李雪蓮,毛熙光,張蓓
(1.西南醫(yī)科大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院,四川 瀘州 646000;2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,四川瀘州 646000;3.江蘇省徐州市中心醫(yī)院,江蘇 徐州 221009)
RACK-1和Twist在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義
李雪蓮1,毛熙光2,張蓓3
(1.西南醫(yī)科大學(xué) 臨床醫(yī)學(xué)院,四川 瀘州 646000;2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,四川瀘州 646000;3.江蘇省徐州市中心醫(yī)院,江蘇 徐州 221009)
目的探討RACK-1和Twist在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法選取2006年5月-2010年6月在該醫(yī)院手術(shù)治療的宮頸癌患者70例,選取同期因?qū)m頸良性病變行腫物剝除或附件切除的20例患者作為對(duì)照,采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)70例宮頸癌組織(宮頸癌組)、70例宮頸癌癌旁組織(癌旁組)、20例正常宮頸組織(正常組)中Twist和RACK-1蛋白的表達(dá),分析其與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果①正常組、癌旁組、宮頸癌組的Twist陽(yáng)性率分別為5.0%(1/20)、22.9%(16/70)和95.7%(67/70),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);正常組、癌旁組、宮頸癌組的RACK-1陽(yáng)性率分別為10.0%(2/20)、61.0%(43/70)和90.0%(63/70),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②Twist表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)(P<0.05)。RACK-1表達(dá)與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)(P<0.05)。③Twist與RACK-1呈正相關(guān)(P<0.05)。④Twist高表達(dá)者和低表達(dá)者的5年總生存率分別為51.2%和29.2%[HR=11.637(95%CI:4.351,38.213)P=0.002];RACK-1高表達(dá)者和低表達(dá)者的5年總生存率分別為41.3%和35.3%[HR=10.143(95%CI:4.285,33.275)P=0.006]。結(jié)論Twist和RACK-1的表達(dá)升高與宮頸癌侵襲性增強(qiáng)關(guān)系密切,其表達(dá)水平可判斷宮頸癌患者的預(yù)后。
宮頸腫瘤;Twist;RACK-1;腫瘤浸潤(rùn)
宮頸癌占我國(guó)女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第1位,確診時(shí)多為晚期,預(yù)后較差,5年生存率僅為60%,有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的生存率更低。近年來,雖然手術(shù)治療及放、化療方案均有改進(jìn),患者的5年生存率有所改善,但遠(yuǎn)期生存率仍不能令人滿意。因此,針對(duì)腫瘤的增殖和侵襲性進(jìn)行基因治療非常有意義[1]。最新研究認(rèn)為,Twist是一種癌基因,與腫瘤細(xì)胞的凋亡關(guān)系密切,參與上皮細(xì)胞問質(zhì)轉(zhuǎn)換(epithelial-mesenchymal transition,EMT),參與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[2]。RACK-1是新近發(fā)現(xiàn)的蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)受體蛋白,在生物學(xué)反應(yīng),如細(xì)胞生長(zhǎng)分化轉(zhuǎn)移侵襲方面,發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[3]。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Twist和RACK-1蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá),探討兩者表達(dá)的相關(guān)性,以及表達(dá)強(qiáng)弱與宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系,旨在了解宮頸癌可能的發(fā)病機(jī)制,探索預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后新的腫瘤指標(biāo),并為宮頸癌的基因靶向治療提供新思路。
選擇2006年5月-2010年6月在西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科首次采取經(jīng)腹宮頸癌根治手術(shù)治療的70例宮頸癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):①所有患者經(jīng)組織病理學(xué)檢查,明確宮頸癌診斷;②臨床病歷資料完整;③患者術(shù)前未接受任何放、化療;④無(wú)心、腦、肝、腎等其他器官障礙。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他惡性腫瘤;②隨訪資料不完整或失訪。納入患者年齡22~74歲,平均(42.6±13.2)歲;宮頸鱗狀細(xì)胞癌59例,腺癌11例;按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ、Ⅱ期28例,Ⅲ、Ⅳ期42例;病理分化程度:高分化8例,中分化25例,低分化37例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。本研究中所有患者簽署知情同意書,并經(jīng)本院倫理道德委員會(huì)同意。
1.2.1 分組及隨訪將70例患者手術(shù)切除的宮頸癌組織作為宮頸癌組;70例患者取癌組織旁組織2 cm作為癌旁組;另取同期在本院因?qū)m頸良性腫瘤等行宮頸腫物剝除或附件切除術(shù)獲取的20例正常宮頸組織作為正常組。對(duì)70例宮頸癌患者進(jìn)行隨訪,隨訪截至?xí)r間為2015年7月1日,平均隨訪時(shí)間52.1個(gè)月。
1.2.2 Twist和RACK-1蛋白的檢測(cè)將收集的宮頸癌組織、癌旁組織及正常宮頸組織標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋切片,并采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)組織中Twist和RACK-1蛋白的表達(dá)。采用兔抗人Twist和RACK-1單克隆抗體(英國(guó)Abcam公司),工作濃度為分別為1∶150和1∶100;由同一病理科人員嚴(yán)格按照免疫組織化學(xué)SP法試劑盒(北京中杉橋生物公司)說明書進(jìn)行操作,用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照,用已知抗體陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照。
1.2.3 陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度判定陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度判定:①每張切片選取連續(xù)10個(gè)高倍視野(×400),每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,分別計(jì)數(shù)其中的所有陽(yáng)性染色細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率,根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞率評(píng)分,0~5%為0分,6%~25%為1分,26%~50%為2分,>50%為3分;②根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分,細(xì)胞未著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。將上述2種評(píng)分結(jié)果相乘,即為綜合評(píng)分,用于判定陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度,綜合評(píng)分0~1分為陰性,2~5分為弱陽(yáng)性(+),6~8分為陽(yáng)性(++),9分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。
數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,非正態(tài)分布的計(jì)量資料比較,采用Log-rank檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法;Twist與RACK-1蛋白的相關(guān)性分析用Pearson相關(guān)分析;采用Kaplan-Meier生存曲線計(jì)算5年生存率和中位生存時(shí)間,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
Twist蛋白陽(yáng)性染色呈棕色細(xì)小顆粒,均位于細(xì)胞質(zhì);RACK-1蛋白陽(yáng)性染色呈棕黃色或棕褐色顆粒,分布于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。
Twist和RACK-1蛋白主要位于細(xì)胞質(zhì),正常組表達(dá)陰性,癌旁組呈淡黃色或黃色陽(yáng)性表達(dá),宮頸癌組呈棕褐色強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。3組患者Twist和RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸癌組與癌旁組的Twist、RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.351和10.068,P=0.000和0.010);宮頸癌組與正常組的Twist、RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.074和19.169,均P=0.000);癌旁組與正常組的Twist、RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.216和17.611,P=0.010和0.000)。宮頸癌組、癌旁組及正常組的Twist、RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率依次減弱。見表1和圖1。
2.2.1 Twist宮頸癌腫瘤浸潤(rùn)深度為T3、T4患者的Twist陽(yáng)性表達(dá)率與T1、T2患者比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Twist陽(yáng)性表達(dá)率與不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Twist在宮頸癌腫瘤患者年齡(<55歲或≥55歲)、病理類型(局限型或浸潤(rùn)型)、分化程度(低或高、中分化)及TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期或Ⅲ、Ⅳ期)的陽(yáng)性表達(dá)率比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。
2.2.2 RACK-1宮頸癌低分化患者的RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率與高、中分化患者比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸癌腫瘤浸潤(rùn)深度為T3、 T4患者的RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率與T1、T2患者比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。宮頸癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率與不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腫瘤TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者的RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率與Ⅰ、Ⅱ期患者比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RACK-1在宮頸癌腫瘤患者年齡(<55歲或≥55歲)、病理類型(局限型或浸潤(rùn)型)的陽(yáng)性表達(dá)率比較,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。
本組70例宮頸癌組織中,Twist和RACK-1蛋白同時(shí)表達(dá)陽(yáng)性為67.1%(47/70),同時(shí)表達(dá)陰性為21.4%(15/70),兩者在宮頸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.271,P=0.012)。
本組70例宮頸癌患者均電話或門診隨訪,66例完成隨訪,1例Twist蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者失訪,3例RACK-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者失訪,失訪率為5.7%(4/70),失訪人群按截尾數(shù)據(jù)處理。66例完成隨訪的宮頸癌患者中,51.5%(34/66)死亡,48.5%(32/66)存活,66例患者5年生存率為39.3%,中位生存時(shí)間36.9個(gè)月。Twist和RACK-1蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)者的5年生存率及中位生存時(shí)間與弱陽(yáng)性和陽(yáng)性表達(dá)者比較,經(jīng)Log-rank檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Twist、RACK-1蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)者的5年生存率和中位生存時(shí)間低于Twist、RACK-1弱陽(yáng)性和陽(yáng)性表達(dá)者。影響宮頸癌患者5年生存結(jié)局的危險(xiǎn)因素包括Twist和RACK-1蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(P<0.05)。見表3。

表1 3組患者Twist、RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率比較

表2 不同臨床病理特征的Twist和RACK-1陽(yáng)性表達(dá)率比較

表3 Twist和RACK-1蛋白不同陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度患者的生存分析
Twist是最近發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子,參與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移,但關(guān)于Twist的確切機(jī)制尚不清楚[4]。近年來大量研究提示,Twist與胃癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌的侵襲、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[5-9]。但Twist在宮頸癌中的作用鮮見報(bào)道,其作用機(jī)制尚不明確。2008年,SHIBATA等[10]對(duì)100多例子宮頸癌組織檢測(cè)Twist蛋白的表達(dá)情況,并進(jìn)行生存分析,結(jié)果提示Twist是預(yù)測(cè)子宮頸癌患者預(yù)后差的獨(dú)立因素。LI等[11]對(duì)142例子宮頸組織中Twist 2表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn),其在宮頸上皮樣瘤變和鱗狀宮頸癌組織中高表達(dá),提示Twist 2與子宮頸癌發(fā)展密切相關(guān),可以作為預(yù)測(cè)子宮頸惡性轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移的預(yù)后因素。李旻等[12]研究表明,Twist蛋白在宮頸癌組織高表達(dá),可以預(yù)測(cè)子宮頸癌的惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Twist蛋白在宮頸正常組織、宮頸癌組織中的表達(dá),結(jié)果顯示,Twist蛋白在宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較癌旁組織或正常組織高;Twist蛋白在正常宮頸組織中基本不表達(dá),而在宮頸癌組織中高表達(dá);腫瘤浸潤(rùn)度高和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的宮頸組織中,Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)率更高;Twist蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)是影響宮頸癌患者5年生存結(jié)局的危險(xiǎn)因素,該類患者5年生存率更低,中位生存時(shí)間更短,提示Twist過表達(dá)可能與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。
RACK-1基因首次于1991年在雞的cDNA中發(fā)現(xiàn),主要位于人類染色體5q35.3[13]。RACK-1蛋白可與細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)分子結(jié)合,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化及遷徙,細(xì)胞之間異常的信號(hào)傳導(dǎo)。目前關(guān)于RACK-1基因調(diào)控細(xì)胞浸潤(rùn)的機(jī)制尚不清楚。有學(xué)者提出RACK-1可能激活A(yù)kt信號(hào)通路,進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)[14]。國(guó)外其他學(xué)者則認(rèn)為,RACKI通過PKC信號(hào)通路,調(diào)節(jié)腫瘤組織中新生血管的形成,參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[15]。
大量研究證實(shí),RACK-1蛋白在多種腫瘤組織高表達(dá)。RACK-1在口腔鱗癌組織中高表達(dá),在口腔癌前病變組織中表達(dá)也顯著增加,且表達(dá)水平與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān),可作為口腔鱗癌預(yù)后的標(biāo)志物之一[16]。RACK-1蛋白在乳腺癌中高表達(dá),且表達(dá)水平與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等病理因素有關(guān),是腫瘤預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[17]。但關(guān)于RACK-1蛋白在宮頸癌表達(dá)的研究不多,未來可能是一個(gè)治療宮頸癌的靶點(diǎn)。為明確RACK-1蛋白與宮頸癌的關(guān)系,本研究觀察RACK-1在宮頸組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果表明,隨著惡性程度的增加,RACK-1蛋白的表達(dá)率逐漸升高;同時(shí)研究發(fā)現(xiàn),RACK-1與分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)。這提示RACK-1與宮頸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)有關(guān),可作為宮頸癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)因子。
在癌細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過程中,RACK-1發(fā)揮至關(guān)重要的作用。有研究表明,在乳腺癌細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過程中,RACK-1可能與基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的活化、纖維蛋白溶酶激活有關(guān),其可激活MMP-2、MMP-9,溶解細(xì)胞外基質(zhì),最終引起癌細(xì)胞的浸潤(rùn)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[18]。Twist促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制與其能夠使細(xì)胞失去上皮性標(biāo)志物,如E-鈣黏蛋白,而獲得間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物,如波形蛋白和平滑肌肌動(dòng)蛋白等有關(guān)[19]。本研究顯示,Twist與RACK-1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。這表明其在宮頸癌進(jìn)展中可能發(fā)揮協(xié)同作用。聯(lián)合檢測(cè)Twist和RACK-1蛋白可協(xié)助判斷宮頸癌的預(yù)后,有望成為新的宮頸癌指標(biāo)。
張一鳴等[20]研究表明,Twist在宮頸癌組織和血漿中高表達(dá),且與宮頸癌的復(fù)發(fā)密切相關(guān)。鮑偉等[21]研究提示,Twist高表達(dá)與5年無(wú)瘤生存時(shí)間、總生存時(shí)間相關(guān);多因素Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸分析顯示,宮頸癌患者Twist高表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。楊丹丹等[22]研究發(fā)現(xiàn),RACK1高表達(dá)與子宮頸癌的惡性程度、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),患者的生存率更低。本研究結(jié)果顯示,Twist和RACK-1蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)患者與弱陽(yáng)性和陽(yáng)性表達(dá)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)的有差異;Twist、RACK-1蛋白強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)者的5年生存率和中位生存時(shí)間較弱陽(yáng)性和陽(yáng)性表達(dá)者低。因此推測(cè),Twist和RACK-1蛋白的高表達(dá)可能反映宮頸癌患者的不良預(yù)后。
綜上所述,Twist和RACK-1蛋白都可能成為宮頸癌新的腫瘤標(biāo)志物,兩者聯(lián)合檢測(cè)可能更有價(jià)值。兩者在宮頸癌的進(jìn)展過程中具有協(xié)同作用,但其作用機(jī)制尚需要進(jìn)一步探討,阻斷兩者信號(hào)傳導(dǎo)通路有可能成為抑制宮頸癌的新方法。
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Expressions of Twist and RACK-1 in cervical carcinoma and clinical significance
Xue-lian Li1, Xi-guang Mao2, Bei Zhang3
(1. Clinical College of Southwest Medical University, Luzhou, Sichuan 646000, China; 2. The Aff i liated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou, Sichuan 646000, China; 3.department of Obstetrics
and Gynecology, Xuzhou Central Hospital, Xuzhou, Jiangsu 221009, China)
ObjectiveTo study Twist and RACK-1 expressions in cervical carcinoma, and analyze the clinical significance.MethodsThis study enrolled the cervical carcinoma tissues (cervical carcinoma group) and para-cancerous tissues (para-carcinoma group) of 70 patients with cervical carcinoma and the normal cervical tissues (control group) of 20 patients with benign cervical tumor from May 2006 to June 2010 in the Affiliated Hospital of Southwest Medical University. Twist and RACK-1 expressions in the three groups weredetected with immunohistochemical SP method. Their correlations with clinicopathological parameters of cervical carcinoma were analyzed.ResultsThe positive expression rates of Twist in the control group, the para-carcinoma group and the cervical carcinoma group were 5.0% (1/20), 22.9% (16/70) and 95.7% (67/70) respectively, with significant differences among them (P< 0.05). The positive expression rates of RACK-1 in the control, para-carcinoma and cervical carcinoma groups were 10.0% (2/20), 61.0% (43/70) and 90.0% (63/70) respectively, with significant differences among them (P< 0.05). The expression of Twist was correlated with TNM stage,degree of tumor differentiation and lymph node metastasis (P< 0.05). The expression of RACK-1 was correlated with TNM stage,degree of tumor differentiation,depth of invasion and lymph node metastasis (P< 0.05). There was a positive correlation between Twist and RACK-1 (P< 0.05). The 5-year overall survival rates for the patients with high Twist expression (+++) and low expression (+, ++) were 51.2% and 29.2% [HR = 11.637 (95% CI: 4.351, 38.213),P= 0.002]. The 5-year overall survival rates of the patients with high RACK-1 expression (+++) and low expression (+, ++) were 41.3%and 35.3% [HR = 10.143 (95% CI: 4.285, 33.275),P= 0.006].ConclusionsThe up-regulated expressions of Twist and RACK-1 are closely related to the increased malignancy and invasion of cervical carcinomas. The expressions of Twist and RACK-1 might be used as indicators for prediction of the prognosis of patients with cervical carcinomas.
cervical neoplasms; Twist; RACK-1; neoplasm invasiveness
10.3969/j.issn.1005-8982.2018.02.009
1005-8982(2018)02-0047-06
R737.33
A
2016-10-04
毛熙光,E-mail:MXG6639@163.com
(童穎丹 編輯)