小兒α和β地中海貧血基因類型分析

譚榮鑒

臨床上,地中海貧血是由于人體珠蛋白基因的突變,造成某一種珠蛋白鏈合成減少或者是缺失,從而引起血紅蛋白的組分發生改變的一組嚴重威脅人類健康的致死、致殘常染色體隱性遺傳性血液病,包括有α地中海貧血、β地中海貧血［1］。在我國南方地區,地中海為一種常見單基因遺傳性疾病。曾有研究顯示,常見的α貧血基因缺失類型主要包括 -SEA、-α3.7、-α4.2,除此外 ,-THAI也是我國南方人群存在的常見缺失類型［2,3］。本次研究中,以對小兒α和β地中海貧血基因類型進行分析探討為目的,對本院收治的疑似地中海貧血患兒的臨床檢測資料展開了回顧性分析,現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2012年1月～2017年12月本院收治的986例疑似地中海貧血患兒為研究對象,男672例,女314例,年齡10 d～12歲,平均年齡(2.6±2.1)歲。以《血液病診斷機療效標準》中“珠蛋白生成障礙性貧血診斷標準”和《地中海貧血預防控制操作指南》中“α、β地中海貧血的臨床分類、臨床特征”為依據。納入標準：①血液學指標檢測結果：平均紅細胞體積(MCV)＜80 fL和(或)平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)＜27 pg。②血紅蛋白電泳結果證實存在地中海貧血；③家族中有地中海貧血基因攜帶者或患兒。排除標準：已經接受輸血治療的地中海貧血患兒。所有患兒家屬均自愿接受臨床檢驗并簽署知情同意書,本研究經醫院倫理委員會批準。

1. 2 方法

1. 2. 1 研究方法 采用Gap-PCR檢測缺失型α地中海貧血,采用RDB技術對α和β地中海貧血基因點突變進行檢測,利用巢式PCR檢測疑似HKαα的樣本,同時利用基因測序對疑似罕見地中海貧血的樣本進行驗證。

1. 2. 2 檢測方法 ①儀器與試劑：PCR擴增儀、電泳儀和凝膠成像系統(美國Bio-Rad公司),XS-1000i全自動五分類血球計數儀(日本Sysmex公司),5430小型臺式高速離心機(德國Eppendorf公司),Capillarys2全自動毛細管電泳分析儀 (法國 Sebia 公司 ),NanoDrop 2000c 微量分光光度計 (美國Thermo公司),YN-H16恒溫雜交儀(深圳亞能公司),全血DNA快速提取試劑盒和珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測試劑盒(深圳亞能公司)。②標本采集：采集本院收治的疑似地中海貧血患兒靜脈血 2 ml,經 EDTA-K2 抗凝后 ,在 -80℃條件下保存。③地中海貧血實驗室篩查：經XS-1000i全自動五分類血球計數儀及其配套試劑對紅細胞計數、血紅蛋白、平均紅細胞血紅蛋白量、平均紅細胞體積進行檢測。經Capillarys 2全自動毛細管電泳分析儀及其配套試劑對血紅蛋白、血紅蛋白、胎兒血紅蛋白、異常血紅蛋白進行檢測,所有檢測均嚴格按照操作說明書進行。④基因檢測：首先進行基因組DNA提取,采集受試患兒200 μl靜脈血標本,以全血DNA快速提取試劑盒說明書操作為依據,對基因組DNA進行提取。而后進行缺失基因型檢測。

1. 3 統計學方法 采用Excel 2007軟件整理數據,經描述性統計方式對986例小兒α和β地貧基因突變類型及頻率分布進行分析。

2 結果

2. 1 地中海貧血基因檢測結果 檢出地中海貧血758例(76.88%),其中α地中海貧血400例(40.57%),β地中海貧血332例(33.67%),αβ復合型地中海貧血者26例(2.64%)。

2. 2 地中海貧血基因類型分布特征與突變頻率 400例α地中海貧血患兒中,檢出17種α地中海貧血突變基因類型,-SEA/aa所占比例為76.5%。332例β地中海貧血患兒中,檢出24種突變基因類型,IVS-2-654(C→T)雜合子所占比例為33.4%,mm1-42(-TCTT)雜合子所占比例為33.4%。26例αβ復合型地中海貧血患兒中,突變基因類型以IVS-2-654/N+--SEA/aa和 IVS-2-654/N + -α3.7/aa為主。

2. 3 罕見地中海貧血基因檢測結果 檢出HKαα/ααQS、α-地中海貧血突變基因類型CD61(AAG→TAG)/--SEA 1例,β地中海貧血基因突變類型CD5(CCT→C)1例。

3 討論

世界衛生組織對地中海的診斷標準中指出,6歲以下兒童 ,血紅蛋白標準為 120 g/L,若是不足這一水平 ,則可視為貧血［4］。在我國,貧血是兒童保健重點防治項目。曾有文獻報道,在6歲以下貧血患兒中,有90.00%以上為缺鐵性貧血,6 個月 ～2 歲嬰幼兒中 ,缺鐵性貧血更為常見［5,6］。

曾有研究顯示,在地中海貧血人群中,絕大部分患者均會攜帶地中海貧血缺失基因,但是并未表現出明顯的臨床癥狀［7,8］。目前的最終目標依舊是選擇性阻止重型地中海貧血胎兒的出生。現階段,地中海貧血干預防控手段中,對陰性人群的研究相對較少,多集中在地中海貧血篩查陽性人群的地中海貧血基因型分布的研究［9,10］。

本次研究中,以對小兒α和β地中海貧血基因類型進行分析探討為目的,對本院收治的疑似地中海貧血患兒的臨床檢測資料展開了回顧性分析,結果顯示,檢出地中海貧血758例(76.88%),其中α地中海貧血400例,β地中海貧血332例,αβ復合型地中海貧血者26例,400例α地中海貧血患兒中,檢出17種α地中海貧血突變基因類型,-SEA/aa所占比例為76.5%。332例β地中海貧血患兒中,檢出24種突變基因類型,IVS-2-654(C→T)雜合子所占比例為33.4%,mm1-42(-TCTT)雜合子所占比例為33.4%。26例αβ復合型地中海貧血患兒中,突變基因類型以IVS-2-654/N+-- SEA/aa和IVS-2-654/N+-α3.7/aa為主。檢出HKαα/ααQS、α-地中海貧血突變基因類型CD61(AAG→TAG)/--SEA1例,β地中海貧血基因突變類型CD5(CCT→C)1例。這一結果與相關文獻結果相似［11］。

綜上所述,小兒地中海貧血的基因突變類型呈現出復雜多樣性,存在罕見病例,臨床治療中應對其給予足夠的重視。