非酒精性脂肪性肝病進(jìn)程中VAP—1/SSAO的動(dòng)態(tài)變化

高蕾 陳曦 歐喜燕

【摘 要】目的：探究非酒精性脂肪性肝病進(jìn)程中VAP-1/SSAO的動(dòng)態(tài)變化。方法：選擇SD大鼠60只，按照體重分為對(duì)照組和模型組，每組各30只。于8、16、24周末分別取樣進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。結(jié)果：模型組血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1、sVAP-1含量明顯增高（P<0.001）。結(jié)論：隨著疾病的進(jìn)展血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1、sVAP-1等指標(biāo)會(huì)發(fā)生明顯變化，持續(xù)的炎癥反應(yīng)是驅(qū)動(dòng)NAFLD進(jìn)展的關(guān)鍵因素。

【關(guān)鍵詞】 非酒精性脂肪肝；進(jìn)展；VAP-1/SSAO；動(dòng)態(tài)變化

【中圖分類號(hào)】R249 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】B 【文章編號(hào)】1005-0019（2018）24-206-01

非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease， NAFLD）包括單純性脂肪肝（Simple fatty liver， SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic fatty hepatitis， NASH）及其相關(guān)肝硬化，是遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)性疾病。本研究將通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察大鼠在非酒精性單純脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化不同階段時(shí)VAP-1及其酶活性水平的動(dòng)態(tài)變化，以期為治療疾病、阻斷疾病進(jìn)展提供新的靶點(diǎn)。

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

SD大鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，220-250g，60只。適應(yīng)環(huán)境后按體重隨機(jī)分為2組，分別為空白對(duì)照組30只；模型組30只。

NAFLD模型復(fù)制：模型組動(dòng)物給予復(fù)合高脂飼料飲食（高脂飼料配制方法如下：在77%基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上，加入3%膽固醇、10%豬油和10%蛋黃粉。投食量約為：25g/鼠/天。）。每周稱重1次，持續(xù)造模24周。空白對(duì)照組動(dòng)物給予正常飲食、水。

2 檢測(cè)指標(biāo)

于8、16、24周末分別取樣進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。第8、16、24周末，動(dòng)物禁食不禁水12h，以20%烏來糖溶液麻醉（5ml/kg體重）后，腹主動(dòng)脈取血，4℃，3000rpm/min，10min，取血清保存?zhèn)溆谩２捎妹嘎?lián)免疫法檢測(cè)大鼠血清中IL-6、TNF-α含量；檢測(cè)大鼠血清中TGF-β1（轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1）含量；檢測(cè)大鼠血清中sVAP-1（可溶性血管粘附蛋白-1）含量及血清SSAO酶活性（氨基脲敏感單胺脫氧酶）。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所列數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用組間t-檢驗(yàn)。采用Excel2000軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

4 結(jié)果與討論

4.1 兩組大鼠血清中相關(guān)炎癥因子的表達(dá)

目前“二次打擊”學(xué)說在NAFLD發(fā)病機(jī)制中的重要地位已得到一致認(rèn)可。第一次打擊是指胰島素抵抗（insulin resistance， IR）導(dǎo)致脂質(zhì)在肝細(xì)胞的蓄積。但I(xiàn)R發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，近年來炎癥病因?qū)W理論備受關(guān)注，IR和慢性低度炎癥狀態(tài)有關(guān)。氧化應(yīng)激是“二次打擊”學(xué)說的第二次打擊，通常認(rèn)為氧化應(yīng)激在肝臟炎癥的發(fā)生中起重要作用，研究表明，隨著高脂飲食時(shí)間的延長(zhǎng)，該組大鼠肝組織脂肪變與炎癥程度均逐漸加重。NAFLD包含一系列的表現(xiàn)，包括從脂肪變性到炎癥、纖維化、肝硬化的不同疾病發(fā)展階段，這一進(jìn)展過程確切機(jī)制尚不清楚，但對(duì)肝損傷持續(xù)的炎癥反應(yīng)是驅(qū)動(dòng)疾病進(jìn)展為肝纖維化、肝硬化甚至肝細(xì)胞癌的關(guān)鍵因素。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模8、16、24周，模型組大鼠與正常對(duì)照組比較，其血清中IL-6、TNF-α含量明顯增高（P<0.001）。

4.2 大鼠血清中TGF-β1的表達(dá)

TGF-β是屬于一組新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的TGF-β超家族。近年來發(fā)現(xiàn)TGF-β對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和免疫功能都有重要的調(diào)節(jié)作用。一般來說，TGF-β對(duì)間充質(zhì)起源的細(xì)胞起刺激作用，而對(duì)上皮或神經(jīng)外胚層來源的細(xì)胞起抑制作用。TGF-β可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，加速肝纖維化的發(fā)展，加重肝損害。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模8、16、24周，模型組大鼠與正常對(duì)照組比較，其血清中TGF-β1含量明顯增高（P<0.001）。

4.3 大鼠血清中sVAP-1的表達(dá)及血清SSAO酶活性

血管粘附蛋白1（Vascular adhesion protein-1，VAP-1）由AOC3基因所編碼，是一個(gè)內(nèi)皮粘附分子，與白細(xì)胞從血液遷移進(jìn)入炎癥組織有關(guān)，與其他眾多粘附分子相比，VAP-1的不同之處在于它是一個(gè)表達(dá)于細(xì)胞表面的酶，氨基脲敏感單胺脫氧酶（Semicarbazide-sensitive mono-amine oxidase，SSAO），屬于氨基脲胺氧化酶家族（也稱為伯胺氧化酶），因此VAP-1具有雙重功能。VAP-1屬于SSAO家族，VAP-1的酶活性對(duì)其發(fā)揮粘附功能具有重要作用，并且通過其生物活性產(chǎn)物調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子、趨化因子和其他粘附分子表達(dá)從而協(xié)同調(diào)節(jié)炎癥微環(huán)境。正常狀況下VAP-1儲(chǔ)存在常駐內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)顆粒中，在炎癥發(fā)生早期，VAP-1迅速轉(zhuǎn)位到細(xì)胞表面，參與白細(xì)胞在炎癥部位的募集，同時(shí)也在白細(xì)胞在內(nèi)皮的滾動(dòng)、粘附和遷移環(huán)節(jié)等入侵級(jí)聯(lián)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，協(xié)助白細(xì)胞從血液進(jìn)入組織。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模8、16、24周，模型組大鼠與正常對(duì)照組比較，其血清中sVAP-1含量明顯增高（P<0.001），血清SSAO酶活性明顯增高（P<0.001）。

5 小結(jié)

本研究通過采用高脂飲食誘導(dǎo)的方法建立NAFLD大鼠模型，觀察NAFLD模型大鼠在疾病進(jìn)展的不同階段其炎癥因子水平（血清中IL-6、TNF-α）的變化；纖維化相關(guān)細(xì)胞因子水平（血清中TGF-β1）的變化；及血清中sVAP-1和血清SSAO酶活性的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著疾病的進(jìn)展，以上各指標(biāo)均發(fā)生明顯改變。由此可見，持續(xù)的炎癥反應(yīng)是驅(qū)動(dòng)NAFLD進(jìn)展的關(guān)鍵因素，我們推測(cè)，在此過程中VAP-1/SSAO起著復(fù)雜的作用，它既能促進(jìn)初始肝損傷時(shí)肝臟的白細(xì)胞招募，又通過其生物活性協(xié)同調(diào)節(jié)炎癥微環(huán)境，從而在炎癥慢性化、以至肝纖維化的進(jìn)程中起重要作用[1，2]。本研究為NAFLD的治療提供了新的靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃婷婷，趙麗娟，姜雙燕，等.快速?gòu)?fù)制大鼠非酒精性脂肪性肝病模型及主要臟器的病理變化[J].西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志2018（2）：71-74.

[2] 舒祥兵，張莉，黃杰，等.鐵超載與非酒精性脂肪性肝病的關(guān)系及其作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2016（22）：81-86.