生豬常見傳染病檢測與處理

李 娟 楊偉翔 （廣東省深圳市寶安區動物衛生監督所 518101）

生豬狹義上是指育肥階段的豬，具有體格發育迅速、生理代謝旺盛的特點，此階段的豬免疫系統發育相對完善，但仍面臨多種傳染性疾病的威脅，常發疾病包括病毒類和細菌類等。不同病原微生物具有的特性不同，臨床檢測方法也有較大區別。下面就生豬常見傳染病的檢測與處理和大家作一下交流。

1 病毒類傳染病檢測

1.1 病毒培養法

病毒結構非常簡單，只有核酸、外殼蛋白和少部分附屬物，是自然界最簡單的生命體。由于缺乏自我增殖的細胞器，單獨存在不能進行自行復制，只有在感染細胞后才能增殖。利用這一特征，人們最初在檢測病毒性疾病時，都是依靠細胞培養法進行鑒定。無菌采取可疑組織器官，將其中病原分離并重新感染新的培養細胞，培養數日后，若細胞組織出現感染特征則可確定。病毒培養法檢測耗時長，培養條件苛刻，容易出現污染，失敗概率高，檢測成本較昂貴，結果判斷需要較高的專業水平，故臨床未能大范圍推廣，大部分都是局限于實驗室學術研究。

1.2 血清法

血清法是利用不同病毒或病毒的不同亞型具有的抗原決定簇不同，致使在感染機體后激發的免疫信號不同，最終產生針對性的抗體。臨床上，機體產生抗體有兩種原因，一種是疫苗免疫，機體通過對疫苗抗原的識別，針對性的產生抗體，從而保護機體免受野毒感染。另一種是野毒感染，如果生豬在未免疫前發生感染，機體也會產生抗體，但由于野毒一般毒力較強，抗體不足以將其消滅，但能通過測定抗體來驗證病豬所感染的病原類型，本文所討論的常見傳染病檢測屬于后者。

拿常見豬瘟檢測來講，采用瓊脂擴散試驗檢查時，用生理鹽水、磷酸鹽緩沖液或巴比妥緩沖液制成1%濃度的瓊脂，無菌條件制板后，在平板上打孔，以可疑豬的脾臟、淋巴結為被檢材料，剪碎、研磨、反復凍融作為已知抗原，以豬瘟血清為已知抗體，分別加入瓊脂板的中間孔和周邊孔中，讓其自由擴散，約4d后，如果能在中間孔和周邊孔中間觀察到白色沉淀線，則代表結果為陽性，可確定被檢材料中含有病毒，反之則無。

血清法和病毒培養法相比，只需抽取可疑豬的血液，通過測定血清中有無特異性抗體就能得到確診，操作簡單，準確率高，不但能鑒定出患豬感染的病原種類，還能檢測出具體血清類型，且檢測成本較低，對人員專業度要求不高，適合大規模推廣。目前，基于血清法推廣的檢測方法有瓊脂擴散實驗、抗原抗體沉淀法、ELISA法等，為我國養殖業的發展起到巨大的推動作用。

1.3 分子生物學法

自從核酸 （DNA或RNA）被發現并確定結構后，生物界大范圍興起遺傳物質的研究，不同生物間之所以不同，本質是因為遺傳物質的堿基序列不同，從而組合成不同的生命密碼。遺傳物質的不同是病毒微生物間本質的不同，通過測定病毒遺傳物質的特定序列來進行檢測無疑是最為準確可靠的方法，目前比較成熟的是PCR技術檢測，體外合成可疑病毒的特異性引物片段，將其序列擴增，如果病料中確實含有可疑病毒，便會在引物作用下進行大量復制，如果結果為陽性則可確診。

分子生物學法和病毒培養法、血清學方法相比，技術最為先進，檢測結果最為可靠，不但能鑒定出病原種類、血清類型，還能鑒定出感染病毒的具體亞型。對于科研工作者來講，通過分析不同病毒序列間的關系，得到具體的基因遺傳信息，并通過分析這些信息，對有用基因片段進行修飾、敲除或轉移，從而將病毒毒力致弱或消除，但又不會影響免疫原性，如豬偽狂犬基因缺失苗是將部分基因消除后得到新型疫苗，免疫后不但不會致病，還能將偽狂犬病毒的抗原決定簇很好的保留，最終得到一種新型偽狂犬疫苗。

2 細菌類傳染病檢測

2.1 細菌培養法

細菌在分類學上高于病毒，具有完整成套的細胞器，可以自我合成蛋白、脂類等有機化合物，和病毒培養的方法不同，細菌的培養并不需要感染細胞，只需要特定培養基就可以體外培養，培養基從形態上大致可以分為固體培養基、半固體培養基和液體培養基3種，固體培養基主要用于細菌菌落的鑒別和菌株的短期保存，半固體培養基主要用于可疑菌株運動性考察，而液體培養基則主要用于菌株增殖。

培養后的細菌并不能直接進行鑒定，必須通過綜合鑒別培養基結果、革蘭氏染色結果、鏡檢觀察結果綜合分析確定。如沙門氏菌在普通營養瓊脂上培養的菌落特征為表面光滑、邊緣整齊、半透明、近似灰白色、圓形突起的小菌落，革蘭氏染色呈陰性，鏡檢可見散在的，大小約為0.7～1.5μm×2.0～5.5μm，表面無莢膜，不形成芽孢的短小桿菌。細菌培養法操作簡單，容易掌握，檢測成本低，但結果可靠性差，大多數都是通過肉眼主觀判斷，不同的人可能會出現判讀結果的不一致。

2.2 生化鑒定法

細菌可以利用培養基中的營養成分進行自我生長繁殖和代謝，營養成分主要包括糖類、蛋白質、生長因子、礦物質等，不同病原性細菌所能利用的營養物有所差異，如大腸桿菌可利用乳糖而沙門氏菌不能，但二者都為革蘭氏染色呈陰性的球桿菌，通過鏡檢很難鑒別，利用乳糖發酵的生化鑒定便能將二者區別開來。除了能發酵不同的營養物外，發酵后產生的代謝產物也有較大差異，生化鑒定法正是利用不同微生物菌株所能利用的營養物質及最終代謝產物的不同而加以鑒別。常用的生化鑒定試驗有糖類發酵試驗、V-P試驗、MR試驗、淀粉水解試驗、吲哚試驗、硫化氫試驗、明膠液化試驗、接觸酶試驗等。

生化反應法檢測成本不高，結果與細菌培養法相比更為可靠，有時根據生化特征甚至能鑒定到菌株具體亞型，無需引入特殊檢驗設備，對操作人員的專業度要求也不高，臨床應用更為廣泛。但結果準確度仍存在較大偏差，即使同一種菌也有少部分菌因變異而出現與生化結果不一致的現象，且有些菌株發酵過程遲緩，結果判斷模糊。正因如此，生化發酵結果除了陽性和陰性之外，還有一個可疑的判定。

2.3 血清學和分子生物學法

血清學和分子生物學法基本和病毒的檢測法相同，只是細菌更為高等，結構更為復雜，有些菌如大腸桿菌、沙門氏菌等血清型達上百種，鑒定時需要種類非常多的特異性抗體才能檢測出，樣本處理量大。如按常規作大腸桿菌分離培養時，當病料中的可疑菌株被成功分離且驗純后，挑取乳糖培養基發酵的菌落分別與多價OK抗血清作玻片凝集試驗，如未發生凝集反應或凝集反應很弱，則視為陰性，如果其中的某些菌落與多價OK血清發生凝集反應，將菌落移種于營養瓊脂斜面上作進一步鑒定。再作進一步鑒定時推薦采用分子生物學法，細菌與病毒相比，因內部存在的核糖核酸較多，有些存在于細胞核中，有些存在于細胞質中，可供檢測的基因片段也要比病毒多，但檢測方法基本相同，最終檢測結果可靠，在這里不再詳述。

3 討論

生豬常見傳染性疾病除了病毒性和細菌性病原外，還有支原體、附紅細胞體、螺旋體等病原，只是臨床發病相對較少，且檢測方法較為復雜，很多基層硬性檢測條件不能滿足，人員專業度也不夠，使本病的報道較少，但其實這些病一直在基層呈地方流行。希望我國政府部門重視動物疫病檢測，加大快速檢測方法的研究投入，使基層對生豬傳染性疾病的檢測無強的專業性壁壘，真正做到疫病監控及時、高效，最大程度減少疫病帶來的損失。