弓形蟲感染對大鼠、小鼠血清一氧化氮濃度的影響

苑藝 李小靜

【摘 要】目的分析弓形蟲感染對大鼠、小鼠血清一氧化氮濃度的影響。方法 從實驗室中挑選出36只雌性的大鼠分成6組，每組6只。其中1組是正常對照組；2組是弓形蟲感染組；3組是地塞米松體重，隔天給予皮下注射，2周后停止注射；4組是地塞米松，隔天皮下組織注射2周后感染弓形蟲，并且停止注射；5組是試驗期間，地塞米松隔天皮下組織注射；6組同五組基本相同，在隔天給予皮下組織注射后，繼續注射地塞米松。每周觀察實驗大鼠的血液分離的血清濃度。第6周時處死大鼠，收集血清，將弓形蟲感染鼠的腦組織均漿轉種小鼠，并以腦組織為基本模板，RCR擴增弓形蟲SAGI基因。雌性昆明小鼠有36只，出于弓形蟲感染后5個小時處死6只小鼠，應用硝酸根還原酶法測定大鼠和小鼠血清一氧化氮濃度。結果正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲后，血清一氧化氮在第3周時逐漸提升，最后持續下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點時，呈現下降趨勢，應用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴增SADI片段。結論應用地塞米松可以減少大鼠的血清一氧化氮情況，弓形蟲感染也可以提升大鼠血清一氧化氮的水準，注射地塞米松或是在實驗檢測當中出現未注射地塞米松的大鼠感染弓形蟲后其血清一氧化氮的水準也會逐漸升高，但升高的幅度與速度并不相同，未注射地塞米松的大鼠所呈現的升高趨勢更加快速。小鼠感染弓形蟲后血清一氧化氮的情況是現減少再提升，但不能夠避免小鼠出現急性感染導致死亡的現象出現。

【關鍵詞】：弓形蟲；大鼠；小鼠；血清一氧化氮

【中圖分類號】R382 【文獻標識碼】A 【文章編號】1005-0019（2018）19-0-01

弓形蟲是臨床中比較罕見性的專門寄生在有核細胞體內的機會性致病原蟲感染菌，并且可以做到長時間的寄托在宿主體內，通常也是人們畏懼的艾滋病疾病等器官移植等患者的免疫功能受到損害或是出現現感染并發癥導致死亡的重要因素。針對弓形蟲的宿主來詳細分析，其分布的面積比較廣，針對不同動物所對待的弓形蟲存在容易感染的癥狀均不一樣[1]。在實施動物當中，小鼠對弓形蟲感染后5個小時后會出現死亡跡象。而大鼠則是不敏感，正常大鼠感染弓形蟲后，仍然是不明顯的臨床表現和身體特征。根據相關的報道顯示，大鼠對弓形蟲具有較強的抵抗力，可以通過應用免疫系統來壓制感染菌，腎上腺皮質激素在注射后，可以有效減少大鼠其巨吞噬細胞的能力。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

應用實驗室中的DNA試劑盒作為輔助測試，應用來自美國的生物工程公司，針對安徽生物工程有效公司出品，在實驗室給地塞米松藥液注射，需要采用廣東南部藥液公司所出品為主。針對一氧化化氮所測定的試劑盒和硝酸銀，都是來自南京建成生物工程有效公司[2]。

1.2 實驗動物

針對實驗室中的雌性大鼠以及清潔級雌性昆明小鼠都是由南方醫科大學實驗中心所給予提供[3]。

2-5組大鼠均在第3周給予腹腔種植弓形蟲株。每組大鼠在每周給予靜脈采血，待血液凝固后，離心分離血清，并且放在零下20度的設備中給予冷藏備用。在大鼠感染弓形蟲后的4周時，向其腹腔注射適量的鈉溶液，打麻醉后打開腹腔，腹部主動采集血液，放到溫度低的設備中等待凝固，2個小時候后分離血清。取出弓形蟲感染大鼠的腦組織進行均漿，并且還要取出一部分均漿液體用于提取DNA備用。

1.4 小鼠實驗

所有經過實驗小鼠的數量為30只，均在統一接受腹腔接種弓形蟲RH株種植10只后，分別于感染后5個小時，處死6只，正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲后，血清一氧化氮在第3周時逐漸提升，最后持續下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點時，呈現下降趨勢，應用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴增SADI片段。給予摘眼球采血技術，并且對于正常的昆明小鼠6只，給予摘眼球采血措施，在血清濃度上進行對比實驗。

1.5 統計學處理

將1-6組大鼠和小鼠的實驗資料以及各項研究數據準確的錄入SPSS16.0統計學軟件，平均年齡等計量資料描述為（），檢驗方法為t檢驗；計數資料描述為[n（%）]，檢驗方法為x2檢驗。若P<0.05，代表觀察組以及對照組數據間的差異顯著，有統計學意義。

2 結果

2.1 分析6組大鼠血清一氧化氮濃度測定結果

經過研究發現， 正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲后，血清一氧化氮在第3周時逐漸提升，最后持續下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點時，呈現下降趨勢，應用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴增SADI片段。詳情見以下表格。

2.2 腦勻漿轉種小鼠結果

5組實驗室內的大鼠腦組織勻漿轉種小鼠 ， 其余均未分離出。

2.3 分析PCR結果

經過研究得知，4組 1-6組大鼠腦組織擴增出大小為 522 bp 特異的 SAG1 片段， 其他大鼠結果呈現陰性， 其 PCR 結果見圖 2。

3 討論

現如今，對殺滅或是控制弓形蟲速殖的機制還并不是完全的掌握，但一氧化氮被認為在感染菌當中起到了很重要的作用[5]。為了分析大鼠和小鼠對弓形蟲容易感染的不同與其體內的血清一氧化氮水平的不同關系，以此地塞米松對弓形蟲感染對大鼠血清一氧化氮水平的有直接的影響[6]。面對實驗室內部的一氧化氮廣泛的出現在每個組織當中，在出現免疫調解等情況中起到了很多重要的影響。很多疾病因素能夠出現一氧化氮表達在逐漸提升，從而造成大量的血清組織濃度，從而可以有效提高激發特異性免疫功能和避免感染菌。一氧化氮在弓形蟲感染被認為最重要的因素附在宿主的體內。針對實驗的大鼠和小鼠詳細情況顯示，大鼠體內的一氧化氮對抗體起到了很大的保護作用。

綜合上述分析可以有效明確，以上實驗結果為，正常組大鼠在平均6周后一氧化氮的濃度比2-5組大鼠的血清濃度要高很多，2組大鼠感染弓形蟲后，血清一氧化氮在第3周時逐漸提升，最后持續下降，至第6周比3組大鼠的一氧化氮濃度要上升。至第5周升到最高點時，呈現下降趨勢，應用PCR的方法從五組中的一只大鼠的腦組織擴增SADI片段[7]。采用地塞米松可以減少大鼠的血清一氧化氮情況，弓形蟲感染也可以提升大鼠血清一氧化氮的水準，注射地塞米松或是未注射地塞米松的大鼠感染弓形蟲后其血清一氧化氮的水準也會逐漸升高，但升高的幅度與速度并不相同，未注射地塞米松的大鼠所呈現的升高趨勢更加快速。小鼠感染弓形蟲后血清一氧化氮的情況是現減少再提升，但不能夠避免小鼠出現急性感染導致死亡的現象出現[8]。

參考文獻

楊瑞， 夏嬙， 岳續鵬，等. 剛地弓形蟲感染致雄性小鼠血睪屏障及生精細胞損傷的研究[J]. 中國病原生物學雜志， 2016（7）：634-637.

侯世環. 漿細胞樣樹突狀細胞對弓形蟲感染急性炎癥中免疫應答的影響[D]. 山東農業大學， 2017.

馮永杰， 陸瑤瑤， 董輝，等. 小鼠感染VEG株弓形蟲病急性期IgG抗體的動態變化[J]. 中國獸醫學報， 2018（2）：359-363.

馬群山， 劉欣超， 孫曉妮，等. 剛地弓形蟲鈣依賴蛋白激酶9對小鼠Ana-1巨噬細胞功能的影響[J]. 畜牧獸醫學報， 2017， 48（4）：731-739.

聶清， 陳偉， 李勤，等. 急性弓形蟲感染小鼠氧化應激狀態對免疫功能影響及香菇多糖的調控作用[J]. 中國衛生工程學， 2018（2）.

郭玉娟， 謝園園， 儲德勇，等. Ⅱ型弓形蟲和血吸蟲重疊感染對小鼠肝纖維化作用的實驗研究[J]. 安徽醫科大學學報， 2016， 51（2）：161-165.

張瓊， 張婧， 高勁松，等. 自噬調控劑對小鼠體內弓形蟲增殖的影響[J]. 數理醫藥學雜志， 2016， 29（3）：319-321.

陸瑤瑤， 翟少華， 祝子伏，等. 綿羊弓形蟲TgSheepHn1對小鼠的病理損傷及其抗原分布特點[J]. 中國人獸共患病學報， 2018， 34（6）.