Vav1蛋白在胃癌中的表達及其臨床意義*

張明明，賈曉梅，高偉

（河北省人民醫院 1.檢驗科，2.門診辦公室，河北 石家莊 050051）

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，易于復發，預后較差[1-2]。研究表明，Vav1蛋白與惡性腫瘤關系密切，具有促進腫瘤生長、侵襲及遠處轉移的作用[3-4]。但Vav1蛋白在胃癌組織及外周血中表達及意義的報道少見。本研究選取胃癌患者、胃癌復發患者及健康體檢者，檢測腫瘤組織及外周血中Vav1水平，分析兩者的相關性，探討其臨床意義，為胃癌和復發患者的病情分析、復發預測提供依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2014年10月-2015年12月在河北省人民醫院行胃癌根治術的患者200例作為手術組。其中，男性114例，女性86例；年齡29～72歲，平均（58.7±12.3）歲，均由術前活檢和術后病理確診。手術組患者中，淋巴結轉移陰性38例，淋巴結轉移陽性162例。同期就診的術后復發患者62例作為復發組。復發組患者經病理證實，胃鏡結合CT檢查確診為復發。選取年齡、性別相匹配的健康體檢者100例作為對照組。所有患者自愿簽署知情同意書，并經本院醫學倫理委員會批準。

1.2 主要試劑及儀器

人Vav1癌基因酶聯免疫吸附測定法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）定量分析試劑盒（美國RD公司，批號：015828），Vav1一抗（美國Sigma公司），酶免之星全自動酶標儀（瑞士Hamilton公司），免疫組織化學法試劑盒（武漢博士德生物公司）。

1.3 標本采集

所有患者晨起空腹抽取靜脈血5 ml，室溫靜置30 min后，3 000 r/min離心15 min，分離血清。手術組患者在術前1 d、術后2周各采血1次。復發組和對照組均采血1次。腫瘤組織石蠟標本來源于術中切除標本，腫瘤離體后置于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋。連續切片后行蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色、免疫組織化學SP法檢測；于本院病理科取正常胃黏膜石蠟標本30例作為組織檢測的對照，其標本來自胃鏡活檢組織，無癌及不典型增生組織。

1.4 ELISA

采用雙抗夾心法，嚴格依據試劑盒說明書進行操作，檢測血清Vav1的表達水平。板內變異系數＜5%，板間變異系數＜7%，在450 nm處測量Vav1的表達。

1.5 免疫組織化學法

嚴格按免疫組織化學法試劑盒說明書進行操作，逐步進行顯色、復染及封片，染色后進行結果判斷。染色結果由2位病理醫師進行閱片。在400倍視野下，每張切片隨機取5個視野，每個視野隨機計數100個腫瘤細胞，參考文獻[5]采用二次計分法計算目的蛋白的相對表達量。細胞膜或細胞漿內出現黃或棕黃色顆粒為染色陽性。細胞表達陽性的計分標準：陽性細胞＜10%為0分，10%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度的計分標準：無色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，黃褐色為3分。兩者相乘≤2分為陰性，＞2分為陽性。

1.6 統計學方法

數據分析采用SPSS 16.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，用單因素方差分析或t檢驗，兩兩比較用LSD-t檢驗；計數資料以率（%）表示，用χ2檢驗，兩兩比較用校正檢驗水準法（檢驗水準α=0.0125）；相關分析用Spearman法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組患者外周血中Vav1水平比較

手術組患者手術前后外周血Vav1水平分別為（196.57±16.82）和（10.21±1.17）ng/ml，對照組為（10.42±1.09）ng/ml，復發組為（227.45±20.67）ng/ml。手術組術前、復發組、對照組外周血Vav1水平比較，采用單因素方差分析，差異有統計學意義（F=6754.831，P=0.000）。進一步兩兩比較經LSD-t檢驗，復發組外周血Vav1水平高于手術組患者術前（t=11.936，P=0.000），手術組患者術前外周血Vav1水平高于對照組（t=110.464，P=0.000）。手術組患者手術前后外周血Vav1水平比較，經t檢驗，差異有統計學意義（t=1.4745，P=0.000），手術組術前高于術后。手術組患者術后外周血Vav1水平與對照組比較，經t檢驗，差異無統計學意義（t=-1.499，P=0.135）。對手術組患者術前外周血Vav1水平進行分析，淋巴結轉移陰性者的外周血Vav1水平為（195.09±15.07）ng/ml，淋巴結轉移陽性者為（199.38±15.97）ng/ml，經 t檢驗，差異無統計學意義（t=-1.140，P=0.256）。

2.2 胃癌腫瘤組織與正常黏膜組織Vav1的表達

手術組胃癌組織Vav1陽性表達率為82.5%（165/200），正常胃黏膜組織為13.3%（4/30）；復發組胃癌組織Vav1陽性表達率為95.16%（59/62）。3組患者Vav1陽性表達率比較，經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=86.340，P=0.000）。其中，手術組胃癌組織Vav1陽性表達率與對照組比較，經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=60.041，P=0.000），手術組高于對照組；復發組胃癌組織Vav1陽性表達率與手術組胃癌組織比較，經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=6.119，P=0.013），復發組高于手術組；復發組胃癌組織Vav1陽性表達率與對照組比較，經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=62.714，P=0.000），復發組高于對照組。見附圖。

2.3 手術組和復發組患者外周血與腫瘤組織中Vav1表達的相關性

Spearman相關分析顯示，手術組外周血與腫瘤組織中Vav1表達呈正相關（rs=0.345，P=0.000）。復發組外周血與腫瘤組織中Vav1表達也呈正相關（rs=0.443，P=0.000）。

附圖 3組患者Vav1蛋白的表達 （SP×400）

3 討論

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，發病率居惡性腫瘤前列，可發生于胃的各個部位，容易向胃壁及周圍組織侵犯，而且癥狀不典型，早期不易發現，容易誤診、誤治，失去手術機會[6-7]。及時準確的判斷腫瘤狀態，盡早預測復發對指導臨床綜合治療有重要意義。

Vav1又稱鳥苷酸轉換因子，具有鳥苷酸釋放因子活性，有助于小G蛋白上的二磷酸鳥苷和三磷酸鳥苷相互轉換，從而活化Ras和Rho等小G蛋白。Vav1主要表達于造血系統、造血細胞。Dbl家族中還有2個與Vav1結構相同的蛋白——Vav2和Vav3，其在人體中的表達比較廣泛。Vav1蛋白結構較為復雜，由DH、PH、CH、AC、SH2及SH3結構域組成，各結構域功能相輔相成，DH結構域起催化作用，PH和AC結構域可調節蛋白活性，CH結構域使Vav1處于失活狀態，SH2和SH3結構域主要介導Vav1與其他蛋白的相互作用。有研究顯示，Vav1蛋白在許多惡性腫瘤中表達升高，具有促進腫瘤生長、擴散、侵襲及遠處轉移的作用，其表達與腫瘤的惡性程度呈正相關[7-8]。本研究發現，Vav1在胃癌腫瘤組織中的表達強于正常胃黏膜組織，說明Vav1蛋白表達與腫瘤發生、發展關系密切。研究結果還發現，復發組腫瘤組織Vav1表達也增強，甚至高于手術組胃癌組織，說明Vav1表達在腫瘤復發過程中進一步增強，提示Vav1可能對胃癌的復發有促進作用。但本研究也發現，術前有無淋巴結轉移者外周血Vav1水平無差異，提示Vav1水平可能與胃癌淋巴結轉移情況無關。

實驗結果表明，手術組患者術前外周血中Vav1水平高于對照組，根治性手術去除腫瘤后Vav1水平降低，降至與對照組Vav1水平無差異。由此可見，外周血中Vav1水平高低與腫瘤組織的存續有十分密切的關系，腫瘤組織的存在與否直接影響Vav1水平的變化。對于復發組患者，外周血中Vav1水平升高，且高于手術組術前，說明Vav1水平與腫瘤的復發關系密切，筆者認為腫瘤的復發刺激Vav1水平升高，同時Vav1水平升高也通過某種機制刺激腫瘤的生長和復發。相關分析發現，手術組和復發組患者外周血與腫瘤組織中Vav1表達呈正相關，說明外周血中Vav1水平可以反映機體腫瘤組織狀態。

綜上所述，胃癌患者腫瘤組織Vav1過表達，外周血中Vav1水平升高，且外周血與腫瘤組織中Vav1表達呈正相關。Vav1與胃癌的關系十分密切，早期動態監測外周血中Vav1蛋白水平，可以及時準確地掌握腫瘤在患者體內的發展、變化，對預測術后生存率和腫瘤復發提供重要的參考價值。

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