齒瓣石斛多糖及醇溶性浸出物含量積累規(guī)律研究

姚志軍，白燕冰，羅仁山，史文斌，李澤生

(云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南瑞麗 678600)

齒瓣石斛(DendrobiumdevonianumPaxt.)又名紫皮石斛，因其莖的表面多為紫色，故名紫皮石斛，為蘭科石斛屬植物，是我國(guó)亞熱帶地區(qū)重要的林下藥用植物資源，作為傳統(tǒng)的藥材和保健品有著悠久的利用歷史，具有很高的藥用價(jià)值，有報(bào)道稱其藥用效果不亞于鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimura et Migo)，其功能主要是養(yǎng)胃生津、滋陰除熱，用于熱病傷津或胃陰不足之舌干口渴、陰虛津虧之虛熱不退等癥[2]。近年來齒瓣石斛被推為藥用保健佳品，在云南省各地州有廣泛的分布，尤以滇西地區(qū)種植較多，據(jù)報(bào)道，滇西地區(qū)齒瓣石斛的產(chǎn)量已占全國(guó)石斛產(chǎn)量的70%以上，齒瓣石斛種植已成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民的主要收入來源。為了更好地指導(dǎo)種植戶種植齒瓣石斛，促進(jìn)石斛產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，該研究選取滇西地區(qū)齒瓣石斛主產(chǎn)地的龍陵、芒市、瑞麗、梁河4個(gè)地區(qū)的石斛鮮條進(jìn)行檢測(cè)研究，分析滇西地區(qū)齒瓣石斛種植規(guī)律，為相關(guān)研究和廣大種植戶提供參考。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(N-1100 型，上海愛朗儀器有限公司)；低溫冷卻液循環(huán)泵(DLSB-5/20 型，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；真空隔膜泵[ILMVAC GmbH 115043型，伊爾姆真空設(shè)備貿(mào)易(上海)有限公司]；超聲波清洗器(KQ-500E型，昆山市超聲儀器有限公司)；制冰機(jī)(XB70-FZ型，寧波格蘭特制冰設(shè)備制造有限公司)；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(H-1850R型，長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；水浴鍋(XMTD-6000型，余姚市肖東儀表廠)；電子天平(20002型，杭州友恒稱重設(shè)備有限公司)；分析天平(FA1104B，上海越平科學(xué)儀器有限公司)；紫外可見分光光度計(jì)(UV-3100型，上海美譜達(dá)儀器有限公司)；伊萊克斯冰箱(BCD-252K型，伊萊克電子集團(tuán)有限公司)；循環(huán)水式多用真空泵(SHK-Ⅲ型，鄭州科泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；電熱恒溫古風(fēng)干燥箱(DHG-9070A，北京陸希科技有限公司)；苯酚(分析純，西隴化工有限公司)；濃硫酸、乙醇，均為分析純(北京化工廠)。

1.2樣品來源選取瑞麗市(海拔960 m)、芒市(海拔1 020 m)、梁河縣(海拔1 179 m)、龍陵縣(海拔1 980 m)4個(gè)齒瓣石斛主產(chǎn)區(qū)的石斛鮮條作為試驗(yàn)樣品(鮮條為2015年10月至2016年6月一年生成熟鮮條)。切碎之后在溫度55 ℃烤箱內(nèi)烘干送檢。

1.3多糖含量測(cè)定參照2015版《中國(guó)藥典》一部石斛多糖含量測(cè)定方法[3]。采用循環(huán)水浴加熱法提取石斛中的多糖，并進(jìn)一步運(yùn)用化學(xué)試劑反應(yīng)顯色以及形成絡(luò)合物，采用紫外分光光度法對(duì)石斛樣品中的多糖含量進(jìn)行測(cè)定。

1.3.1對(duì)照品溶液的制備。精密稱取無水葡萄糖對(duì)照品9.56 mg，加水溶解稀釋成90 μg/mL的溶液。

1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密量取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置10 mL具塞試管中，各加水補(bǔ)至1.0 mL，混勻，精密加入5%苯酚溶液1 mL，硫酸溶液5 mL，混勻，置沸水浴中加熱20 min，取出，置冰浴中冷卻8 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。按照紫外分光光度法，在488 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。 以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3供試品溶液的制備。精密稱取樣品粉末(過三號(hào)篩)0.3 g，每批稱取3份，置圓底燒瓶中，加入水200 mL，90 ℃水浴回流2 h，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液2 mL，置15 mL離心管中，精密加入無水乙醇10 mL，搖勻，冷藏1 h，取出，離心20 min(轉(zhuǎn)速4 000 r/min)，棄去上清液，沉淀加80%乙醇洗滌2次，每次8 mL，離心，棄去上清液，沉淀加熱水溶解至25 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻即得供試品溶液。

1.3.4含量測(cè)定。精密量取1 mL，置10 mL具塞試管中，按照“1.3.2”中方法，自“精密加入5%苯酚溶液1 mL起”，依法測(cè)定吸光度，計(jì)算。多糖含量取平行3次平均值。

1.4醇溶性浸出物含量測(cè)定參照2010 年版《中國(guó)藥典》(一部)附錄 VA 項(xiàng)下熱浸法測(cè)定[4]，以95%無水乙醇作溶劑。精密稱定供試樣品2 g，置100 mL具塞圓底燒瓶中，精密加乙醇50 mL，密塞，稱重，靜置1 h，85 ℃水浴回流，保持微沸1 h，放冷后取下，密塞，用95%乙醇補(bǔ)足差重，搖勻，過濾，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱重，以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量。重復(fù)3 次。

1.5數(shù)據(jù)處理采用Excel對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1不同采收期對(duì)石斛多糖及醇溶性浸出物含量的影響從圖1可看出，齒瓣石斛成熟鮮條中，11—12月份采收的石斛鮮條所含石斛多糖含量較高，12月—次年2月份石斛鮮條所含多糖含量變化不大，其后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)石斛鮮條所含多糖含量逐漸下降，到次年3月份石斛多糖含量降到最低值。

圖1 不同海拔及不同采收時(shí)間的齒瓣石斛多糖含量變化Fig.1 Changes of polysaccharide content of Dendrobium devonianum at different altitudes and harvesting time

圖2 不同海拔及不同采收時(shí)間的齒瓣石斛醇溶性浸出物含量變化Fig.2 Changes of alcohol-soluble extract content of Dendrobium devonianum at different altitudes and harvesting time

從圖2可看出，隨著采收時(shí)間的延長(zhǎng)，齒瓣石斛成熟鮮條中所含醇溶性浸出物含量呈上升趨勢(shì)。

2.2不同海拔對(duì)石斛多糖及醇溶性浸出物含量的影響從圖3可看出，不同海拔地區(qū)石斛鮮條所含多糖含量變化較大，在適宜齒瓣石斛生長(zhǎng)的海拔間，海拔越高，石斛鮮條所含多糖含量越高，石斛鮮條所含醇溶性浸出物含量也越高。

圖3 各地區(qū)齒瓣石斛多糖及醇溶性浸出物含量變化Fig.3 Changes of polysaccharide and alcohol-soluble extract of Dendrobium devonianum in different regions

3 討論

齒瓣石斛所含多糖以及其所含醇溶性浸出物含量是齒瓣石斛植物資源開發(fā)利用的重要指標(biāo)，研究其含量變化的規(guī)律，對(duì)定向種植齒瓣石斛及栽培管理方式具有重要意義。該試驗(yàn)中，齒瓣石斛在不同采收期以及不同海拔地區(qū)種植，其內(nèi)多糖和醇溶性浸出物含量變化較大，成熟鮮條隨著采收時(shí)間的延長(zhǎng)，其多糖含量整體呈下降的趨勢(shì)；醇溶性浸出物含量隨著采收時(shí)間的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì)；海拔越高齒瓣石斛所含多糖含量越高，所含醇溶性浸出物含量也越高。該試驗(yàn)由于試驗(yàn)成本及時(shí)間限制，成熟鮮條只選取了9個(gè)月份的樣品，不足以完全證明隨著采收時(shí)間的延長(zhǎng)，其所含多糖含量及醇溶性浸出物含量的變化規(guī)律與該試驗(yàn)結(jié)果始終保持一致。另外，由于所選地址不一樣，其植物激素使用情況[5]、栽培方式[6]、光照強(qiáng)度、晝夜溫差[7]、開花時(shí)間等外界因素也會(huì)影響齒瓣石斛體內(nèi)成分的含量變化，因此，該試驗(yàn)存在一定的局限性。

[1] 李彩霞，竹劍平.不同采收期鐵皮石斛中多糖含量比較[J].藥物分析雜志，2010，30(6)：1138-1139.

[2] 胡永亮，李澤生，趙云翔，等.齒瓣石斛仿野生栽培技術(shù)研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013(3)：38-40.

[3] 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2015年版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[4] 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[5] 林秋霞，李敏，周海玉，等.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)川麥冬總皂苷和總多糖

含量的影響研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2014，16(5)：399-401，409.

[6] 毛靈芝.不同栽培條件下鐵皮石斛(Dendrobiumcandidum)光合特性和主要藥用成分的變化[D].金華：浙江師范大學(xué)，2008.

[7] 張春柳.晝夜溫差對(duì)鐵皮石斛原球莖多糖含量的影響及機(jī)理研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2015.