液相色譜/質譜聯用技術在鹽酸克倫特羅殘留中的應用

李翠萍

【摘 要】鹽酸克倫特羅被作為飼料添加劑非法添加到動物飼料中，造成中毒事件，引起人們廣泛關注，其殘留對人民健康造成嚴重威脅。因此，需要一種高靈敏度的有效檢測方法。液相色譜/質譜聯用技術靈敏度高、操作簡便、耗時少且準確度高，被用于鹽酸克倫特羅殘留的檢測。本文對鹽酸克倫特羅和液相色譜/質譜聯用技術做了簡單概述，淺析了液相色譜/質譜聯用技術在鹽酸克倫特羅殘留中的應用，以期為市場監測中快速檢測鹽酸克倫特羅提供參考。

【關鍵詞】液相色譜/質譜聯用技術；鹽酸克倫特羅；殘留；應用

【中圖分類號】R155.5 【文獻標識碼】A 【文章編號】1005-0019（2018）23--01

1 鹽酸克倫特羅概述

鹽酸克倫特羅又名“瘦肉精”，屬于腎上腺類神經興奮劑，主要藥理作用為：舒張及松弛子宮平滑肌、舒張支氣管等，是一種臨床上常見的平喘藥。鹽酸克倫特羅不是獸藥，不能作為飼料添加劑非法使用。但是由于鹽酸克倫特羅在人體和家畜內吸收比較好，一些不法商販為了經濟利益，在動物飼料中非法添加鹽酸克倫特羅等瘦肉精，來提高動物蛋白質合成率，減少動物的脂肪生成，增加動物瘦肉量，縮短飼養時間，從而降低生產成本，增加利潤。我國已明令禁止在動物飼料中添加瘦肉精，但是非法添加的情況仍然存在，造成“瘦肉精”中毒事件的發生，對人類生命健康造成威脅。因此，找到一種檢測鹽酸克倫特羅殘留量的有效方法具有重大意義。目前用于檢測鹽酸克倫特羅殘留量的方法主要有高效液相色譜法、生物傳感技術、氣相色譜/質譜聯用技術、液相色譜/質譜聯用技術等。其中高效液相色譜法耗時較長，靈敏度較低，假陽性率較高；生物傳感技術檢測范圍有限，靈敏度不高，僅用于尿液、水溶液和血清中鹽酸克倫特羅殘留量的檢測；氣相色譜/質譜聯用技術操作步驟繁多，待測物通常需要進行衍生化處理，操作耗時；而液相色譜/質譜聯用技術耗時少、操作簡單、抗干擾能力強、靈敏度高、確證能力強，被廣泛用于鹽酸克倫特羅殘留量的檢測。

2 液相色譜/質譜聯用技術概述

液相色譜/質譜聯用技術簡稱液質聯用，是液相色譜與質譜串聯的技術。主要由五部分組成：液相色譜儀、接口離子源與質譜的連接裝置、質量分析器、真空系統以及計算機數據處理系統。樣品進入液相色譜儀，經色譜柱實現分離，被分離組分依次從接口進入質譜儀，經離子源被離子化，離子于質量分析器中被聚焦，依據質荷比實現分離，離子信號轉變成電信號，被傳送到計算機數據處理系統，依據質譜峰強度及位置對樣品中成分及其結構進行分析。目前，常用的液相色譜/質譜聯用技術有兩類：一類是從質量分析器的角度來劃分，主要包括離子阱質譜儀、四級桿質譜儀、傅立葉變換質譜儀、飛行時間質譜儀；另一種是從離子源的角度來劃分，主要包括大氣壓化學電離、電噴霧離子、基質輔助激光解吸離子化等。液質聯用技術集液相色譜的高分離效能和質譜的強鑒別能力于一身，可以對樣品準確定性定量。因此，被廣泛應用于許多領域。

3 液相色譜/質譜聯用技術在鹽酸克倫特羅殘留檢測中的應用

王春民等[1]采用超高效液相色譜/串聯質譜法對動物源食品中的克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺以及特布他林四種瘦肉精進行檢測分析。采用葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶對樣品進行酶解，用溶劑乙酸乙酯進行提取，經過固相萃取小柱的凈化處理后，超高效液相色譜/串聯質譜法測定。經過優化實驗條件，實驗結果表明：在1.0μg/L-25.0μg/L的濃度范圍內，四種瘦肉精呈現良好的線性關系，線性相關系數為0.999，檢出限均達到0.5μg/kg。加標水平下，回收率達到84%-105%。說明超高效液相色譜/串聯質譜法可用于鹽酸克倫特羅殘留量檢測。王嬌等[2]利用高效液相色譜/串聯質譜法測定豬肉中鹽酸克倫特羅。結果發現：在1-20 ng/mL的濃度范圍內，鹽酸克倫特羅的色譜峰面積與濃度線性關系良好，相關系數達到0.9995，線性回歸方程為：y=1.114x-0.012，檢出限達到0.33 ng/mL。由此表明：高效液相色譜/串聯質譜法可用于檢測分析豬肉中的鹽酸克倫特羅。

金慧然等[3]利用超高效液相色譜/串聯質譜法對牛尿中克倫特羅等3 種β-興奮劑殘留量進行檢測。經過提取和凈化，有效地去除了樣品中的雜質，經超高效液相色譜/串聯質譜儀測定，結果發現：在0.5-5.0 ng/mL的濃度范圍內，克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇呈現良好的線性關系、回收率以及重現性，充分體現了該方法的高靈敏度、高精密度。表明超高效液相色譜/串聯質譜法可用于檢測牛尿中克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的殘留量。陳蕾等[4]利用液相色譜/串聯質譜法對豬肉中鹽酸克倫特羅進行了快速檢測，并建立了快速提取豬肉中鹽酸克倫特羅的方法，對液相色譜/質譜/質譜聯用儀分析條件進行了優化。用溶劑乙腈提取豬肉中的鹽酸克倫特羅，研究對比了影響提取凈化效果的三個因素：無水硫酸鎂的加入量、填充料的加入量以及填充料類型。結果表明：在0.15μg/L-1.5μg/L的濃度范圍內，鹽酸克倫特羅線性關系良好，平均回收率可達到80%-120%，相對標準偏差為0.47%，檢出限為0.5μg/L。說明液相色譜/串聯質譜法簡單、快速、可靠，可用于快速測定豬肉中的鹽酸克倫特羅殘留量。孟文瑛等[5]采用固相萃取/超高效液相色譜/串聯質譜法對豬肉中的鹽酸克倫特羅殘留量進行測定，用5%的高氯酸對豬肉樣品進行超聲提取，高速離心15 min，用固相萃取柱富集和凈化上清液，去除復雜的干擾基質，選擇性地富集凈化目標樣品。試驗結果表明：在0.25-50μg/kg 的濃度范圍內，鹽酸克倫特羅呈現良好線性關系，線性相關系數為0.9982，1.25、12.5、50μg/kg的添加水平下，平均回收率達到62.2%-72.0%，相對標準偏差為4.2%-6.1%，檢出限達到0.05μg/kg。表明固相萃取/超高效液相色譜/串聯質譜法高效、簡便、準確、快速，可用于鹽酸克倫特羅的選擇性富集及分離檢測。

朱曉艾等[6]采用高效液相色譜法對豬肉中的鹽酸克倫特羅進行了檢測，對高效液相色譜儀的檢測條件和樣品的前處理方法進行優化，建立了相關快速簡便的檢測方法。結果表明：優化后，樣品前處理只需兩個過程：提取和蛋白質沉淀。色譜峰良好，樣品的加標回收率介于88.55%-94.03%之間，精密度小于2%，檢測限達到0.025mg/kg。表明該方法成本低、準確、快速且簡便，適用于快速檢測豬肉中鹽酸克倫特羅殘留。蔣萬楓等[7]采用超高效液相色譜/四極桿/飛行時間質譜法對動物組織中的克倫特羅等7 種β-受體激動劑殘留進行了快速篩查。結果表明：4種加標水平下，7 種β-受體激動劑的加標回收率達到75%-114%，相對標準偏差為4.5%-20.6%。克倫特羅的線性范圍介于0.4-40.0 μg/kg之間，定量下限達到0.4 μg/kg，其余6種β-受體激動劑的線性范圍均介于0.2-40.0μg/kg之間，定量下限達到0.2 μg/kg，相關系數均位于0.9914-0.9999之間。說明超高效液相色譜/四極桿/飛行時間質譜法適合于快速篩查動物組織中7種β-受體激動劑殘留。

4 展望

嚴控鹽酸克倫特羅殘留量，必須要嚴格執法，同時也需要有效的檢測技術作為保障。液相色譜/質譜聯用技術在瘦肉精殘留檢測領域雖然有其優勢，但是也有其弊端，比如價格昂貴，成本高，難以普及。隨著各種新興檢測技術的不斷發展進步，檢測鹽酸克倫特羅的未來發展趨勢是研究開發成本低、高效、快速、能定性且定量的現場檢測方法，最終在市場檢測中使其普及化、常規化。

參考文獻

王春民，張秋萍，吳春霞，馬曉艷，李建. 動物性食品中4 種β-興奮劑的超高效液相色譜-串聯質譜法測定[J]. 中國衛生檢驗雜志， 2016，26（21）：3064-3066

王嬌，高永慧，姚華，史靖宏. 高效液相色譜- 串聯質譜法測定豬肉中的鹽酸克倫特羅[J]. 現代食品，2018，47（13）：133-136

金慧然，韓宏超，郭文欣，李蕊，陶婭，江淼，李春輝. 超高效液相色譜-串聯質譜法測定牛尿中3 種β-興奮劑殘留[J]. 《黑龍江畜牧獸醫》科技版，2014，（5） ： 214-216

陳蕾，石盼盼，魏法山，朱凱，吳麗. 液相色譜-串聯質譜法法快速檢測豬肉中鹽酸克倫特羅[J]. 食品研究與開發，2017，38（22）：163-166

孟文瑛，郭志謀，沈偉健，沈崇鈺，吳斌，劉艷明，等. 一種新型固相萃取柱結合超高效液相色譜串聯質譜法選擇性富集測定豬肉中的鹽酸克倫特羅[J]. 色譜，2012，30（2） ：141-145

朱曉艾，陳雅君，陳雪香，等. 高效液相色譜法檢測豬肉中鹽酸克倫特羅的前處理方法[J].食品與機械，2015，31（2）：106-109

蔣萬楓，趙珊. 超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質譜法快速篩查動物組織中7 種β受體激動劑殘留[J].分析測試學報，2013，32（6）：675-680