乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的應(yīng)用效果

郭躍文 張勇軍 丁超(通訊作者)

（哈密市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 新疆 哈密 839001）

乙肝是臨床對乙肝病毒性肝炎的簡稱，其主要是由乙肝病毒（HBV）導(dǎo)致的，患者主要臨床表現(xiàn)為惡心嘔吐、厭油、乏力、肝功能異常、肝大等，少數(shù)病例還同時(shí)會出現(xiàn)黃疸、發(fā)熱癥狀。其病程呈現(xiàn)遷延慢性發(fā)展的特點(diǎn)，病情嚴(yán)重者會逐漸發(fā)展成重型肝炎、肝硬化甚至肝癌。乙型肝炎是一種全球流行性病毒感染性疾病類型，在國內(nèi)部分地區(qū)具有較高的發(fā)病率。隨著病情的持續(xù)發(fā)展和惡化，患者的生命安全也會受到嚴(yán)重威脅[1]。目前臨床方面尚未尋找到治療乙肝的特效藥物或方法，這在一定程度上增加了患者的精神壓力和患者家庭、社會負(fù)擔(dān)。如何在發(fā)病初期對乙型肝炎患者做出準(zhǔn)確診斷，以便盡快采取針對性治療和處理是臨床診斷工作的重點(diǎn)所在[2]。免疫學(xué)和乙型肝炎血清標(biāo)志物檢驗(yàn)是臨床檢測診斷乙型肝炎的常用方法，為評定ECLIA、ELISA兩種檢測方式的診斷價(jià)值，本文選取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作為研究對象，現(xiàn)評析報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作為研究對象，入選患者均符合《病毒性肝炎防治方案》（中華醫(yī)學(xué)會傳染病、肝病學(xué)會、寄生蟲病學(xué)分會）中乙型肝炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。其中男患者83例，女患者37例，患者最小年齡24歲，最大年齡50歲，平均年齡（46.8±5.8）歲，

1.2 方法

要求所有患者均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下接受檢驗(yàn)，抽取10mL肘部靜脈血，進(jìn)行10min左右的3000r離心處理，將血清分離出來待檢。將血清樣本均分成2分，采用ELISA、ECLIA先后進(jìn)行檢驗(yàn)，每次檢驗(yàn)時(shí)都將定值參考比作為質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)，涉及到的相關(guān)操作均按照試劑盒上的要求進(jìn)行。

1.2.1 ELISA檢驗(yàn)方法的具體操作和標(biāo)準(zhǔn) 選擇雙抗原夾心法測定血清樣本，采用去離子水稀釋的方式促使50mL的濃縮洗滌液至1000mL，并將其放置在專門的洗液瓶中，調(diào)整酶標(biāo)試劑達(dá)到試劑預(yù)頂位置，并對吸光度值等進(jìn)行讀取，臨界值為陰性對照平均吸光度（A）值為依據(jù)，其中陽性：S/OD（標(biāo)本OD值和臨界OD值的比值）在1.00以上；陰性：S/OD在1.00以下。

1.2.2 ECLIA檢驗(yàn)方法的具體操作和標(biāo)準(zhǔn) 選擇雙抗體夾心法測定血清樣本，在預(yù)定位置將洗液、吸頭、配套反應(yīng)杯等放置好，使用濃度為75%的酒精棉球?qū)υ噭┻M(jìn)行擦洗，需共同培育的不僅僅是待測樣本，還有經(jīng)過生物素標(biāo)記的HBsAb和乙肝表面抗原（HBsAg），然后再與親和素標(biāo)記的磁微粒共同進(jìn)行孵育，通過反復(fù)洗滌的方式，分離出游離的抗原、抗體以及復(fù)合物等，將三丙胺加入，并將ECL反應(yīng)啟動，依據(jù)其激光強(qiáng)度對乙肝表面抗原（HBsAg）濃度進(jìn)行判定，其中陽性：乙肝表面抗原（HBsAg）在10mIU/mL以上；陰性：乙肝表面抗原（HBsAg）在10mIU/mL以下。

1.2.3 重復(fù)性檢驗(yàn) 選擇20份低、中、高濃度的乙肝表面抗原（HBsAg）陽性血清進(jìn)行冷凍保存處理，每天進(jìn)行1次測量，選擇其中10份對批間重復(fù)性進(jìn)行計(jì)算，另外10份則對批內(nèi)重復(fù)性進(jìn)行計(jì)算。

1.3 觀察指標(biāo)

將乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗體（HBeAb）作為檢測內(nèi)容。其中的參考上限值為0.15ng/mL，乙肝表面抗體（HBsAb）參考上限值為10mIU/mL，乙肝e抗原（HBeAg）的參考上限值為0.25NCU/mL，乙肝e抗體（HBeAb）參考上限值在3.0NCU/mL以上，乙肝核心抗體（HBcAb）參考值在2.0NCU/mL以上。測定值在參考值上限以上則可確定為陽性[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

選擇SPSS22.0版本的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對得到的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，檢測結(jié)果中的計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）加以描述，對比行χ2檢驗(yàn)，如果P＜0.05，則代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 對兩種方法的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較

在乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）檢測結(jié)果比較上，ECLIA、ELISA兩種檢測方法差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但在乙肝e抗體（HBeAb）檢驗(yàn)結(jié)果比較上，ELISA與ECLIA之間差異顯著，具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，詳細(xì)數(shù)據(jù)見下表所示。

2.2 對兩種檢測方法的重復(fù)性進(jìn)行比較

比較ECLIA、ELISA兩種檢測方法的重復(fù)性，除高濃度乙肝表面抗原（HBsAg）含量差異不明顯外(P＞0.05)，ECLIA檢測到低濃度、中濃度乙肝表面抗原（HBsAg）含量的重復(fù)性與ELISA具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。

表2 對兩種檢測方法的重復(fù)性進(jìn)行比較

3.討論

乙型肝炎病毒是一種在全世界各個(gè)地區(qū)均廣泛存在的一種傳染性的多發(fā)病，我國屬于該病的高發(fā)國之一，其中攜帶乙肝表面抗原（HBsAg）患者的百分比在7%～11%范圍內(nèi)。乙肝表面抗原（HBsAg）主要指的是人體發(fā)生乙型病毒性肝炎感染后，針對HBV特點(diǎn)，機(jī)體免疫系統(tǒng)自發(fā)形成的一種特異性抗體[5]。截止到目前為止，臨床方面和相關(guān)研究學(xué)者尚未尋找到特效治療藥物或方法，故早發(fā)現(xiàn)乙肝表面抗原（HBsAg）異常并盡早作出明確診斷具有至關(guān)重要的作用。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)可準(zhǔn)確反映出乙型肝炎病毒血清學(xué)指標(biāo)，其顯著性特點(diǎn)為操作簡單方便，準(zhǔn)確率高，但其不存在定量分析的能力，無法動態(tài)觀察到患者病情變化和臨床療效進(jìn)展，對乙型肝炎病毒感染復(fù)制情況不能進(jìn)行準(zhǔn)確判斷[6]。ECLIA屬于生物素-親和素技術(shù)之一，通過電化學(xué)在電極表面形成特異性化學(xué)發(fā)放反應(yīng)，其是當(dāng)前最為科學(xué)先進(jìn)的一種化學(xué)發(fā)光免疫測定系統(tǒng)。ECLIA技術(shù)使用的載體是一種順磁性微粒，其是由電磁鐵控制的，其可使檢測的標(biāo)準(zhǔn)化和自動化轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實(shí)，從而有效減少人工操作過程中導(dǎo)致的各種誤差，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的定量、定性分析，使批內(nèi)、批間誤差大幅度減少。與此同時(shí)，還可在一定程度上降低因游離抗體導(dǎo)致的假陰性結(jié)果，使ECLIA檢測的特異性明顯提高[7]。本組研究對照性研究分析了ECLIA、ELISA檢驗(yàn)方法，結(jié)果顯示，兩種方式在乙肝核心抗體（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）標(biāo)志物檢測結(jié)果上無差異(P＞0.05)，在乙肝e抗原（HBeAg）標(biāo)志物檢測結(jié)果上，差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。究其原因：ELISA是基層醫(yī)院檢測乙肝的常用方法，其已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床中，雖價(jià)格低廉且檢驗(yàn)迅速，但檢測乙肝病毒血清標(biāo)志物時(shí)，定性分析價(jià)值尚可，但定量分析還存在一定的不足之處，特別是當(dāng)血清樣本濃度過高的情況下，假陰性現(xiàn)象十分常見，再加上實(shí)際的檢測過程中，抗體和抗體試劑生產(chǎn)差異性導(dǎo)致的誤差，會對檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。而ECLIA主要通過電磁鐵對順磁性微粒進(jìn)行控制，完全實(shí)現(xiàn)了自動化操作檢驗(yàn)，可避免人為操作引起的各種失誤。與此同時(shí)，電磁鐵產(chǎn)生的電磁擁有的快速消失性可對抗體和復(fù)合抗體分離進(jìn)行有效游離抵抗，可大大減少游離抗體形成的陽性影響，提高陰性檢出率[8]。本組研究還發(fā)現(xiàn)，在批內(nèi)、批間重復(fù)性檢測中，ECLIA與ELISA檢出率的差異在低濃度上進(jìn)行比較，差異顯著(P＜0.05)，但高濃度上比較，差異則不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，這充分證明，ELISA對高濃度乙肝表面抗原（HBsAg）的檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確，對低濃度乙肝表面抗原（HBsAg）的檢測結(jié)果則不理想，但ECLIA因?yàn)闄z測方法比較廣泛，故檢測結(jié)果顯示其檢出率的差異以低濃度最為明顯，高濃度不明顯(P＞0.05)，這充分說明ELISA在高濃度乙肝表面抗原（HBsAg）中更為適用，ECLIA的檢測范圍更加廣泛，對低濃度乙肝表面抗原（HBsAg）加大檢測力度，可對傳染源進(jìn)行更加科學(xué)有效的控制[9]。

綜合上述分析，ECLIA在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中具有較高的診斷價(jià)值，其對乙肝表面抗原（HBsAg）的陽性檢出率高于ELISA，值得臨床優(yōu)先選擇和使用推廣。

[1]程育春.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2016，11(15):53-54，55.

[2]李平.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析[J].東方食療與保健，2016，09(5):9-9.

[3]黃懌箐.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2017，21(23):3102-3103.

[4]張怡莎.乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)采用化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法的效果對比[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2014，56(32):32-33.

[5]寧進(jìn).化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果[J].中國保健營養(yǎng)，2017，27(19):317.

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[7]王澤民.時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)在乙肝病毒血清學(xué)檢測中的研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，38(6):455-458.

[8]陳海雁，張桂花，羅錦彬，等.熒光定量PCR法檢測乙肝病毒DNA和乙肝病毒標(biāo)志物檢測的臨床價(jià)值分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，07(16):2216-2217.

[9]段海萍，王俠.化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗體定性檢測中的應(yīng)用分析[J].國際病毒學(xué)雜志，2016，23(1):57-59，63.