c-myc在胃癌治療方面的研究進展

杜 清，楊巧紅，張新江，許曉輝，李琳琳，趙 波，林鵬程，蘆永昌

（1青海民族大學藥學院，青海省青藏高原植物化學重點實驗室，青海 西寧 810007；2廣州中醫藥大學，廣東 廣州510006；3蘭州市食品藥品檢驗所，甘肅蘭州730000；4鄭州大學第一附屬醫院，河南 鄭州450052）

0 引言

每個 myc（myelocytomatosis oncogene）家族成員c?myc、l?myc 和 n?myc 都與不同類型的人類癌癥有關，例如，c?myc常與淋巴瘤相關，n?myc擴增也常與神經母細胞瘤相關，l?myc擴增與小細胞肺癌相關［1］。本文綜述了近5年關于myc家族在胃癌治療方面的研究報道，從c?myc基因出發，論述c?myc基因參與胃癌增殖、遷移、凋亡和治療等問題。

1 myc的發現史

myc來源于與動物癌癥相關的逆轉錄病毒的研究，Ellermann和Bang以及20世紀初的Rous的實驗表明，雞白血病和肉瘤不需通過細胞濾液傳播，之后科學家認識到在感染病毒后會引發動物腫瘤發病率升高。在20世紀60年代和70年代，4種不同的逆轉錄病毒（MH?2、MC29、CMII和 OK10）從禽類腫瘤中分離出來，體外細胞實驗發現這些病毒具有轉化單核細胞／巨噬細胞的能力，并且能夠誘導雞中的髓細胞瘤、內皮瘤以及腎和肝腫瘤的發生，進一步研究顯示這四種逆轉錄病毒具有與細胞轉化密切相關的共同遺傳因子，此外，這個因子的缺失會削弱逆轉錄病毒的轉化活性，這個遺傳因子被稱為病毒骨髓細胞瘤癌基因（myelocytomatosis viral oncogene， v?myc），而雞中的稱為細胞骨髓細胞癌基因（cellular?myelocytoma?tosis oncogene，c?myc）癌基因首次在伯基特淋巴瘤中被發現，并且研究發現c?myc是禽類逆轉錄病毒轉化基因 v?myc的細胞同系物［1］。

2 myc家族簡介

myc基因包括 c?myc、神經母細胞瘤 myc（neuro?blastma myc， n?myc）和肺癌母細胞瘤 myc（lung carci?noma myc， l?myc），分別定位于 8 號染色體、2 號染色體和1號染色體。n?myc基因在1983年被首次發現，Schwab和Kohl等發現有一部分人類神經母細胞瘤細胞系帶有多個與c?myc癌基因相關的DNA序列拷貝，并把該區域命名為 n?myc［2］。 n?myc 基因主要在神經系統腫瘤中過表達，并對腫瘤的預后判斷有意義；l?myc在1986年發現在肺癌組織中過表達，與基因擴增有關［3］，l?myc擴增與腫瘤的易患性和預后在不同的腫瘤中表現各異。

3 c-myc介導胃癌的發生發展

myc基因與腫瘤的細胞周期、端粒酶活性和腫瘤的血管生成等因素密切相關，調控著腫瘤的增殖、凋亡和遷移，在 myc家族中，與 n?myc和 l?myc相比，c?myc在胃癌的生物學特性方面發揮著更加重要的作用，是一種促進胃癌發生發展的驅動基因，大量的研究集中探討c?myc與胃癌的發生機制，以下將闡述c?myc與胃癌的增殖、轉移和凋亡之間的分子機制。

3．1 c-myc與胃癌細胞的增殖

3．1．1 c?myc與相關致癌基因／蛋白的協同作用 研究［4］發現，基因 DDX6（DEAD?box 6）是與 c?myc相關聯的基因，DDX6通過與 c?myc的 mRNA（message RNA）相關聯來促進c?myc表達，而在胃癌細胞中起到癌基因的作用，從而促進胃癌的發展。溴結構域蛋白4（bromodomain?containing protein 4， BRD4）表達失調與腫瘤的發生有關，研究［5］發現BRD4促進胃癌細胞增殖這一過程與 c?myc密切相關，BRD4和 c?myc的表達呈正相關，c?myc是BRD4的轉錄靶點，BRD4能夠結合并激活c?myc啟動子，促進c?myc的表達，從而增強胃癌細胞的增殖能力。

核仁小 RNA（small nucleolar RNA，snoRNA）在癌發生中起重要作用，而snoRNA在胃癌中的作用同樣也需要c?myc的介導，snord105b的過表達促進了胃癌細胞中c?myc的表達上調，使胃癌細胞增殖，體外胃癌移植瘤體積增大［6］。yeats4作為癌基因在胃癌組織中呈現高表達，研究［7］發現，C?MYC 蛋白是Wnt／β?catenin（Canonical Wnt／β?catenin pathway） 信號通路中下游的靶蛋白，yeats4的過表達能夠提高β?CATENIN和 C?MYC 蛋白的表達，促進胃癌 BGC?823細胞的增殖，若沉默yeats4則會起到相反的作用。

3．1．2 c?myc 與 microRNAs（miRNAs）的協同作用MiRNAs是一類內源性和小型的非編碼調節RNA，在轉錄后水平上調控基因，在人類癌癥的發展和進展中起重要作用。有些miRNAs在人類惡性腫瘤中起抑癌基因或癌基因的作用。miR?561通過直接結合c?myc的3′非翻譯區來抑制c?myc的表達，從而抑制胃癌細胞的增殖［8］。

microRNA?25（miR?25）在胃癌中高表達，可能通過抑制抑癌基因fbxw7的表達從而促進致癌基因myc的表達，促進胃癌AGS細胞生長［9］。抑癌基因決定性區域 Y?box 7（SOX7）是 miR?935的直接靶點，而miR?935的過表達抑制了 SOX7的表達，但促進了c?myc的表達水平，促進胃癌 MNK?28 細胞增殖［10］。

3．1．3 c?myc 與 lncRNA 的協同作用 長的非編碼RNA（long non?coding RNA， lncRNA）已被證明對腫瘤具有重要的調節作用，lncRNA胃癌高表達轉錄物1（lncRNA?GHET1）在胃癌中表達上調，在胃癌組織中，GHET1 和 c?myc 的表達密切相關。 研究［11］發現GHET1通過提高c?myc mRNA的穩定性和表達來促進胃癌細胞增殖。

3．1．4 c?myc與轉錄因子的協同作用 Islet?1（ISL1）是一種LIM同源域轉錄因子，最初從大鼠胰腺胰島素分泌細胞中克隆出來。研究［12］發現其在胃癌組織中高表達，ISL1通過結合c?myc啟動子或增強子上的保守結合位點來激活胃癌細胞中c?myc的表達，促進胃癌細胞增殖。而真核翻譯起始因子5A2（EIF5A2）在腫瘤進展和預后評估中起重要作用，研究［13］發現，EIF5A2的表達上調能夠引起 c?myc表達上調，EIF5A2上調在胃癌中起著重要的致癌作用。

3．2 c-myc 與胃癌的遷移

3．2．1 c?myc 與相關致癌基因／蛋白的協同作用 醛縮酶A（aldolase A，ALDOA）能夠與snord105b結合，snord105b的過表達促進了胃癌細胞中ALDOA的表達，由此促進腫瘤的侵襲和轉移，并促進基質金屬蛋白酶2（matrix metalloprotein 2， MMP2）的表達，從而提高胃癌細胞的遷移能力［6］。

研究［14］顯示，hoxc10基因表達上調顯著增加了絲裂原活化蛋白激酶（mitogen?activated protein kinase， MAPK）信號通路相關基因（包括 c?myc，c?jun和p53）的mRNA和蛋白質表達，從而提高胃癌細胞的遷移和侵襲能力。

myc結合蛋白（myc bond?protein， mycBP）在胃癌SGC?7901、MKN?45、BGC?823 和 AGS 細胞中呈現高表達，研究［15］顯示 mycBP 可能是 LEF?1的下游靶點，mycBP與LEF?1相互作用提高了胃癌細胞的遷移能力。應激誘導蛋白?1（STIP1）是一種輔助分子伴侶，可直接與熱休克蛋白相結合，調節各種類型癌癥的活動性，STIP1通過上調Wnt／β?catenin信號通路中的靶基因（c?myc和 cyclin D1）并伴隨 β?連環蛋白核易位而促進胃癌細胞遷移［16］。

泛素結合酶 E2T（ubiquitin conjugating enzyme 2T，UBE2T）在胃癌細胞中高表達，并且沉默UBE2T的同時c?myc的表達也隨之降低，抑制了胃癌細胞的轉移［17］。

ywhae基因和myc表達之間的負相關關系對胃癌細胞的侵襲和遷移起著重要的調節作用。CDC25B（CDC25B是磷酸酶CDC25家族的成員，CDC25B具有致癌特性）是 myc的轉錄靶點，ywhae與 myc和CDC25B的表達呈負相關，ywhae通過降低 myc和CDC25B的表達抑制了胃癌細胞的侵襲和遷移。相反，myc通過誘導CDC25B的高表達并降低ywhae的表達而誘導胃癌細胞的侵襲和遷移［18］。

人類端粒酶逆轉錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）在胃癌中的表達與晚期 TNM分期，淋巴結轉移顯著相關，hTERT通過與c?myc結合并轉移至乙酰肝素酶啟動子來上調乙酰肝素酶（乙酰肝素酶能夠促進腫瘤轉移）的表達，從而促進胃癌細胞的轉移。另外，研究［19］表明，hTERT激活Wnt／β?catenin 信號通路促進 c?myc的表達，這可能會反過來激活hTERT的轉錄和表達。

3．2．2 c?myc 與 miRNAs 的協同作用 miR?135a 在胃癌細胞／組織中表達異常增高，這是由于c?myc的表達上調對miR?135a的調控作用，從而增強胃癌細胞的侵襲性［20］。

3．3c-myc與胃癌細胞的凋亡細胞凋亡研究［21］表明miR?122?5p通過靶向SCC7901細胞中的myc誘導細胞凋亡。小泛素樣修飾物（small ubiquitin?like modifier，SUMO）在腫瘤細胞的生長過程中發揮著重要的調節作用，與染色體組織功能、基因穩定性，新合成蛋白質的質量控制、DNA損傷修復密切相關。研究［22］發現 SUMO?1 基因沉默后，SGC?7901 細胞生長受到抑制，并下調了 bcl?2，c?myc 和 p53 基因突變體的表達，使細胞周期停滯在 G0／G1期，促進細胞凋亡。

4 c-myc在胃癌治療中的機制

近年來，隨著抗腫瘤研究的深入開展，越來越多的藥物靶點被發現，相對應的抗腫瘤新藥層出不窮。在胃癌治療領域，針對c?myc基因，目前仍處在基礎研究階段，未見相關藥物臨床實驗報道。目前的研究基本思路是以c?myc基因為中心，探索藥物對c?myc基因轉錄水平的影響，以及對相關信號通路中其他因子的連鎖反應，從而闡明藥物發揮抗腫瘤作用的具體機制。

4．1 c-myc 與中藥治療胃癌的機制c?myc 是 Wnt／β?catenin信號通路的下游轉錄因子，毛花甙C能夠抑制 Wnt／β?catenin 信號傳導并下調 c?myc 表達，并且毛花甙C使去泛素化水解酶USP28與c?myc的結合能力減弱，促使泛素蛋白酶體途徑中的c?myc降解，從而促使胃癌 MNK?45細胞周期停滯在 G2／M期，cleaved?caspase?9 表達上調，推動細胞凋亡［23］。

莫桑素是桑樹（桑科）根皮的提取物。c?myc通過與CDKs的E?Box區和Cyclin啟動子的結合誘導胃癌細胞中CDK和細胞周期蛋白表達的上調。研究［24］結果表明莫桑素處理組中的 c?myc表達下降，并且c?myc蛋白與E?Box的結合能力降低，顯著抑制了胃癌細胞的增殖，而過表達的c?myc則逆轉了莫桑素對細胞增殖和腫瘤生長的抑制作用。因此莫桑素通過下調 c?myc來抑制胃癌 MNK?45 和 SGC?7901 細胞增殖和腫瘤生長。

硫化砷（As4S4）是雄黃的主要成分，活化T細胞的核因子（nuclear factor of activated T?cells， NFAT）在癌細胞的增殖過程中起重要作用。研究［25］發現，c?myc可能是活化T細胞的核因子3（NFATc3）的靶基因，NFATc3通過 c?myc促進胃癌細胞的增殖，而As4S4能夠降低 NFATc3和c?myc的表達，從而抑制胃癌細胞的增殖。

H19是一種癌基因，c?myc能夠與H19的啟動子結合，誘導H19表達，促進胃癌細胞增殖。研究［26］發現姜黃素能夠降低胃癌細胞SGC?7901細胞中c?myc的表達，從而降低H19的表達，增強抑癌基因p53的表達，抑制胃癌細胞的增殖，促進胃癌細胞凋亡。另外有研究［27］發現姜黃素能夠降低 Wnt／β?catenin 信號通路中c?myc等靶蛋白的表達，抑制胃癌 SNU?1、SNU?5、AGS細胞的增殖，使體內AGS細胞移植瘤的體積明顯縮小，并促進細胞凋亡。

養正散結方主要由黃芪、黃芩、白術、熟地、枸杞、姜黃等組成，研究［28］發現此方能夠降低 c?myc的表達水平，從而抑制胃癌細胞增殖，促進胃癌細胞凋亡。另有研究［29］發現中藥復方半夏瀉心湯能夠降低胃癌BGC?823細胞中c?myc的表達，抑制胃癌細胞的增殖和遷移，促進胃癌細胞凋亡。

4．2 c-myc與西藥等化合物治療胃癌的機制Dorema glabrum是分布于外高加索和伊朗西北部傘形科的一種植物，其提取物成分，包括使用正己烷、乙酸乙酯、氯仿和甲醇提取的成分，能夠降低c?myc的表達，使細胞停留在G1期，上調 bax和caspase?3的mRNA表達，促進胃癌AGS細胞凋亡［30］。積雪草酸的衍生物，N?（2α，3β，23?乙酰氧基?12?烯?28?油酰基）?1?脯氨酸甲酯（AA?PMe）能夠通過抑制 JAK2 的活化來抑制轉錄激活因子3（STAT3）的活化來使通路下游基因c?myc的表達降低，抑制胃癌細胞的增殖，使細胞周期停滯在G0／G1期，促進細胞凋亡［31］。

辛二酰苯胺異羥肟酸（SAHA）是一種合成的異羥肟酸，已獲得美國食品和藥物管理局（Food and Drug Administration，FDA）的批準。SAHA通過增加組蛋白3和4的乙酰化，并且乙酰化的組蛋白與p21、p27、c?myc、cyclin D1 和 nangg 中的啟動子結合，使 p21、p27 表達上調，c?myc、cyclin D1 和 nangg 表達下調，誘導G1期阻滯，抑制胃癌MGC?803和MNK?45細胞的生長并促進其凋亡，因此，SAHA可能作為化療藥物用于臨床胃癌的治療［32］。

YM155（sepantronium bromide）最初作為生存素的特異性抑制劑，是一種新型的咪唑類小分子化合物，可抑制人癌細胞中的c?myc的表達并誘導細胞凋亡。最近完成的Ⅰ／Ⅱ期臨床研究［33］結果顯示，YM155在晚期癌癥患者中取得了良好的抗癌作用，這可能與YM155在上述所產生的作用有關。

JQ1是表觀遺傳修飾蛋白 BRD4的抑制劑，BRD4是一種轉錄調控因子，它將轉錄調節復合物募集到乙酰化染色質上，從而控制包括c?myc在內的一系列蛋白質的表達。As4S4和 JQ1能夠協同抑制BRD4和c?myc的表達，單獨使用As4S4對細胞生長的抑制率約為40%，而JQ1對細胞生長的抑制率約為45%，這兩種藥聯合使用對細胞抑制率約為60%，所以這可能為胃癌提供了新的治療方案［34］。

重組人內皮抑素能夠抑制c?myc與堿性成纖維細胞生長因子（based fibroblast growth factor，bFGF）的表達，使胃癌移植瘤的體積明顯縮小，實驗組中微血管密度明顯受到抑制。研究［35］發現c?myc與bFGF表達呈正相關。重組人內皮抑素可通過抑制胃癌組織中c?myc和bFGF的表達以及抑制血管生成來抑制腫瘤轉移。

在腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（tumor nec?rosis related apoptosis inducing ligand， TRAIL）逆轉胃癌細胞多藥耐藥性（multidrug resistance，MDR）并促進細胞凋亡的過程中，順鉑被證明是TRAIL的敏化劑。研究［36］發現在TRAIL存在并發揮正常作用的情況下，順鉑通過上調c?myc來誘導死亡受體DR4和DR5的表達上調，并且通過促進細胞色素c的釋放增強半胱天冬酶的活化，促進細胞凋亡。

亞油酸隨著濃度依賴性方式抑制c?myc的表達，從而降低胃癌AGS細胞中hTERT和端粒酶活性的表達，抑制胃癌細胞生長并誘導胃癌細胞凋亡［37］。另有研究［38］顯示胃泌素 1（gastrin 1， GKN1）能夠直接與c?myc結合并下調其表達，抑制 c?myc與端粒重復序列結合因子 1（telomeric repeat binding factor，TRF1）蛋白和hTERT啟動子的結合，縮短端粒長度，抑制端粒酶活性，從而導致胃癌細胞的衰老和凋亡。

5 c-myc在治療胃癌中所遇到的問題及對策

目前，myc能夠使胃癌細胞產生耐藥性是一個亟待解決的問題，相關研究主要集中在myc介導胃癌細胞耐藥的具體機制，對該方面做詳細的綜述。

5．1 c-myc誘導胃癌細胞耐藥的機制有研究［39］表明，胃癌細胞耐藥與myc基因擴增有關，myc基因拷貝數增加使受體酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTK）激活，導致PI3激酶信號傳導途徑激活，促進胃癌細胞生長和遷移能力的提高，從而導致胃癌細胞對MET靶向治療劑產生耐藥性。

極光激酶A（AURKA）是一種絲氨酸／蘇氨酸細胞周期激酶，它和c?myc在胃癌細胞對順鉑耐藥方面發揮著作用，原因是AURKA在胃癌細胞中的異常表達和激活促進了 c?myc 的表達［40］。 另有研究［20］顯示，miR?135a是胃癌細胞耐藥的推動因素，而根源在于胃癌組織中c?myc的高表達使miR?135a的表達上調，從而使胃癌細胞對奧沙利鉑（OXA）耐藥。

在接受新輔助化療的晚期胃癌患者中，發現Lin28的高表達與腫瘤的惡性程度呈正相關，體外細胞實驗［41］發現 Lin28能夠上調 c?myc的表達，從而使這些胃癌細胞（MKN45和MKN28）增加了對化療藥物OXA、紫杉醇（PTX）、多柔比星（ADM）和氟尿嘧啶（5?Fu）的耐藥性。

5．2 c-myc誘導胃癌細胞耐藥的對策研究［40］顯示敲除AURKA的表達可以降低c?myc的表達，從而克服胃癌細胞對順鉑的耐藥性。另有研究［42］顯示let?7b的高表達能夠抑制 c?myc基因表達，從而增強SGC?7901胃癌細胞對順鉑和長春新堿的敏感性。所以，針對 c?myc誘導的耐藥，要以 c?myc為中心，找出促使c?myc呈現高表達的基因和相關蛋白，然后針對性地開發靶向治療藥物。

6 總結和展望

c?myc在人類胃癌組織中存在基因和蛋白過度表達的現象，c?myc的過度表達是胃癌細胞增殖、遷移的重要誘因，而且胃癌組織中c?myc介導了多種抗癌藥物抑制腫瘤增殖和轉移，促進腫瘤凋亡的過程。同時，基于c?myc是促進胃癌細胞耐藥的一個重要因素，隨著相關耐藥機制的進一步闡明，更多促進或制約c?myc高表達的基因將被發現，相信更多新型高效的基因調控治療藥物在不久的將來會被研制并發揮其應用價值。