β-catenin在非特殊型浸潤性導管癌中的表達及其對患者預后的影響

楊麗敏，秦鳳霞，黃勇，馬勇杰

（天津醫科大學腫瘤醫院，國家腫瘤臨床醫學研究中心，乳腺癌防治教育部重點實驗室，天津市“腫瘤防治”重點實驗室，天津市惡性腫瘤臨床醫學研究中心，天津300060）

乳腺癌是嚴重危害女性生命健康的常見惡性腫瘤之一，其發病率呈不斷上升趨勢。我國乳腺癌患者發病率每年約以3%~4%以上的速度遞增，因此，預防和治療乳腺癌具有重大意義。β-catenin是一種多功能蛋白，重要功能是參與細胞間的相互黏連，在乳腺上皮中，β-catenin通過介導與 E-cadherin的相互作用，將細胞外黏附分子與胞質內組織骨架相互連接，以保持質膜的完整性，并參與細胞的黏附、遷徙與轉移等過程。隨后的研究發現，它不僅是細胞黏附分子，還是wnt信號通路中重要的傳遞因子。在細胞核中，β-catenin通過調節基因表達過程，在乳腺癌發生發展中具有重大作用。本研究采用免疫組織化學方法檢測β-catenin在273例非特殊型浸潤性導管癌（IDC-NOS）中的表達，并分析其表達情況與乳腺癌臨床病理特征及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 病例資料 隨機選取天津醫科大學腫瘤醫院2004-2006年病例資料完整的經病理診斷證實的IDC-NOS 273例，并對其標本對應的石蠟切片進行免疫組化染色。273例IDC-NOS患者均為女性，年齡27~76歲，平均年齡為50.00歲。患者的隨訪起點為手術日期，末次隨訪時間為2014年11月24日，平均隨訪73．5月。至隨訪截止日，有44例（16．1%）患者出現了腫瘤的復發或遠處轉移，25例（9．2%）患者死于癌癥。

1．2 免疫組化染色 免疫組織化學染色采用鏈霉素抗生物素-過氧化物酶免疫組化試劑盒SP-9000操作說明進行，簡述如下：組織切片經脫蠟復水，組織抗原修復（pH=6．0的枸櫞酸鹽緩沖液），3%H2O2室溫孵育10 min，試劑2（非特異性染色阻斷劑）室溫孵育20 min，滴加β-catenin鼠抗人單克隆抗體（Santa Cruz），4℃過夜，室溫復溫45 min后，滴加試劑3（生物素標記的羊抗鼠/兔IgG）37℃孵育20 min，PBS清洗3次，滴加試劑4（鏈霉卵白素-過氧化物酶）37℃孵育20 min，之后用DAB顯色，蘇木精復染，1%鹽酸酒精分化，0．2%氨水返藍，脫水透明后封片。

1．3 結果判斷 免疫組織化學的檢測結果由兩位病理學醫師獨立觀察得出。β-catenin染色結果分別從細胞膜、細胞漿兩個方面判斷β-catenin在癌細胞內的分布，膜陽性細胞率＞70%為正常表達，膜陽性細胞率≤70%為表達減弱或缺失；細胞漿陽性率＞10%為胞漿異位表達。膜表達減弱或缺失及胞漿異位表達均稱作異常表達。ER的判定以1%為臨界值，至少1%腫瘤細胞顯示核顯色時，將腫瘤判讀為ER陽性[1-2]。

1．4 統計學分析 采用SPSS 19．0統計軟件包進行數據分析，以P＜0．05為差異有統計學意義。各組間臨床病理資料及差異的比較使用χ2檢驗，β-catenin的表達情況與臨床病理參數的相關性分析采用Spearman秩相關檢驗?？偵娣治龊蜔o進展生存分析采用Kaplan-Meier法分析，總生存期是從診斷日期到因乳腺癌死亡的日期，無進展生存期是由手術日期到癌癥復發、轉移或者死亡的日期。

2 結果

2．1 β-catenin的表達情況與IDC-NOS患者預后的關系 本研究中β-catenin有 11．7%（32/273）僅表現胞漿著色，65．2%（178/273）僅胞膜著色，14．7%（40/273）既有胞漿著色又有胞膜著色，其余為陰性表達，未見胞核著色。根據癌細胞中β-catenin的胞漿、胞膜表達情況將β-catenin的表達分為正常表達和異常表達。在273例IDC-NOS患者中，有133例（48．7%）患者屬于β-catenin正常表達，140例（51．3%）患者呈現出β-catenin異常表達，見圖1。Kaplan-Meier生存分析發現，β-catenin異常表達的乳腺癌患者預后差（圖2A，2B）。

圖1 IDC-NOS患者β-catenin表達免疫組化圖（×200）Fig 1 β-catenin expression in IDC-NOS patients（×200）

圖2 β-catenin正常表達與異常表達患者的生存分析Fig 2 Survival analysis of normal and aberrant expressions of β-catenin in IDC-NOS patients

2．2 β-catenin的表達與IDC-NOS患者臨床病理參數的關系 分析β-catenin的異常表達與乳腺癌的各項臨床病理參數的相關性，發現β-catenin的異常表達與年齡、組織學分級、腫瘤大小、淋巴結轉移狀態、復發和/或遠處轉移、孕激素受體（PR）、人類表皮生長因子受體2狀態（HER2）在內的病理指標均無相關性，與雌激素受體狀態（ER）呈顯著負相關關系（rs=-0．134，P=0．027）（表 1）。

表1 β-catenin的異常表達與浸潤性導管癌臨床病理參數的相關性Tab 1 The relationship between β-catenin and pathological features of IDC-NOS

2．3 不同 ER表達狀態下，β-catenin的表達與IDC-NOS患者預后的關系 由于ER與β-catenin的異常表達呈負相關，本研究聯合分析ER狀態與β-catenin表達情況對預后的影響，發現在ER陰性的患者中（n=104），β-catenin異常表達患者與β-catenin正常表達患者的預后沒有差異（圖3A，3B），然而在 ER 陽性的患者中（n=168），β-catenin異常表達提示預后不良（圖3C、3D）。

圖3 在ER陰性患者（A，B）和ER陽性患者（C，D）中，β-catenin正常表達與異常表達患者的生存曲線分析Fig 3 The survival curves of normal and aberrant expressions of β-catenin in ER-negative patients(A,B)and ER-positive patients(C,D)

3 討論

β-catenin是一種多功能蛋白，在腫瘤發生發展過程中發揮多重作用。β-catenin可與E-cadherin的胞質區相連形成復合體，在介導和調節同質細胞黏附中起著重要作用[3-4]。同時，β-catenin也是wnt信號轉導通路的中心效應器[5-6]。胞漿中積累的β-catenin進入細胞核，與TCF/LEF（T cell factor/lymphoid enhancer factor）家族的DNA結合蛋白結合，轉錄激活并調控下游靶基因的表達[7-9]。

許多研究表明β-catenin在乳腺癌的發生發展過程中起著舉足輕重的作用[10]，但是在乳腺癌標本中，β-catenin的免疫組織化學染色結果還很混亂，主要是由于β-catenin的亞細胞定位以及分析方法不同。Li等[11]通過免疫組織化學技術檢測了169例浸潤性乳腺癌標本，觀察到β-catenin的胞膜、胞漿及胞核中都有著色，且認為β-catenin胞漿和胞核陽性著色為wnt通路激活狀態，β-catenin胞漿和胞核陽性表達的乳腺癌患者預后差。López-Knowles等[12]使用免疫組織化學染色技術檢測了276例浸潤性導管癌標本中β-catenin的表達，有4%（12/276）的患者僅胞膜著色，5%（15/276）僅胞漿著色，其余的胞漿、胞膜都有著色，另外僅在3例患者中觀察到β-catenin胞核著色。研究者認為β-catenin胞漿表達水平高于β-catenin胞膜表達水平的乳腺癌患者預后差。Pang等[13]表明β-catenin在乳腺癌細胞的細胞膜上表達，β-catenin低表達的乳腺癌患者預后差。Zhang等[14]通過meta分析發現，細胞質/細胞核中β-catenin的高表達的乳腺癌患者預后差，而細胞膜上β-catenin的表達不能指示預后。

本研究通過免疫組織化學染色實驗檢測了273例浸潤性導管癌標本中β-catenin的表達，其中有11.7%（32/273）僅胞漿著色，65.2%（178/273）僅胞膜著色，14.7%（40/273）既有胞漿又有胞膜著色，其余為陰性表達，并未發現有胞核著色。將胞膜表達低于70%或胞漿表達高于10%視為β-catenin異常表達，共有133例（48.7%）患者表現出β-catenin正常表達，140例（51.3%）患者表現出β-catenin的異常表達。對其生存分析發現，β-catenin異常表達的乳腺癌患者預后差。通過Spareman相關分析發現，β-catenin的異常表達與患者的ER狀態顯著負相關，ER陽性時β-catenin正常表達所占的比例高（rs=-0.134，P=0.027）。

有文獻報道，β-catenin能夠正調ERα下游靶基因的表達[15]。本研究通過聯合分析ER的狀態與β-catenin表達情況對乳腺癌患者預后的影響發現，在ER陰性的患者中，β-catenin異常表達與正常表達的乳腺癌患者的預后沒有差異，而在ER陽性的患者中，β-catenin異常表達的乳腺癌患者預后差于β-catenin正常表達的患者。表明在ER陽性的條件下，β-catenin的表達情況才能夠影響乳腺癌患者的預后。這可能是由于β-catenin能夠增強ER的轉錄激活作用，進而促進下游靶基因轉錄，最終導致腫瘤的發生。

綜合以上分析結果得出，β-catenin在IDC-NOS中的異常表達與ER的狀態呈負相關。在ER陽性的條件下，β-catenin的表達情況能夠影響IDCNOS患者的預后。

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