UPLC用于喘可治注射液中淫羊藿苷穩定性的考察

陳換飛 鄒靜 白蘭 彭婷 張梅（通訊作者）

（1成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地 四川 成都 611137）

（2 四川省醫學科學院·四川省人民醫院 四川 成都 610072）

喘可治注射液的主要成分為4種黃酮類化合物：朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷，因注射劑對主成分含量穩定性要求嚴格，且2015版藥典針對淫羊藿飲片主要測定淫羊藿苷含量情況，故本文就喘可治注射液中指標成分淫羊藿苷進行UPLC分析測定，以實現喘可治注射液更準確有效的質量控制。

1.儀器與試藥

Ultimate 3000 U HPLC系統，PDA檢測器，Thermo Fisher公司；分析天平(上海市天平儀器廠)；離心機(LC-4016)；真空干燥箱(江蘇南京海汪制藥機械裝備有限公司)；藥品穩定性試驗箱(LHH-150SD)；

淫羊藿苷對照品（中國食品藥品檢定研究院）；喘可治注射液（國藥四川醫藥集團有限公司）；實驗用水為實驗室自制重蒸水；色譜乙腈；分析純甲酸。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH‐C18 色譜柱（2.1 mm×150 mm,1.7μm）；流動相：乙腈（A）-水/0.1%甲酸（B）；梯度洗脫∶0～10min（15%A），10～30min（15%～25% A），30～45min（25%～35% A），45～60min（35%～50% A）；柱溫35℃；流速0.3mL/min；檢測波長270nm；進樣量5μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥的淫羊藿苷對照品2.5mg于10mL容量瓶中，乙腈-0.1%甲酸水溶液（35：65）溶解并定容至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取喘可治注射液1ml，乙腈-0.1%甲酸水溶液(35：65)稀釋至10ml，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 標準曲線 以乙腈-0.1%甲酸水溶液(35：65)為溶劑，取對照品適量，配制含淫羊藿苷10、40、80、120、180、250μg/ml對照品溶液。依“2.1”項下色譜條件進樣，以被測物濃度為橫坐標x，被測物峰面積為縱坐標y繪制標準曲線，回歸方程Y=3.53×107X+52087，r=0.9998。結果表明，淫羊藿苷在0.01～0.25mg/mL濃度范圍內線性關系良好。見圖1。

圖1 淫羊藿苷標準曲線

2.4.2 精密度考察 取“2.4.1”項下0.05mg/mL對照品溶液，連續進樣5次，以峰面積計算精密度，RSD為0.08%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 準確度考察 取同一0.05mg/mL對照品溶液，揮干溶劑后加入等量0.05 mg/mL淫羊藿苷對照品溶液，溶解，0.45μm微孔濾膜過濾，進樣測定峰面積，計算回收率。見表。

表加樣回收率實驗測定結果（n=6）

2.4.4 重復性考察 取同一0.05mg/mL標準品溶液，連續進樣5次，測定含量，得RSD小于1.1%，表明重復性良好。

2.4.5 穩定性考察取 同一0.05mg/mL標準品溶液，分別在0、2、4、6、8、12小時進樣測定淫羊藿苷含量，得RSD為1.3%，表明該成分在12小時內穩定。

2.5 淫羊藿苷含量測定

取藥品穩定性試驗箱中50℃、75%相對濕度條件下儲存7日的5個批次喘可治注射液，依“2.3”項下方法制備供試品溶液，測定淫羊藿苷含量。

2.6 實驗結果

5批次高溫高濕儲存的喘可治注射液中淫羊藿苷含量分別為99.8%、100.2%、99.3%、99.0%、99.2%，平均含量為99.5%，RSD為0.49%。說明該注射液中淫羊藿苷成分在相對較高的溫度和濕度下儲存，穩定性良好。

3.討論

本文建立了UPLC測定喘可治注射液中有效成分淫羊藿苷的方法，以乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）為流動相，流速0.3mL/min，梯度洗脫。柱溫35℃，檢測波長270nm，進樣量5μL。試驗表明該分析方法精準確度和重復性好，可有效檢測淫羊藿苷的含量變化。同時考察該注射液在50℃、相對濕度75%條件下儲存7日淫羊藿苷的含量變化，結果表明注射液中淫羊藿苷含量高于標示量的99.5%，說明其耐熱耐濕性良好。

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[3]陳瀅宇.喘可治對艾滋病猴免疫調節作用及Th17分化的機制研究[D].廣州中醫藥大學,2014.

[4]CFDA標準頒布件[S].標準號：WS3-839-(Z-164)-2004(Z)-2012.