羅格列酮對PD小鼠模型腦黑質TNF-α表達的影響

張乘云，張丹丹

（1.承德醫學院人體解剖學教研室，河北承德 067000；2.寧夏醫科大學）

目前，帕金森病（Parkinson’s disease，PD）的發病機制尚未清楚，已知的機制可能與炎癥反應和細胞凋亡等多方面因素有關[1-2]。羅格列酮是過氧化物酶增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptors γ，PPAR-γ)的激動劑，已有實驗證明，羅格列酮在脂多糖誘導的PD體外模型中有抑制炎癥反應的作用[3]。本研究采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methy-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahy dropyridine，MPTP)的方法制備亞急性PD小鼠模型，觀察羅格列酮能否通過影響黑質腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）的表達，抑制中樞神經系統的炎癥反應，為進一步探討帕金森病的發病機制和治療方法提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 18只健康雄性C57/BL6J小鼠[北京維通利華公司，SCXX(京)2002-2003]，室溫下自由進食和飲水；Ultra Sensitive SP超敏試劑盒（福州邁新公司，中國）；小鼠抗TNF-α多克隆抗體（武漢博士德生物公司，中國）；神經毒素MPTP(Sigma公司，美國)；羅格列酮（國藥準字H20030569，成都恒瑞制藥有限公司，中國）。

1.2 小鼠分組和給藥 將18只C57小鼠隨機分為3組，每組6只，分別為對照組、模型組、羅格列酮組。除對照組外，其它兩組小鼠每天腹腔注射MPTP（25mg/kg）一次，連續注射7天；對照組小鼠每天腹腔注射等量的生理鹽水，連續注射7天；羅格列酮組小鼠在每天注射MPTP前4h給予羅格列酮（4mg/kg）灌胃。

1.3 標本采集 各組小鼠最后一次腹腔注射后72小時取材。10%水合氯醛腹腔注射麻醉，4%多聚甲醛灌流固定后取中腦部分，常規石蠟包埋，切片（厚5μm）。

1.4 免疫組化染色 采用免疫組織化學染色法檢測中腦黑質TNF-α的表達情況。TNF-α一抗工作濃度1：250，DAB顯色，以神經元胞漿中出現棕褐色顆粒判定為陽性細胞，封片后光學顯微鏡下觀察。采用CMIAS真彩色醫學圖像分析系統計數黑質TNF-α陽性細胞數，每只小鼠隨機選取3張切片，每張切片在顯微鏡（10×10）下隨機選取3個視野，取平均值。

1.5 統計分析 使用SPSS 19.0統計學軟件分析所得數據，計量資料采用（±s）表示，行q檢驗，P＜0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

模型組小鼠中腦黑質TNF-α陽性細胞數明顯高于對照組（P＜0.05），羅格列酮組小鼠中腦黑質TNF-α陽性細胞數明顯低于模型組（P＜0.05）。見附表：

附表 各組小鼠中腦黑質TNF-α陽性細胞數（±s）

附表 各組小鼠中腦黑質TNF-α陽性細胞數（±s）

與對照組比較：aP＜0.05；與模型組比較：bP＜0.05

組別 n TNF-α陽性細胞數 對照組 6 8.65±1.67模型組 6 19.24±2.52a羅格列酮組 6 13.64±2.57b

3 討論

PD的發病機制復雜，其中炎性反應在PD發病中有著重要作用。有研究提示，羅格列酮可能具有抑制中樞神經系統炎癥反應的作用。在脂多糖誘導的PD體外模型中，PPAR-激動劑羅格列酮能減少促炎性細胞因子的產生，而PPAR-拮抗劑可以阻止這一作用[3]，證明了羅格列酮具有抑制炎癥反應的作用。還有前期研究發現[4]，用MPTP制備的PD模型組小鼠黑質區多巴胺能神經元特異性標志物-酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）陽性神經元丟失嚴重，應用羅格列酮后可使TH陽性神經元丟失有所減輕，提示羅格列酮可能對PD具有一定的治療作用。為此，本研究觀察了羅格列酮對PD模型小鼠中腦黑質神經元炎癥因子TNF-α表達的影響，結果顯示羅格列酮組小鼠中腦黑質TNF-α陽性細胞數明顯低于模型組。因此，本研究提示，羅格列酮可能通過抑制PD小鼠模型中腦黑質炎癥因子的釋放，對PD具有一定的治療作用。

【參考文獻】

[1]劉翠芳，陳文強，王寧群，等.帕金森病的發病機制及藥物治療研究現狀[J].北京中醫藥，2016，35(5)：436-440.

[2]趙鵬，郜靜，李芳.帕金森病發病機制的研究現狀[J].中國療養醫學，2015，24(8)：806-808.

[3]何秀全.羅格列酮通過抑制小膠質細胞活化而保護多巴胺能神經元的研究[D].濟南：山東大學，2012.

[4]張乘云.羅格列酮聯合替米沙坦對帕金森病MPTP模型小鼠黑質多巴胺能神經元的保護作用[D].唐山：華北理工大學，2015.