白花九里明鎮(zhèn)痛和抗炎效果的實驗研究

申璐，劉桂彪，黃文飛，張銘鋒，楊園園，黃劍秋，郭瑩，閉麗華，王保山，王彩冰

（1.右江民族醫(yī)學(xué)院2014級臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)本科，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院2012級臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)本科，廣西 百色 533000；3.右江民族醫(yī)學(xué)院2013級臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)本科，廣西 百色 533000；4.右江民族醫(yī)學(xué)院2014級中藥學(xué)本科，廣西 百色 533000；5.右江民族醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，廣西 百色 533000）

白花九里明[Blumea megacephala（Randeria）]是廣西壯族民間常用的藥物，據(jù)民族藥物書籍記載和壯族民間藥用，具有治療風(fēng)濕骨痛、跌打腫痛、產(chǎn)后流血、月經(jīng)不調(diào)等癥候[1-2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，白花九里明有護肝、增強小腸運動、抑制心肌收縮力、降血壓、縮短出血時間和凝血時間等作用[3-7]。本實驗采用白花九里明的壯族民間口服用量換算為小鼠用量給小鼠灌胃，采用冰醋酸扭體法觀察其鎮(zhèn)痛效果、采用二甲苯耳廓腫脹法觀察其抗炎效果，并與臨床常用于鎮(zhèn)痛抗炎的阿司匹林（根據(jù)人用量換算成小鼠用量[8]）給小鼠灌胃進行藥效的比較分析，為白花九里明的藥用開發(fā)和利用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物及飼養(yǎng)環(huán)境 健康KM小鼠100只，雌雄各半，體質(zhì)量25～30 g,由右江民族醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供（實驗動物使用許可證號：SYXK桂2011-0010）。小鼠飼養(yǎng)環(huán)境為日光照12 h、室溫18～22 ℃、濕度50%～60%。

1.2 藥材、實驗器材 白花九里明采于廣西百色市郊，曬干備用。0.9%NaCl注射液（貴州天地藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：A15031618）；阿司匹林（云南白藥集團股份有限公司，批號：ZJA1405）；二甲苯（廣州新建精細(xì)化工廠，批號：20060322）；冰醋酸（天津化學(xué)試劑有限公司，批號：GB/T 676-90 XK13-201 0315 002Ⅱ）；打孔器（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站，型號：YLS-Q4）；電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，型號：GB/T23111）。

1.3 白花九里明提取液的制備過程 取白花九里明干草300 g，用30℃溫水3 000ml浸泡4 h，文火煮沸1 h，過濾液隔水文火濃縮至300ml原液（濃度為1 g/ml）放4℃冰箱保存。用時將原液用雙蒸水分別配成300mg/ml、600mg/ml的白花九里明提取液。

1.4 動物分組與給藥 取KM小鼠100只隨機均分為致痛和致炎兩個大組，每大組小鼠又隨機均分成5組，正常對照組和模型對照組（均給予0.9%NaCl注射液）、阿司匹林組（給予0.5mg/ml阿司匹林）、白花九里明低濃度組和高濃度組（分別給予300mg/ml、600mg/ml的白花九里明提取液）灌胃，灌胃量按小鼠體質(zhì)量0.1ml/10 g計算，每天1次，連續(xù)7 d。致痛大組的小鼠在末次灌胃30min后，正常對照組（給予0.9%NaCl注射液）、其余4組（給予0.6%冰醋酸溶液[9]）腹腔注射，注射量按小鼠體質(zhì)量0.1ml/10 g計算。致炎大組的小鼠在末次灌胃30min后，正常對照組給予0.9%NaCl注射液、其余4組給予二甲苯純?nèi)芤?20μl/只[10])，均勻?qū)⒁后w涂抹在小鼠右耳兩面。

1.5 觀察指標(biāo)檢測 致痛大組的小鼠在腹腔注射之后，記錄15min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)（以腹部內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬起為標(biāo)準(zhǔn)），并計算扭體抑制率。致炎大組的小鼠在耳廓用藥之后30min，用9mm打孔器沿耳廓基線切下左、右耳廓相應(yīng)的對稱部位并稱重，計算耳廓腫脹度及腫脹抑制率。

扭體抑制率=（模型對照組平均扭體數(shù)－給藥組平均扭體數(shù)）/模型對照組平均扭體數(shù)×100%。

耳廓腫脹度=（右耳重量－左耳重量）/左耳重量。

腫脹抑制率=（模型對照組平均腫脹度－用藥組平均腫脹度）/模型對照組平均腫脹度×100%。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料采用方差分析和兩兩比較q檢驗，采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。檢驗水準(zhǔn)：α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 致痛大組的小鼠扭體次數(shù)和扭體抑制率結(jié)果 模型對照組、白花九里明低濃度組和高濃度組的小鼠扭體次數(shù)明顯高于正常對照組（P＜0.01）；阿司匹林組的扭體次數(shù)明顯低于模型對照組、白花九里明低濃度組和高濃度組（P＜0.01），與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；白花九里明低濃度組的扭體次數(shù)與模型對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；白花九里明高濃度組的扭體次數(shù)明顯低于模型對照組和白花九里明低濃度組（P＜0.01）。阿司匹林組的扭體抑制率明顯高于白花九里明低濃度組和高濃度組（P＜0.01），白花九里明高濃度組的扭體抑制率明顯高于白花九里明低濃度組（P＜0.01），見表1。

2.2 致炎大組的小鼠耳廓腫脹度和腫脹抑制率結(jié)果 模型對照組、白花九里明低濃度組和高濃度組的耳廓腫脹度明顯高于正常對照組（P＜0.01，0.05）；阿司匹林組的耳廓腫脹度明顯低于模型對照組和白花九里明低濃度組（P＜0.01，0.05），與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；白花九里明低濃度組的耳廓腫脹度與模型對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；白花九里明高濃度組的耳廓腫脹度明顯低于模型對照組（P＜0.01），而與阿司匹林組和白花九里明低濃度組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。阿司匹林組和白花九里明高濃度組的耳廓腫脹抑制率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，均明顯高于白花九里明低濃度組（P＜0.01），見表2。

表1 白花九里明提取液對醋酸扭體法致小鼠疼痛的影響（±s，n=10）Table 1 Blumeamegacephalaextractonw rithing theeffectof glacial acetic acid pain in rats(±s,n=10)

表1 白花九里明提取液對醋酸扭體法致小鼠疼痛的影響（±s，n=10）Table 1 Blumeamegacephalaextractonw rithing theeffectof glacial acetic acid pain in rats(±s,n=10)

注：與正常對照組比較：a P＜0.05，b P＜0.01；與模型對照組比較：c P＜0.05，d P＜0.01；與阿司匹林組比較：e P＜0.05，f P＜0.01；與白花里明低濃度組比較：g P＜0.05，h P＜0.01

扭體抑制率（%）組別正常對照組模型對照組阿司匹林組白花九里明低濃度組白花九里明高濃度組扭體數(shù)（次）0 47.75±16.61b 3.42±4.01d 39.00±10.13bf 25.30±14.65bdfh……92.84 18.32f 47.02fh

表2 白花九里明提取液對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n=10）Table 2 Blumeamegacephalaextracton auricle swelling theeffectof xylene in rats(±s，n=10)

表2 白花九里明提取液對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n=10）Table 2 Blumeamegacephalaextracton auricle swelling theeffectof xylene in rats(±s，n=10)

注：與正常對照組比較，a P＜0.05，b P＜0.01；與模型對照組比較，c P＜0.05，d P＜0.01；與阿司匹林組比較，e P＜0.05，f P＜0.01；與白花里明低濃度組比較，g P＜0.05，h P＜0.01

腫脹抑制率(%)……66.67 25.76f 51.52h組別正常對照組模型對照組阿司匹林組白花九里明低濃度組白花九里明高濃度組耳廓腫脹度0.04±0.06 0.66±0.33b 0.22±0.18d 0.49±0.25be 0.32±0.24ad

3 討論

在動物試驗方法中[9-12]，致痛模型常有熱刺激法、電刺激法、機械刺激和化學(xué)刺激等方法制備，冰醋酸扭體法是研究藥物鎮(zhèn)痛作用較為常用的方法，用其在動物實驗上篩選出的藥物，在臨床上具有較好的鎮(zhèn)痛療效；二甲苯為致炎物質(zhì)，在小鼠耳廓涂抹后會引起局部急性滲出性炎癥水腫，能制備可靠的炎癥模型；因此，本研究采用冰醋酸扭體制備致痛模型和采用二甲苯耳廓腫脹法制備致炎模型。從本研究結(jié)果體現(xiàn)出，模型對照組、白花九里明低濃度組和高濃度組的扭體次數(shù)和耳廓腫脹度均明顯高于正常對照組（P＜0.01），表示冰醋酸扭體致痛造模和二甲苯耳廓腫脹致炎造模均成功。

本研究結(jié)果表明：阿司匹林組的扭體次數(shù)和耳廓腫脹度與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而明顯低于模型對照組，提示阿司匹林具有明顯的鎮(zhèn)痛和抗炎效果；白花九里明低濃度組的扭體次數(shù)和耳廓腫脹度與模型對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而明顯高于阿司匹林組和正常對照組，提示低濃度的白花九里明不能抵抗冰醋酸和二甲苯所致的疼痛和炎癥；白花九里明高濃度組的扭體次數(shù)和耳廓腫脹度明顯低于模型對照組而高于正常對照組，提示高濃度的白花九里明具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用；白花九里明高濃度組的扭體抑制率和耳廓腫脹抑制率明顯高于白花九里明低濃度組，扭體抑制率明顯低于阿司匹林組，耳廓腫脹抑制率與阿司匹林組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示高濃度的白花九里明水提液鎮(zhèn)痛效果次于阿司匹林，而抗炎效果與阿司匹相當(dāng)，白花九里明用于止痛的用量要比抗炎用量要大?？梢?，白花九里明含有鎮(zhèn)痛和抗炎成分，這些成分有待于進一步的研究確認(rèn)。

[1] 廣西衛(wèi)生廳.廣西本草選編(上冊)[M].南寧:廣西人民出版社,1974:924-925.

[2] 賈敏如,李星煒.中國民族藥志要[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:99.

[3] 劉桂彪,張銘鋒,申璐,等.白花九里明對急性肝損傷小鼠的保護作用及機制[J].山東醫(yī)藥,2016,56(41):14-17.

[4] 劉桂彪,鐘興隆,范琰華,等.壯藥白花九里明提取液對小鼠胃腸運動和血清NO濃度的影響[J].世界華人消化雜志,2015,23(15):2415-2419.

[5] 王杉,青桂玲,潘海濤,等.白花九里明提取液對蟾蜍離體灌流蛙心收縮力和心率的影響[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2012,10(4):3-4.

[6] 王彩冰,趙善民,何顯教,等.白花九里明提取液對小鼠血壓、心率和血清一氧化氮、內(nèi)皮素-1濃度的影響[J].廣東醫(yī)學(xué),2015,36(6):825-827.

[7] 王杉,青桂玲,韋穎,等.白花九里明提取液對小鼠出血時間、凝血時間和血小板數(shù)量的影響[J].廣東醫(yī)學(xué),2012,33(9):1228-1230.

[8] 黃峻,黃祖瑚.臨床藥物手冊[M].5版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2015:529-530.

[9] 陳一村,秦永潔,蔡聰藝,等.大黃總蒽醌對小鼠扭體模型的鎮(zhèn)痛作用[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展,2010,10(3):558-559.

[10]谷捷,李鑫,余黃合,等.二甲苯致小鼠耳腫脹急性炎癥模型的建立[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2016,36(5):32-35.

[11]AG Hayes,MJ Sheehan,MB Tyers.Di f ferential sensitivity of models of antinociception in the rat,mouse and guinea-pig toμ-andκ-opioid receptor agonists[J].Br J Pharmac,1987,91(4):823-832.

[12]楊巧芳,孟慶剛.炎癥動物模型探要[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2008,26(3):516-517.