卵巢癌患者外周血免疫指標(biāo)及炎性因子的檢測(cè)及臨床意義

崔彭華 李志艷 張玉娟 劉 莉

承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(067000)

由腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞因子及免疫細(xì)胞等組成一個(gè)腫瘤病理微環(huán)境，多種細(xì)胞因子和免疫炎癥反應(yīng)等作用在腫瘤細(xì)胞上，對(duì)細(xì)胞的增殖、分化等產(chǎn)生重要作用[1]。卵巢癌是發(fā)病率較高的婦科惡性免疫原性腫瘤[2-4]，大量報(bào)道發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫狀態(tài)與腫瘤發(fā)展密切相關(guān)[5-6]，因此研究卵巢癌患者腫瘤微環(huán)境中的免疫和炎性反應(yīng)是了解卵巢癌發(fā)展的關(guān)鍵所在。有研究發(fā)現(xiàn)多種惡性腫瘤會(huì)導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞亞群失衡[7-8]。Th1、Th2亞群及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)均屬于CD4+T淋巴細(xì)胞，Th1可分泌IL-2、INF-γ等細(xì)胞因子，Th2可分泌L-6、IL-10等細(xì)胞因子，即通過與細(xì)胞因子相互影響、制約來維持CD4+T細(xì)胞亞群動(dòng)態(tài)平衡[9-11]。有研究證實(shí)許多Tregs細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)在惡性腫瘤的微環(huán)境中可抑制或殺傷CD4+T細(xì)胞，進(jìn)而對(duì)患者病情產(chǎn)生嚴(yán)重影響[12]。本研究對(duì)卵巢癌患者外周血免疫指標(biāo)及炎性因子水平進(jìn)行了探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院婦科收治并確診為卵巢癌的患者43例(惡性組)，另選卵巢良性腫瘤患者55例(良性組)和健康婦女50例(對(duì)照組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)過MRI或CT診斷為卵巢癌或卵巢良性腫瘤；診斷前未做過化療或其他手術(shù)治療；患者及家屬均知情并簽知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料不齊全者；患有其它腫瘤；心、腎、肝、肺等器官受損嚴(yán)重者；精神心理診斷不正常者。惡性組參照國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)卵巢癌分期，Ⅰ期～Ⅱ期28例，Ⅲ期～Ⅳ期15例；年齡(45.9±21.7)歲(26～70歲)。良性組年齡(46.3±23.2)歲(25～69歲)，對(duì)照組年齡(47.9±23.6)歲(26～71歲)。

1.2 樣本收集及檢測(cè)

參照文獻(xiàn)[1]方法，在未手術(shù)、放化療前，收集3組對(duì)象的空腹靜脈血3 ml，置于肝素鈉抗凝管中，采用三色法測(cè)定Th1、Th2及Treg；取全血離心取血清，采用Human Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit(上海研卉生物科技有限公司)測(cè)定IL-2、IL-6、IL-10及INF-γ，實(shí)驗(yàn)步驟參照試劑盒說明書。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組外周血細(xì)胞亞群比較

各組外周血Th1、Th2、Th1/Th2及Treg 水平存在差異(P<0.05)，隨著患者腫塊惡化，Th1及Th1/Th2水平呈降低趨勢(shì)，而Th2及Treg水平呈上升趨勢(shì)；對(duì)照組與良性組水平未見差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組外周血細(xì)胞亞群檢測(cè)比較(%,±s)

a與對(duì)照組相比b與良性組相比P<0.05

2.2 各組外周血細(xì)胞因子表達(dá)比較

各組外周血細(xì)胞因子的表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，隨著患者腫塊惡化，IL-2及INF-γ表達(dá)水平呈降低趨勢(shì)，而IL-6及IL-10表達(dá)水平呈上升趨勢(shì)。對(duì)照組與良性組未見差異(P>0.05)。見表2。

2.3 卵巢癌組不同臨床分期外周血細(xì)胞亞群水平

惡性組卵巢癌不同臨床分期者Th1、Th2、Th1/Th2及Treg 水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，Ⅲ期-Ⅳ期Th1及Th1/Th2的表達(dá)水平較Ⅰ期-Ⅱ期降低，而Th2及Treg表達(dá)水平較Ⅰ期-Ⅱ期增加(P<0.05)。見表3。

2.4 卵巢癌不同臨床分期外周血細(xì)胞因子表達(dá)

惡性組不同卵巢癌臨床分期IL-2、IL-6、IL-10及INF-γ的表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。其中Ⅲ期-Ⅳ期IL-2及INF-γ的表達(dá)水平較Ⅰ期-Ⅱ期 降低，而IL-6及IL-10表達(dá)水平較Ⅰ期-Ⅱ期增加(P<0.05)。見表4。

表2 各組外周血細(xì)胞因子的表達(dá)水平比較±s)

a與對(duì)照組相比b與良性組相比P<0.05

表3 惡性組不同臨床分期外周血細(xì)胞亞群水平比較±s,%)

a與Ⅰ期-Ⅱ期相比P<0.05

表4 惡性組不同臨床分期外周血細(xì)胞因子的表達(dá)比較±s)

a與Ⅰ期-Ⅱ期相比P<0.05

3 討論

現(xiàn)階段研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌、鼻咽癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與腫瘤微環(huán)境中的免疫炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[14-15]。而免疫炎癥反應(yīng)的主要作用機(jī)制：多種細(xì)胞因子刺激Th0細(xì)胞，使其分化成幾種不同的CD4+T細(xì)胞亞群，包括Th1、Th2及Treg等。各CD4+T亞群分泌細(xì)胞炎癥因子來發(fā)揮各自的功能作用，并且相互制約相互影響。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、INF-γ等細(xì)胞因子，使細(xì)胞毒性T細(xì)胞及巨噬細(xì)胞活化，使B細(xì)胞功能受到抑制。Th2細(xì)胞通過分泌IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，使B細(xì)胞活化與產(chǎn)生抗體，誘發(fā)體液免疫反應(yīng)[16-17]。在不同的實(shí)體或血液系統(tǒng)惡性腫瘤中Treg細(xì)胞數(shù)量呈顯著增加趨勢(shì)，通過分泌IL-10、TGF-β來反向調(diào)控免疫反應(yīng)進(jìn)而維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。IL-10、TGF-β可誘導(dǎo)小鼠肝癌免疫耐受，加快肝癌細(xì)胞的增殖[18]。Treg細(xì)胞通過激發(fā)腫瘤血管形成、減少CD8+T細(xì)胞，而促進(jìn)肝癌患者的發(fā)病進(jìn)展[19]。在卵巢癌患者的外周血中Treg細(xì)胞比例升高，并與卵巢癌分期、生存時(shí)間緊密相關(guān)[13,20]。

本文對(duì)患者體內(nèi)免疫反應(yīng)分析顯示，良性組與對(duì)照組Th1、Th2、Th1/Th2、Treg、IL-2、INF-γ、IL-6及IL-10變化并不顯著，說明Th細(xì)胞及其細(xì)胞因子并不適用于卵巢良性腫瘤的檢測(cè)。惡性組Th1及Th1/Th2的表達(dá)水平較對(duì)照組及良性組顯著降低，而Th2及Treg表達(dá)水平較對(duì)照組及良性組顯著增加，說明卵巢惡性腫瘤患者Th1細(xì)胞亞群處于參與反應(yīng)劣勢(shì)狀態(tài)，Th2及Treg細(xì)胞亞群處于參與反應(yīng)優(yōu)勢(shì)狀態(tài)，且Th1/Th2平衡狀態(tài)被打破向Th2漂移。隨著卵巢癌分期的增加，Th1及Th1/Th2表達(dá)水平進(jìn)一步降低，Th2及Treg表達(dá)水平進(jìn)一步增加，提示Th2及Treg可能參與了患者機(jī)體免疫抑制作用，加快了卵巢癌發(fā)病進(jìn)程，這與國(guó)內(nèi)外報(bào)道結(jié)果較為一致[21-22]。產(chǎn)生以上結(jié)果的原因可能是腫瘤患者病情惡化越嚴(yán)重，其機(jī)體免疫抑制作用越明顯，而免疫抑制作用與CD4+T細(xì)胞亞群表達(dá)水平密切相關(guān)，且多數(shù)腫瘤也出現(xiàn)Th2漂移。該漂移會(huì)出現(xiàn)在外周血、腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞本身[23]。

通過對(duì)患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)的分析顯示，惡性組較對(duì)照組及良性組IL-2及INF-γ的表達(dá)水平降低， IL-6及IL-10表達(dá)水平增加，隨著卵巢癌分期的增加這種變化更加顯著。這可能是因?yàn)門h1分泌IL-2、INF-γ，由于Th1增殖分化受到抑制導(dǎo)致其分泌的炎性因子水平降低。IL-6及IL-10由Th2或Treg及分泌， IL-6及IL-10表達(dá)水平也隨著病情惡化而升高。進(jìn)一步提示腫瘤患者免疫反應(yīng)與炎癥反應(yīng)是相互影響相互制約的，同時(shí)也說明隨著腫瘤患者病情惡化炎癥反應(yīng)也越加強(qiáng)烈。

綜上所述，卵巢癌外周血中免疫功能較為紊亂，免疫細(xì)胞釋放的炎癥因子較為異常，這些檢測(cè)指標(biāo)對(duì)卵巢癌患者病情診斷具有重要的臨床意義。