RA相關(guān)自身抗體對(duì)HIV病毒檢測(cè)結(jié)果的影響

徐麗霞 毛根珍 林群 雷永良 劉敏

[摘要] 目的 探討類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）相關(guān)自身抗體對(duì)HIV病毒不同篩查方法的影響，為臨床中出現(xiàn)的HIV檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性提供解釋依據(jù)。 方法 選擇2015年7月～2016年7月我院接診的90例RA患者進(jìn)行檢測(cè)，按RA抗體類(lèi)風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）值高低分為RF<18 U/mL組（n=33）和RF>300 U/mL（n=57）；按抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）值高低分為抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組（n=39）和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組（n=51），采用快速膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）及電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）對(duì)所有患者進(jìn)行血清HIV病毒檢測(cè)，陽(yáng)性標(biāo)本采用免疫印記確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，并采用ELISA法對(duì)所有患者RF及抗CCP抗體進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果 快速膠體金法和ELISA法所檢測(cè)的所有患者結(jié)果均為陰性，ECLIA法檢測(cè)出12例患者HIV抗體呈陽(yáng)性，陽(yáng)性標(biāo)本采用免疫印記確認(rèn)，結(jié)果均為陰性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ECLIA法檢測(cè)RF-IgM<18 U/mL組的HIV抗體呈陽(yáng)性患者1例，RF-IgM>300 U/mL及RF-IgG >300 U/mL的HIV抗體呈陽(yáng)性患者分別為11例、3例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組中HIV抗體呈陽(yáng)性患者2例，抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組HIV抗體呈陽(yáng)性患者12例，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎高滴度的自身抗體對(duì)ECLIA法檢測(cè)患者HIV抗體具有一定的影響，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生，因此多種檢測(cè)方式進(jìn)行篩查是有必要的。

[關(guān)鍵詞] 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；抗體；篩查方法；HIV病毒

[中圖分類(lèi)號(hào)] R593 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）06-0124-04

[Abstract] Objective To investigate the influence of autoantibodies associated with rheumatoid arthritis（RA）on different HIV screening methods and to provide an explanation basis for the false positive of HIV test results in clinic. Methods 90 RA patients admitted in our hospital from July 2015 to July 2016 were enrolled in the study. According to the rheumatoid factor（RF） value of RA antibody， the patients were divided into RF<18 U/mL group（n=33） and RF>300 U/mL group（n=57）. According to anti-cyclic citrullinated peptide（anti-CCP） value， the patients were divided into anti-CCP antibody concentration <25 RU/mL group（n=39）and anti-CCP antibody concentration>500 RU/mL group（n=51）. Serum HIV was detected in all patients by rapid colloidal gold assay， enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）and electrochemiluminescence（ECLIA）. The positive samples were confirmed by immunoblot. The RF and anti-CCP antibodies in all patients were detected by ELISA method. Results All the patients tested by rapid colloidal gold assay and ELISA showed negative results. HIV antibodies in 12 patients were positive detected by ECLIA method and positive samples were confirmed by immunoblot. The results were negative（P<0.05）. There was 1 patient with HIV antibody-positive detected by ECLIA test in RF-IgM <18 U/mL group. There were 11 and 3 HIV antibody-positive patients in RF-IgM>300 U/mL and RF-IgG>300 U/mL group， respectively， and the difference between the two groups was significant（P<0.05）. There were 2 and 12 cases of HIV antibody positive in the anti-CCP antibody concentration <25 RU/mL group and anti-CCP antibody concentration>500 RU/mL HIV group， and the difference between the two groups was statistically significant（P<0.05）. Conclusion The high titer of autoantibodies to rheumatoid arthritis may affect the detection of HIV antibodies by ECLIA and lead to false positives. Therefore， a variety of testing methods for screening are necessary.

[Key words] Rheumatoid arthritis；Antibodies；Screening methods；HIV

人類(lèi)免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是一種可對(duì)人類(lèi)免疫系統(tǒng)造成缺陷并感染的慢性病毒，在病毒分類(lèi)學(xué)中屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒[1]。據(jù)調(diào)查，HIV病毒于1981年美國(guó)首次發(fā)現(xiàn)。HIV病毒通過(guò)對(duì)人體T淋巴細(xì)胞進(jìn)行破壞，阻斷了細(xì)胞及體液免疫過(guò)程，使人體免疫系統(tǒng)呈現(xiàn)癱瘓狀態(tài)，最終導(dǎo)致各種疾病感染蔓延，形成艾滋病[2-3]。目前HIV-1和HIV-2兩種HIV型已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)，其病毒結(jié)構(gòu)和傳播的方式均極為相似。近年來(lái)，我國(guó)HIV病毒感染患者及艾滋病患者數(shù)量逐年上升，個(gè)別地區(qū)已經(jīng)屬于快速增長(zhǎng)期，形式極為嚴(yán)峻[4]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)HIV抗體的篩查方式較多，由于檢測(cè)原理不同將其主要分為快速膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）及電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA），可快速或常規(guī)對(duì)患者血液、尿液及唾液進(jìn)行HIV篩查[5-6]。為了進(jìn)一步探討RA相關(guān)自身抗體對(duì)不同篩查方法檢測(cè)HIV病毒結(jié)果的影響，我院選取了90例RA患者采用不同方式進(jìn)行HIV病毒篩查，并且為了有效縮短窗口期，避免患者于窗口期傳染，采用將HIV抗原和抗-p24抗體共同包被的第4代抗原抗體雙監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的雙抗原夾心法試劑盒，同時(shí)對(duì)患者抗原和抗體進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇2015年7月～2016年7月我院接診的90例RA患者進(jìn)行檢測(cè)，所有患者均符合類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，其中男52例，女28例，年齡38～62歲，平均（46.57±12.38）歲，病程1～21年，平均（12.23±3.64）年。按RF值高低分為RF<18 U/mL組（n=33）和RF>300 U/mL（n=57）；按抗CCP抗體值高低分為抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組（n=39）和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組（n=51）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 取所有患者空腹靜脈血4 mL，采集時(shí)避免溶血，且采集后將標(biāo)本放置1～2 h，血液凝固且血塊已經(jīng)收縮后以3000 r/min進(jìn)行離心，時(shí)間為5 min，取出血清。需保存的血清應(yīng)置于-20℃以下環(huán)境，以待檢測(cè)。

1.2.2 檢測(cè)方法 采用3種檢測(cè)方式對(duì)標(biāo)本進(jìn)行HIV病毒檢測(cè)：①快速膠體金法；②酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）；③電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）?？焖倌z體金法（試劑盒由山東康華生物有限公司提供）及ELISA法（試劑盒由上?？迫A生物工程有限公司提供）包被抗HIV-1和抗HIV-2抗體；ECLIA法（試劑盒由羅氏診斷有限公司提供）包被抗HIV-1、抗HIV-2抗體以及HIV-1 p24抗原；ELISA法檢測(cè)患者類(lèi)風(fēng)濕因子及抗CCP抗體。檢測(cè)儀器選擇美國(guó)1575型洗板機(jī)和Bio2Rad550 酶標(biāo)儀，所有檢測(cè)操作均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

①對(duì)所有患者采用快速膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法及電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果記錄；②陽(yáng)性標(biāo)本采用免疫印記確認(rèn)實(shí)驗(yàn)；③檢測(cè)RF濃度對(duì)ECLIA法篩查HIV抗體的影響，RF濃度分為兩種，即RF<18 U/mL和RF>300 U/mL；④檢測(cè)抗CCP抗體濃度對(duì)ECLIA法篩查HIV抗體的影響，抗CCP抗體濃度分為兩種，即抗CCP抗體濃度<25 RU/mL和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)用SPSS 18.0軟件包處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 所有患者三種檢測(cè)結(jié)果比較

90例患者采用快速膠體金法及酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均為陰性；電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果中，12例患者HIV抗體呈陽(yáng)性，以上三種檢測(cè)方法所檢測(cè)的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=25.1163，P<0.05）。陽(yáng)性標(biāo)本驗(yàn)證采用免疫印記確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，其中HIV-p24抗原不確定患者9例，陰性患者3例；經(jīng)1個(gè)月觀(guān)察后進(jìn)行復(fù)查，7例患者由陽(yáng)性轉(zhuǎn)為陰性，2例患者仍然為不確定；經(jīng)3個(gè)月觀(guān)察后重新采血進(jìn)行檢查，結(jié)果均轉(zhuǎn)為陰性。

2.2 RF濃度對(duì)ECLIA法檢測(cè)HIV抗體的影響

90例患者分為RF<18 U/mL和RF>300 U/mL兩組，33例患者RF濃度<18 U/mL，ECLIA法檢測(cè)出RF-IgM<18 U/mL的1例患者HIV抗體呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為3.03%；57例患者RF濃度>300 U/mL，ECLIA法檢測(cè)RF-IgM>300 U/mL及RF-IgG >300 U/mL的HIV抗體呈陽(yáng)性患者分別為11例（19.30%）、3例（5.26%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=11.0942，P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3抗CCP抗體濃度對(duì)ECLIA法檢測(cè)HIV抗體的影響

90例患者分為抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組（n=39）和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組（n=51），ECLIA法檢測(cè)出抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組中HIV抗體呈陽(yáng)性患者2例（5.13%），檢測(cè)出抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組中HIV抗體呈陽(yáng)性患者12例（23.53%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.2293，P<0.05）。見(jiàn)表3。

3討論

艾滋病屬于危害性極大的一種傳染病，主要由于人體感染人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）產(chǎn)生[7-8]。HIV病毒可對(duì)人體的免疫系統(tǒng)進(jìn)行攻擊，其攻擊對(duì)象為人體免疫細(xì)胞中最為重要的CD4 T淋巴細(xì)胞，HIV病毒對(duì)CD4 T淋巴細(xì)胞的大量破壞，導(dǎo)致人體免疫功能急劇下降，患者一旦感染HIV病毒，起初數(shù)年可能無(wú)任何表現(xiàn)，但若發(fā)展成為艾滋病，則會(huì)出現(xiàn)各種臨床癥狀，一般初期癥狀多為感冒、流感、全身無(wú)力等，隨著病情的不斷加重，會(huì)出現(xiàn)皮膚、黏膜等白念球菌感染，呈現(xiàn)出單純皰疹、紫斑、血皰等，此后不斷侵蝕肺部、胃腸等，引起患體呼吸困難、腹瀉、胸痛等癥狀，且還會(huì)對(duì)患體神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)進(jìn)行侵犯，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的消耗，最終導(dǎo)致患者衰竭死亡[9-10]。據(jù)研究顯示，HIV的變異極為迅速，且可通過(guò)血液、精液等進(jìn)行傳播，世界范圍內(nèi)由于艾滋病死亡人數(shù)近1200萬(wàn)人，且感染人數(shù)超過(guò)3000萬(wàn)人，雖全世界眾多的醫(yī)學(xué)研究者為研究出治療藥物付出了巨大的心血，也未生產(chǎn)出特異性疫苗，以至于至今無(wú)法有效進(jìn)行治療，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康[11-12]。因此在預(yù)防艾滋病中，對(duì)HIV抗體的檢測(cè)尤為重要。

HIV抗體非特異反應(yīng)的原因非常復(fù)雜，目前多認(rèn)為與血清標(biāo)本出現(xiàn)的溶血、類(lèi)風(fēng)濕因子、系統(tǒng)性紅斑狼瘡以及使用血液制品等原因相關(guān)，除了以上內(nèi)、外源性干擾因素之外，其他導(dǎo)致HIV抗體不確定的因素報(bào)道也較多，如患者多次進(jìn)行狂犬疫苗的接種會(huì)導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)非特異性反應(yīng)等[13]。目前將抗體檢測(cè)結(jié)果的影響因素分為以下三種[14]：①患體免疫系統(tǒng)對(duì)HIV沉默；②患者已是HIV感染早期；③非特異性反應(yīng)。類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）屬于多系統(tǒng)性的自身免疫疾病，類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）屬于一種以變性lgG為靶抗原的自身抗體，于RA患者血清及關(guān)節(jié)液中發(fā)現(xiàn)，該抗體屬于lgM型，可與gGFc段進(jìn)行有效結(jié)合，多為IgA、IgM及IgG型[15]。其中二聚體形式的IgG型可存在于滑膜液中，二聚體沉積可通過(guò)關(guān)節(jié)軟骨表面對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)進(jìn)行有效激活，從而對(duì)關(guān)節(jié)造成炎性損傷。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，多肽證實(shí)瓜氨酸殘基由抗中間絲相關(guān)蛋白的cDNA序列所合成，并且在RA特異的的抗中間絲相關(guān)蛋白抗體識(shí)別表位屬于必要的組成。對(duì)抗中間絲相關(guān)蛋白抗體氨基酸序列進(jìn)行有效分析后，組合成為一條肽鏈，該肽鏈由瓜氨酸將精氨酸代替產(chǎn)生的20個(gè)左右氨基酸殘基合成。通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明瓜氨酸在RA患者血清中含有的抗中間絲相關(guān)蛋白相關(guān)抗體識(shí)別中屬于主要組成性的抗原決定簇成分[16-17]。RA患者血清中的抗CCP抗體主要為IgG型，且屬于環(huán)狀聚絲蛋白中的多肽片段，在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中具有較好的特異性和敏感性[18]。本研究中，根據(jù)RA患者抗體滴度分為RF<18 U/mL組、RF>300 U/mL、抗CCP抗體濃度<25 RU/mL組和抗CCP抗體濃度>500 RU/mL組，通過(guò)快速膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附法及電化學(xué)發(fā)光法對(duì)患者HIV病毒進(jìn)行篩查，結(jié)果顯示電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)出呈陽(yáng)性的患者高于快速膠體金法和酶聯(lián)免疫吸附法，并且抗CCP抗體濃度>500 RU/mL及RF>300 U/mL標(biāo)本中檢測(cè)出陽(yáng)性的幾率高于剩下兩組，本文分析假陽(yáng)性的產(chǎn)生很可能是由試劑盒中用的酶標(biāo)記抗人IgG與非特異性吸附的IgG或CCP等產(chǎn)生結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生，同時(shí)表明高濃度的自身抗體和類(lèi)風(fēng)濕因子均對(duì)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)HIV病毒具有一定的影響，從而產(chǎn)生一定的假陽(yáng)性。

目前HIV病毒的篩查方式多采用ELISA和膠體金法，其中ELISA具有較好的特異性和敏感性，但其操作具有需要酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等進(jìn)行輔助，且具有耗時(shí)長(zhǎng)的缺點(diǎn)，在檢測(cè)應(yīng)用中多用于大批量標(biāo)本篩查；快速膠體金法操作及判定陰性和陽(yáng)性的方法簡(jiǎn)單，具有較高的敏感性，但其特異性較弱，篩查中易出現(xiàn)假陽(yáng)性[19-20]。ECLIA在篩查HIV病毒中，可同時(shí)對(duì)抗原抗體進(jìn)行檢測(cè)，有效縮短檢查窗口期，具有自動(dòng)化的特點(diǎn)，操作較為簡(jiǎn)潔，但具有較高的敏感性，在患有自身免疫性疾病的患者檢測(cè)中，一旦患者血清中自身免疫抗體含量較高，則會(huì)導(dǎo)致干擾篩查，出現(xiàn)假陽(yáng)性。本研究中，ECLIA檢測(cè)HIV病毒出現(xiàn)12例陽(yáng)性，且經(jīng)后續(xù)觀(guān)察并采用免疫印記確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，均轉(zhuǎn)為陰性，提示采用ECLIA檢測(cè)RA患者血清HIV病毒的實(shí)驗(yàn)中若出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果需慎重對(duì)待，需采用另一檢測(cè)方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。由于檢測(cè)結(jié)果中出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因較多，也表明了篩查人員在進(jìn)行篩查時(shí)需非常仔細(xì)，以免出現(xiàn)人為干擾因素。

綜上所訴，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎高滴度的自身抗體對(duì)ECLIA法檢測(cè)患者HIV抗體具有一定的影響，可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生，因此多鐘檢測(cè)方式進(jìn)行篩查是有必要的，ECLIA法包被HIV-p24抗原，因此該檢測(cè)方法在HIV抗體篩查中具有臨床意義。

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（收稿日期：2017-08-01）