非酒精性脂肪性肝病進程中VAP—1/SSAO的動態變化

高蕾 陳曦 歐喜燕

【摘 要】目的：探究非酒精性脂肪性肝病進程中VAP-1/SSAO的動態變化。方法：選擇SD大鼠60只，按照體重分為對照組和模型組，每組各30只。于8、16、24周末分別取樣進行相關指標的檢測。結果：模型組血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1、sVAP-1含量明顯增高（P<0.001）。結論：隨著疾病的進展血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1、sVAP-1等指標會發生明顯變化，持續的炎癥反應是驅動NAFLD進展的關鍵因素。

【關鍵詞】 非酒精性脂肪肝；進展；VAP-1/SSAO；動態變化

【中圖分類號】R249 【文獻標志碼】B 【文章編號】1005-0019（2018）24-206-01

非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease， NAFLD）包括單純性脂肪肝（Simple fatty liver， SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic fatty hepatitis， NASH）及其相關肝硬化，是遺傳-環境-代謝應激相關性疾病。本研究將通過動物實驗觀察大鼠在非酒精性單純脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纖維化不同階段時VAP-1及其酶活性水平的動態變化，以期為治療疾病、阻斷疾病進展提供新的靶點。

1 實驗動物與分組

SD大鼠，清潔級，雌雄各半，220-250g，60只。適應環境后按體重隨機分為2組，分別為空白對照組30只；模型組30只。

NAFLD模型復制：模型組動物給予復合高脂飼料飲食（高脂飼料配制方法如下：在77%基礎飼料基礎上，加入3%膽固醇、10%豬油和10%蛋黃粉。投食量約為：25g/鼠/天。）。每周稱重1次，持續造模24周。空白對照組動物給予正常飲食、水。

2 檢測指標

于8、16、24周末分別取樣進行相關指標的檢測。第8、16、24周末，動物禁食不禁水12h，以20%烏來糖溶液麻醉（5ml/kg體重）后，腹主動脈取血，4℃，3000rpm/min，10min，取血清保存備用。采用酶聯免疫法檢測大鼠血清中IL-6、TNF-α含量；檢測大鼠血清中TGF-β1（轉化生長因子-β1）含量；檢測大鼠血清中sVAP-1（可溶性血管粘附蛋白-1）含量及血清SSAO酶活性（氨基脲敏感單胺脫氧酶）。

3 統計學方法

所列數據以均數加減標準差（x±s）表示，統計學處理方法采用組間t-檢驗。采用Excel2000軟件進行統計學處理。

4 結果與討論

4.1 兩組大鼠血清中相關炎癥因子的表達

目前“二次打擊”學說在NAFLD發病機制中的重要地位已得到一致認可。第一次打擊是指胰島素抵抗（insulin resistance， IR）導致脂質在肝細胞的蓄積。但IR發生機制尚未完全闡明，近年來炎癥病因學理論備受關注，IR和慢性低度炎癥狀態有關。氧化應激是“二次打擊”學說的第二次打擊，通常認為氧化應激在肝臟炎癥的發生中起重要作用，研究表明，隨著高脂飲食時間的延長，該組大鼠肝組織脂肪變與炎癥程度均逐漸加重。NAFLD包含一系列的表現，包括從脂肪變性到炎癥、纖維化、肝硬化的不同疾病發展階段，這一進展過程確切機制尚不清楚，但對肝損傷持續的炎癥反應是驅動疾病進展為肝纖維化、肝硬化甚至肝細胞癌的關鍵因素。

本實驗結果表明，造模8、16、24周，模型組大鼠與正常對照組比較，其血清中IL-6、TNF-α含量明顯增高（P<0.001）。

4.2 大鼠血清中TGF-β1的表達

TGF-β是屬于一組新近發現的調節細胞生長和分化的TGF-β超家族。近年來發現TGF-β對細胞的生長、分化和免疫功能都有重要的調節作用。一般來說，TGF-β對間充質起源的細胞起刺激作用，而對上皮或神經外胚層來源的細胞起抑制作用。TGF-β可以促進成纖維細胞的生長，加速肝纖維化的發展，加重肝損害。

本實驗結果表明，造模8、16、24周，模型組大鼠與正常對照組比較，其血清中TGF-β1含量明顯增高（P<0.001）。

4.3 大鼠血清中sVAP-1的表達及血清SSAO酶活性

血管粘附蛋白1（Vascular adhesion protein-1，VAP-1）由AOC3基因所編碼，是一個內皮粘附分子，與白細胞從血液遷移進入炎癥組織有關，與其他眾多粘附分子相比，VAP-1的不同之處在于它是一個表達于細胞表面的酶，氨基脲敏感單胺脫氧酶（Semicarbazide-sensitive mono-amine oxidase，SSAO），屬于氨基脲胺氧化酶家族（也稱為伯胺氧化酶），因此VAP-1具有雙重功能。VAP-1屬于SSAO家族，VAP-1的酶活性對其發揮粘附功能具有重要作用，并且通過其生物活性產物調節轉錄因子、趨化因子和其他粘附分子表達從而協同調節炎癥微環境。正常狀況下VAP-1儲存在常駐內皮細胞內顆粒中，在炎癥發生早期，VAP-1迅速轉位到細胞表面，參與白細胞在炎癥部位的募集，同時也在白細胞在內皮的滾動、粘附和遷移環節等入侵級聯調節中發揮重要作用，協助白細胞從血液進入組織。本實驗結果表明，造模8、16、24周，模型組大鼠與正常對照組比較，其血清中sVAP-1含量明顯增高（P<0.001），血清SSAO酶活性明顯增高（P<0.001）。

5 小結

本研究通過采用高脂飲食誘導的方法建立NAFLD大鼠模型，觀察NAFLD模型大鼠在疾病進展的不同階段其炎癥因子水平（血清中IL-6、TNF-α）的變化；纖維化相關細胞因子水平（血清中TGF-β1）的變化；及血清中sVAP-1和血清SSAO酶活性的表達，結果發現，隨著疾病的進展，以上各指標均發生明顯改變。由此可見，持續的炎癥反應是驅動NAFLD進展的關鍵因素，我們推測，在此過程中VAP-1/SSAO起著復雜的作用，它既能促進初始肝損傷時肝臟的白細胞招募，又通過其生物活性協同調節炎癥微環境，從而在炎癥慢性化、以至肝纖維化的進程中起重要作用[1，2]。本研究為NAFLD的治療提供了新的靶點。

參考文獻

[1] 黃婷婷，趙麗娟，姜雙燕，等.快速復制大鼠非酒精性脂肪性肝病模型及主要臟器的病理變化[J].西北國防醫學雜志2018（2）：71-74.

[2] 舒祥兵，張莉，黃杰，等.鐵超載與非酒精性脂肪性肝病的關系及其作用機制的研究進展[J].世界華人消化雜志，2016（22）：81-86.