HPLC 法同時測定黨參中煙酸及黨參炔苷含量的方法探究

蔡迪鳴

（葫蘆島市食品藥品檢驗檢測中心 遼寧 葫蘆島 125000）

黨參屬于桔?？浦参铮吨袊幍洹窋祿1]認為黨參是黨參、川黨參 或素花黨參三種黨參的干燥根部，味甘性平，其主要產地為陜西、甘肅、湖北、貴州等地，主要功效為潤肺生津、補中益氣[2]。黨參的有效成分包括煙酸、黨參炔苷、黨參多糖等。本文圍繞高效液相色譜法測定黨參中的煙酸與黨參炔苷含量展開研究，取得了較為滿意的結果，現具體報告如下。

1.材料與方法

1.1 材料

（1）實驗儀器

實驗儀器選用產自沒過沃特世公司的高效液相色譜儀Waters e2695，其中包含Waters 2998 PDA檢測器、自動進樣器、在線脫氣機、柱溫箱、四元泵。采用產自瑞士梅特勒公司的型號為AE240的電子天平，其感量為0.01毫克；產自昆山超聲儀器公司的型號為KQ-252TTB高頻數控超聲波清洗器；產自蘇州威爾實驗用品公司型號為HH-D的恒溫水浴鍋；產自南京實驗儀器公司型號為DGF24-IA的電熱風鼓風干燥箱。

（2）實驗對照物（煙酸及黨參炔苷）為產自成都瑞芬思生物科技公司，其批號分別為D-026-150728、Y-062-150801，純度高于98.0%；乙腈為產自湖北昌泰興業公的特技色譜純；磷酸為產自國藥集團化學試劑公司的色譜純。其他實驗所涉及的藥劑均屬于分析純，采用超純水Milli-Q。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 實驗所用色譜柱為Syncronis AQ(250mm×1.5mm，5μm)，流動相A為乙腈，B為磷酸水溶液，其比例為32：68，1.0mL/min流速，30℃柱溫，檢測的紫外線波長為285nm。實驗參考為黨參炔苷理論塔板，其數值＞5000。在上述條件下煙酸及黨參炔苷均可到達基線分離。

1.2.2 對照物配置方法 量取對照物煙酸及黨參炔苷適量，分別溶于甲醇溶液中至定容刻度，配置成濃度為480μg/mL、496μg/mL的對照物儲備液。通過微量加樣槍從對照物儲備液中各采集1mL放于容量為10mL的容量瓶中，甲醇溶液定容后搖勻，此時對照物濃度為48.0μg/mL、49.6μg/mL。再通過微量加樣槍采集2mL放于容量為10mL的容量瓶中，此時對照物濃度為96.0μg/mL、99.2μg/mL，保存于-20℃的環境中。

1.2.3 實驗品溶液制取 量取實驗測試品黨參粉末1g，經直徑為450μm的孔徑篩后置于具塞三角瓶中，與80mL甲醇混合，密塞稱重，于45℃、40kHz、200W的環境中超聲提取30min，冷卻后再次稱重，補足損失的甲醇質量，搖勻后過濾。精密量取50mL濾液，使其蒸干，所得殘渣加入甲醇溶解后轉移至容積為5mL的容量瓶中，加入甲醇至定標后搖勻。經直徑為0.45μm的孔徑篩后，取所得濾液為實驗品溶液。

2.結果

2.1 優化提取條件

實驗指標為煙酸及黨參炔苷，對黨參的提取條件進行評估，分別于30℃、45℃、60℃的溫度下進行提取，結果在45℃環境下效率最高。同時，對提取時間進行評估，分別為30min、60min，結果差異不著，則選擇了30min。因此，本實驗提取條件定為45℃的純度為100%的甲醇溶液下30min。

2.2 檢測波長

通過PDA檢測器對范圍為210～400nm內的波長進行掃描，分別采集其光譜圖。結果顯示波長為285nm時煙酸及黨參炔苷色譜圖的峰面積均較為理想，因此波長定為285nm。

2.3 流動相

為達到良好分離的要求，實驗測試了梯度洗脫及等度洗脫，并分別對比甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.2%甲酸水溶液、乙腈-0.2%乙酸水溶液，結果顯示乙腈-0.2%磷酸水溶液較為理想，在此流動相下基線平穩、分離度高，重復性強。

2.4 線性方程與檢出限

以X（質量濃度）為橫坐標，Y（峰面積）為縱坐標繪制標準曲線，計算兩者的線性方程等結果。具體結果為：煙酸的線性方程、檢出限/（μg/mL）、線性范圍（μg/mL）分別為Y=724.8X+5155.6、0.95、9.5～57.9，黨參炔苷組對應數據為Y=15105X+875.9、0.11、9.98～59.8。煙酸及黨參炔苷的線性方程、線性范圍、檢出限均能滿足要求。

2.5 穩定性

對同一樣品進行測定，分別于0、2、4、8、12、24各進樣一次，記錄兩者的色譜峰面積，評定其穩定性。煙酸及黨參炔苷的偏差值RSD分別為2.0%、1.1%。具體數值為：煙酸在0、2、4、8、12、24時的峰面積值分別為：21240、21743、21168、21373、22135、21629，RSD/%值為2.0；黨參炔苷對應數據為：627438、634571 632459、634325、645475、637536、1.1。

3.小結

煙酸通過緩解因機體低密度脂蛋白增多、高密度脂蛋白減少帶來的血脂異常，從而可降低冠心病等疾病的發病率[3]。黨參炔苷的藥理活性包括抗潰瘍、抗氧化，可以激活NF-kB[4]。本實驗優化了檢測時色譜條件、環境溫度等，所得的煙酸及黨參炔苷的線性方程、線性范圍、檢出限均能滿足要求，且其偏差值RSD分別為2.0%、1.1%。說明HPLC法對同時測定兩者的含量便捷精準、穩定理想，因此對黨參的質量控制有重要的臨床意義。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015版[M].北京：化學工業出版社，2005:199.

[2]陳前鋒，鄧小艷，祝慧鳳．HPLC法測定不同產地黨參中黨參炔苷和丁香苷的含量[J].食品工業科技，2016(6):64-67．

[3]竇武宇，崔治家，侯嘉，等.甘肅不同產地黨參藥材總皂苷含量測定[J].中獸醫醫藥雜志，2015，1(6):59-62．

[4]陳慧慧，牛偉霞，李士棟，等．HPLC測定不同產地黨參中黨參炔苷的含量[J].食品與藥品，2014，16(1):37-38，39．