 μmol/L Neu-P11相較于200 μmol/L Neu-P11療效更佳(與高眼壓組相比,P <0.05)(圖2)。口服灌胃10/20/30 mg/kg Neu-P11和10 mg/kg褪黑素治療與局部滴眼給藥結果類似，均可明顯降低眼內壓，且Neu-P11對眼壓的影響存在劑量依賴性，Neu-P11濃度越高，眼內壓下降的速度越快(與高眼壓組相比,P<0.05) (圖3)。上述實驗結果表明Neu-P11和褪黑素治療均可降低急性高眼壓兔眼內壓。

綜上所述，Neu-P11與褪黑素作用相似，可以降低高眼壓狀態下的眼內壓，但還需對其具體機制進行研究。總之，Neu-P11對青光眼的防治有廣闊的發展前景。

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EffectsofNeu-P11onIntraocularpressureinacutehighIntraocularpressureRabbits

ZHANG Yao,WU Peng,YIN Weidong,et al

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople’sHospitalofChangde,Changde415000，Hunan,China)

ObjectiveTo investigate the effect of piromelatine (Neu-P11) on intraocular pressure (IOP) in acute high IOP rabbits.MethodsThe experiment used the Trendelenburg position to establish acute high IOP rabbit model.33 New Zealand white rabbits with IOP were divided into local treatment group and systemic treatment group.Local or systemic treatment group were treated with saline,melatonin(Mel) and different concentrations of Neu-P11.The fixed volume (10 μL) was dropped into the cornea in local treatment.The systemic treatment was administered by filling the stomach with drug of fixed volume (1 mL).Rest 2 hours after treatment in the flat supine position,then rabbits were placed in the Trendelenburg position for 45 min.And then,put rabbits in normal position and measured IOP every hour for 6 hours.Repeat the experiment for a week.ResultsIOP could increase about 1.9 times in the Trendelenburg position of New Zealand white rabbit (vs Normal group).Namely acute high IOP model was successfully established.IOP on local treatment with 100/200 μmol/L Neu-P11 or 100 μmol/L Mel significantly declined and the effect of 100 μmol/L Neu-P11 was better than 200 μmol/L Neu-P11.Similarly,IOP on local treatment with Neu-P11 and Melatonin could also be reduced,and the treatment of Neu-P11 was dose dependent,the higher the concentration of Neu-P11 was,the faster IOP declined.ConclusionsNeu-P11 and Melatonin could significantly reduce IOP of the acute high intraocular pressure rabbit.

Neu-P11; Melatonin; Intraocular pressure

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2017.05.010

2016-08-24；

2017-08-30

湖南省衛生計生委基金(No C2015-19) ;南華大學‘蒸湘學者計劃’資助(Xiangyang Tang)；南華大學“大學生研究性學習和創新性實驗計劃”( 2017XJYZ051 ；2017XJXZ037).

*通訊作者，E-mail：759843257@qq.com.

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蔣湘蓮)