辛伐他汀誘導胃癌BGC-823細胞凋亡的效應研究

歐陽騫 ，陳慧娟 ，徐芳菲 ，黃先明 ，邱宇安 ，羅文政

胃癌是消化系統最常見的惡性腫瘤之一，其起病隱匿，大多數患者在就診時就已處于進展期，因此其預后較差[1-3]，探索新型抗胃癌藥物一直是臨床腫瘤學研究、藥理學研究的熱點。他汀類藥物是目前臨床上治療高膽固醇血癥的主要藥物，其通過抑制羥甲基戊二酰單酰輔酶 A（HMG-CoA）還原酶發揮降低血清膽固醇作用[4]。近年來，諸多研究顯示他汀類藥物還具有抑制腫瘤增殖，誘導腫瘤細胞凋亡與分化，降低腫瘤細胞侵襲轉移能力等作用[5，6]。辛伐他汀是臨床上常用的他汀類降血脂藥物，本研究旨在探討辛伐他汀誘導胃癌BGC-823細胞凋亡的效應，現報告如下。

1 材料與方法

1.1實驗材料 人胃癌BGC-823細胞由上海信然生物科技有限公司提供，DMEM培養基由美國Promega公司提供，CCK-8試劑盒、Annexin V/PI試劑盒均由聯科生物科技有限公司提供，FACSCALIBUR流式細胞儀由美國B-D公司提供，HBS-1096A酶標儀由南京德鐵公司提供。

1.2 方法

1.2.1 CCK-8細胞增殖法檢測胃癌BGC-823細胞生長抑制率 將對數生長期胃癌BGC-823細胞接種于每孔含DMEM培養液（青霉素、鏈霉素濃度均為 100IU/ml）180μl的 96 孔板中，3×103細胞/孔，向 各 孔 中 加 入 50.00μmol/L、25.00μmol/L、12.50μmol/L、6.25μmol/L 辛伐他汀 20μl，因此這 4個反應體系中辛伐他汀終濃度分別為5.00μmol/L、2.50μmol/L、1.25μmol/L、0.63μmol/L， 注意同時設立空白對照，每個樣本作6個復孔。5%CO2條件下培養 68h后每孔中加入 CCK-8溶液 20μl，在540nm波長處采用酶標儀測定吸光度值，并根據試驗孔、空白對照孔吸光度值計算胃癌BGC-823細胞生長抑制率，并進一步根據辛伐他汀終濃度及其對應的生長抑制率求得辛伐他汀對胃癌BGC-823細胞的藥物半數抑制濃度（IC50）。生長抑制率（%）=（無藥細胞對照孔A值平均值-用藥孔A值平均值）/無藥細胞對照孔A值平均值×100%，并采用GraphPad Prism 5軟件計算IC50。

1.2.2 流式細胞法檢測胃癌BGC-823細胞凋亡率將對數生長期胃癌BGC-823細胞接種于96孔板中，1×106細胞/孔，采用上述方法配制辛伐他汀終濃 度 分 別 為 2.00μmol/L、1.00μmol/L、0.00μmol/L的3個反應體系，經48h后收集細胞制備1×106細胞/L的單細胞懸液，取500μl單細胞懸液加入Annexin V/PI各 5μl，避光染色 30min后采用FACSC-ALIBUR流式細胞儀FL1、FL3雙通道檢測細胞凋亡率。

1.3 統計學分析 采用SPSS 19.0統計軟件，不同反應體系中胃癌BGC-823細胞生長抑制率、凋亡率比較采用單因素方差分析、兩兩比較q檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 四組反應體系中胃癌BGC-823細胞生長抑制率的比較 A組、B組、C組、D組胃癌BGC-823細胞生長抑制率比較差異有統計學意義（P＜0.01），A組生長抑制率顯著高于B組、C組、D組（P＜0.01），B組生長抑制率顯著高于C組、D組 （P＜0.01），C組生長抑制率顯著D組（P＜0.01）。辛伐他汀對胃癌BGC-823細胞的IC50為1.15μmol/L。見表1。

表1 4組反應體系中胃癌細胞生長抑制率的比較（x±s，%）

2.2 三組反應體系中胃癌BGC-823細胞凋亡率的比較 E組、F組、G組胃癌BGC-823細胞凋亡率比較差異有統計學意義（P＜0.01），E組凋亡率顯著高于F組、G組 （P＜0.01），F組凋亡率顯著高于G組（P＜0.01）。 見表 2。

表2 三組反應體系中胃癌BGC-823細胞凋亡率的比較（x±s，%）

3 討論

胃癌是消化系統最常見的惡性腫瘤之一，其位居我國城市地區惡性腫瘤發病率、死亡率的第三位，男性發病率高于女性[7-9]。胃癌的病因與地域環境、飲食習慣、幽門螺桿菌感染、遺傳和基因等方面相關[10]。與其他大多數惡性腫瘤一樣，胃癌起病隱匿，很多病人早期并沒有明顯的臨床表現，僅表現出上腹部疼痛、惡心、食欲不振等非典型消化道癥狀，但隨著腫瘤的進展，其病情進入中晚期，嘔血、黑便、消化道梗阻、消瘦、惡病質等典型的臨床癥狀及體征逐步出現，但此時病人多已喪失最佳手術治療機會。基于上述情況，在將來很長一段時間內，胃癌病人仍然需要采用各種藥物進行抗腫瘤治療，包括早中期胃癌的圍手術期藥物治療，晚期胃癌的藥物姑息治療等，因此有必要探索安全、有效的抗胃癌藥物應用于臨床。

他汀類藥物是目前臨床上使用最廣、最有效的降膽固醇藥物。近年來，隨著對抗腫瘤輔助治療藥物的不斷深入研究，他汀類藥物被認為可通過抑制腫瘤細胞增殖、轉移，促進腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤血管生成等機制發揮一定的抗腫瘤的作用。辛伐他汀是臨床上最常用的他汀類藥物，目前多項研究發現辛伐他汀可以通過多種分子機制對各種腫瘤細胞產生影響，包括神經膠質瘤細胞、非小細胞肺癌細胞、頭頸部鱗癌細胞、乳腺癌細胞、黑色素瘤細胞等[11-13]。既往亦有研究，辛伐他汀可通過上調Bax蛋白，下調Bcl-2、Survivin蛋白表達等機制抑制胃癌SGC-7901細胞生長，并促進胃癌細胞凋亡[14，15]。

為研究辛伐他汀對不同胃癌細胞系的作用，本課題我們選用胃癌BGC-823細胞作為研究對象，初步研究顯示，隨著反應體系中辛伐他汀濃度的增加，胃癌BGC-823細胞生長抑制率亦隨之升高，各濃度組之間比較差異有顯著性，其IC50為1.15μmol/L。進一步根據IC50設計新的反應體系，結果顯示胃癌BGC-823細胞凋亡率與反應體系中辛伐他汀濃度密切相關，即辛伐他汀濃度越高，胃癌BGC-823細胞凋亡率同樣隨之升高。由此可見，辛伐他汀可顯著抑制胃癌BGC-823細胞生長并誘導其凋亡，但是其具有機制有待臨床進一步研究。