59例急性白血病免疫分型分析

陳 瑤

（無錫市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 無錫 214002）

傳統(tǒng)白血病分型都是以形態(tài)學(xué)為依據(jù)的，隨著免疫學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展，對急性白血病患者進(jìn)行免疫分型可以辨別白血病細(xì)胞的來源和所處階段[1]。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)對我院59例急性白血病患者的骨髓標(biāo)本進(jìn)行免疫分型，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2014年1月至2017年7月在我院住院的59例急性白血病患者，年齡3～91歲，其中成人56例（男30例，女26例），兒童3例（男1例，女2例）。所有患者均按照FAB分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行形態(tài)學(xué)分類。所有白血病患者均抽取肝素抗凝骨髓1～2 mL。

1.2 方法

取試管加入抗凝骨髓100 μL、三色熒光直接標(biāo)記的抗體及同型對照各20 μL，室溫避光孵育20 min，再加入溶血劑1 mL混勻，避光放置10 min后加入PBS洗滌，以1500 rpm/min離心5 min后棄去上清液。

1.3 流式細(xì)胞術(shù)分析

貝克曼FC500-MC2型流式細(xì)胞儀檢測，采用CD45/SSC設(shè)門法，488 nm激發(fā)光源。CD34≥10%為陽性，CD7≥30%為陽性，其他標(biāo)志物≥20%為陽性。

2 結(jié) 果

2.1 59例急性白血病患者免疫分型結(jié)果

40例AML患者陽性表達(dá)率為CD13＞CD33＞CD64＞CD117＞CD14，均表達(dá)1種及以上髓系抗原。40例中有10例（25.0%）伴淋系抗原表達(dá)，最常見為CD7和CD19。在15例ALL患者中有3例（20.0%）伴髓系抗原表達(dá)，常見為CD13和CD33。1例HAL患者均表達(dá)髓系、T系和B系抗原。見表1。

表1 59例急性白血病患者免疫分型結(jié)果

續(xù)表

2.2 淋系各相關(guān)抗原的敏感性與特異性分析結(jié)果，見表2

表2 淋系抗原的敏感性與特異性分析結(jié)果

3 討 論

目前，對于急性髓細(xì)胞白血病的主要診斷方法為骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)，這也是對該病進(jìn)行診斷的基礎(chǔ)。而在大量的實(shí)踐研究中得出，對于未分化的白血病及一些形態(tài)學(xué)不典型的白血病在診斷時(shí)仍具有一定的局限性，存在一定的缺陷。單克隆技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域逐漸發(fā)展并得到了廣泛的應(yīng)用，免疫學(xué)分型在急性白血病的診斷中逐漸普遍應(yīng)用[2-3]，大大提高了疾病診斷準(zhǔn)確率，具有一定的客觀性及重復(fù)性。有相關(guān)的調(diào)查研究結(jié)果顯示[4-5]，細(xì)胞過氧化物酶染色在3%以下的急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷與免疫細(xì)胞化學(xué)診斷符合率僅在53%左右。該類白血病細(xì)胞表現(xiàn)出的細(xì)胞形態(tài)十分復(fù)雜[6]，因此，需要采用免疫分型才能進(jìn)行確診，從而提高診斷準(zhǔn)確率，對于疾病的及時(shí)有效治療有積極意義[7-8]。

利用單克隆抗體檢測白血病細(xì)胞表面不同時(shí)相出現(xiàn)抗原的表達(dá)情況即為流式細(xì)胞術(shù)免疫分型，用以了解被測細(xì)胞的來源及分化程度，從而對白血病進(jìn)行分類。

本研究發(fā)現(xiàn)40例AML患者最常見的抗原表達(dá)是CD13（87.5%）、CD33（70.0%）。CD13可表達(dá)于髓系祖細(xì)胞及成熟粒細(xì)胞上，而作為髓前體細(xì)胞標(biāo)記的CD33在粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中有較高表達(dá)。本研究顯示在40例AML中，CD117除在M0中100%表達(dá)，M1、M2中部分表達(dá)外，其它各亞型均無表達(dá)，說明CD117是干/祖髓細(xì)胞的標(biāo)志，可作為判斷M0的指標(biāo)之一。同時(shí)CD117在ALL中不表達(dá)，提示CD117是髓系比較特異性的標(biāo)記，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。

在40例AML患者中有6例表達(dá)淋系抗原CD7（占15.0%），與國外文獻(xiàn)報(bào)道CD7與髓系有15%的交叉反應(yīng)一致，并指出CD7表達(dá)陽性多見于M2和M5，表達(dá)率越高，對化療越不敏感，預(yù)后越差。

ALL是一組高度異質(zhì)性的疾病，流式細(xì)胞術(shù)免疫分型可以根據(jù)白血病細(xì)胞的特征性抗原將ALL分為B-ALL、T-ALL及其各種亞型。本實(shí)驗(yàn)15例ALL中，11例（73.3%）為B-ALL，4例（26.7%）為T-ALL，B-ALL占大多數(shù)，同已有報(bào)道一致[10]。

11例B-ALL中CD19和CD10陽性率高，分別為81.8%和54.5%，因此對于B-ALL來說，CD19和CD10最具有診斷價(jià)值。

本研究還收集了一例罕見的急性混合性白血病，回顧該病例，發(fā)現(xiàn)形態(tài)學(xué)檢查主觀意識強(qiáng)，靈敏度低，容易誤診。因此當(dāng)遇到形態(tài)學(xué)難以鑒別的細(xì)胞時(shí)，只有靠免疫分型來確診。

現(xiàn)已公認(rèn)M0、M6、M7可通過免疫分型確診，而M1-M5 缺乏特異性單抗，其診斷仍需結(jié)合形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)來綜合考慮，對于這一點(diǎn)我們要高度重視。

隨著對白細(xì)胞分化抗原研究的日益深入和免疫學(xué)單克隆抗體技術(shù)的不斷發(fā)展，利用流式細(xì)胞術(shù)免疫分型可以全面、客觀、精準(zhǔn)地對急性白血病進(jìn)行分型、診斷，并對臨床治療和預(yù)后分析具有重要意義。

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