腎透明細胞癌組織中趨化因子CXC配體3的表達及意義

齊亞靈 李 玥 隋洪玉 楊 哲 逄德志 張澤宇 向 雨 賈琳琳 王偉群

(佳木斯大學基礎醫學院，黑龍江 佳木斯 154002)

腎細胞癌(RCC)占成人惡性腫瘤的3%，據統計該病每年新發150 000例，病死約為115 000例。RCC中腎透明細胞癌(RCCC)是最常見的亞型，比例高達85%〔1〕。炎癥反應在腫瘤中有重要作用，當免疫應答不能精確地控制炎癥反應時，可導致腫瘤細胞周期、DNA修復和凋亡相關基因表達的變化，這些變化連同腫瘤微環境中的炎性細胞、免疫調節介質等可共同影響腫瘤的進程和轉移〔2〕。本實驗探討炎性趨化因子CXC配體(L)3在 RCCC中的重要作用。

1 材料與方法

1.1主要材料及試劑 組織芯片(上海芯超生物有限公司)；兔抗CXCL3單克隆抗體(Immunoway,美國)；免疫組化二抗(SABC)試劑盒(博士德，武漢)；光學顯微鏡(奧林巴斯,日本)；3，3′-二氨基聯苯胺(DAB)試劑(博士德，武漢)。

1.2組織芯片信息 組織芯片包括30例RCCC組織和30例相應的癌旁組織。

1.3免疫組織化學染色 組織芯片常規脫蠟入水；芯片置于10 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液中(pH6.0)用微波進行抗原修復20 min；待冷卻后，芯片置于3%過氧化氫中室溫撫育20 min以消除內源性過氧化物酶；用正常兔血清室溫封閉20 min，勿洗；滴加兔抗CXCL3單克隆抗體(1∶150)于4℃冰箱撫育過夜； Tris鹽酸緩沖鹽溶液(TBS)清洗芯片3次×5 min;滴加生物素標記山羊抗小鼠IgG，37℃撫育30 min；TBS清洗3次×5 min;滴加SABC，37℃撫育30 min；TBS清洗4次×15 min;滴加二氨基聯苯胺(DAB)試劑，鏡下觀察染色情況；待出現著色后立即用自來水終止顯色；行蘇木素復染、分化、脫水及封片。

1.4結果分析 CXCL3蛋白染色強度用以下兩個參數評分:(1)染色強度：無染色計0分；輕度染色計1分；中度染色計2分；強染色計3分。(2)陽性細胞百分比：無著色計0分；1/100著色計1分；1/10著色計2分；1/3著色計3分；2/3著色計4分。用兩個參數得分之和代表CXCL3蛋白表達量。

1.5統計分析 應用SPSS19.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1RCCC與癌旁組織CXCL3表達情況 RCCC組織CXCL3表達水平顯著低于癌旁組織；RCCC組織和癌旁組織腎透明細胞癌Ⅲ級組織CXCL3表達水平均顯著高于Ⅱ級(P<0.05)。見表1和圖1。

表1 RCCC與癌旁組織CXCL3表達差異

與Ⅱ級比較：1)P=0.044，2)P=0.037

圖1 CXCL3在RCCC與癌旁組織表達(DAB，×200)

2.2CXCL3表達與RCCC臨床病理參數關系 CXCL3表達水平與RCCC臨床病理參數如腫瘤大小、性別、年齡不具有相關性(P>0.05)。見表2。

表2 CXCL3表達與RCCC臨床病理參數的關系

3 討 論

腫瘤微環境(TME)中含有腫瘤細胞及不同類型的多種細胞，這些細胞可經細胞間復雜的信號交流網絡參與腫瘤進程。在這其中，細胞間相互通訊的重要調控分子之一就是趨化因子。在TME中，腫瘤相關宿主細胞和腫瘤細胞會釋放一系列趨化因子，從而招募和激活不同類型的細胞，影響抗腫瘤和促腫瘤之間的平衡。此外，趨化因子也參與腫瘤的其他進程，如腫瘤細胞生長、轉移和血管生成等〔3～5〕。

前列腺癌中CXCL3的相關研究結果顯示，外源性CXCL3可顯著促進前列腺癌細胞的遷移，但對細胞的增殖沒有影響，進一步研究表明外源性CXCL3可調節前列腺癌細胞腫瘤相關基因細胞外調節蛋白激酶(ERK)、腫瘤蛋白(TP)73、細胞內適應蛋白(NUMB)、B細胞淋巴瘤/白血病-2相關X蛋白(BAX)和N-myc下游調節蛋白(NDRG)3的表達〔6〕。隨后，應用免疫組化實驗觀察到前列腺癌組織中CXCL3蛋白表達量顯著高于非癌組織〔6〕。本研究表明與前列腺癌相同，CXCL3表達量也隨RCCC的發展和演進而逐漸增高。腫瘤微環境中的腫瘤上皮細胞、正常上皮細胞、間質細胞及趨化炎性細胞可分泌多種趨化因子，它們可經自分泌和旁分泌途徑作用于腫瘤細胞膜上的相應趨化因子受體而影響腫瘤的增殖和存活〔7〕。本實驗結果提示CXCL3可能主要由癌旁組織分泌，然后經微環境作用于癌組織的相應受體而參與RCCC進程，即在RCCC 中CXCL3可能主要經旁分泌途徑發揮調節功能。

1Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics〔J〕.Cancer J Clin，2013;63(1):11-30.

2Eiró N，Vizoso FJ.Imflammation and cancer〔J〕.World J Gastrointest Surg，2012;4(3):62-72.

3Chow MT，Luster AD.Chemokines in cancer〔J〕.Cancer Immunol Res，2014;2(12):1125-31.

4齊亞靈，王偉群，張建華，等.CXC 趨化因子配體 5 對前列腺癌細胞生長的作用〔J〕.中國老年學雜志，2014;34(11):3035-6.

5曲修勝，劉媛媛，孫華威，等.趨化因子CXC配體12/CXC受體4在前列腺癌細胞的表達及其對細胞增殖的作用機制〔J〕.中國老年學雜志，2017;37(7):1568-70.

6Gui SL，Teng LC，Wang SQ.Overexpression of CXCL3 can enhance the oncogenic potential of prostate cancer〔J〕.Int Urol Nephrol，2016;48(5):701-9.

7Balkwill F.Cancer and the chemokine network〔J〕.Nat Rev Cancer，2004;4(7):540-50.