SIX 1蛋白表達在胃癌病情評估中的價值

李瀚，顧磊#，李彤，張利紅

鄂東醫療集團市中醫醫院（市傳染病醫院）1病理科，2腫瘤外科，3檢驗科，湖北黃石4350000

SIX1基因可特異性調控細胞增殖、分化和凋亡，參與胚胎細胞發育和器官分化，在腫瘤的發生、發展及轉歸中具有重要價值[1‐2]。研究發現SIX1基因在乳腺癌、宮頸癌和結直腸癌等多種惡性腫瘤中表達異常，在其病情及預后評估中具有重要價值，可能較傳統的腫瘤標志物具有更高的準確度和特異度[3‐4]。本研究檢測胃癌患者及慢性胃炎患者SⅠX1蛋白表達情況，研究其在胃癌病情評估中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2010年1月至2017年1月鄂東醫療集團市中醫醫院診治的60例胃癌患者的病歷資料為胃癌組，均符合以下標準：①經胃鏡活檢病理組織學檢查、增強CT檢查和（或）手術切除標本病理組織學檢查確診為胃癌；②首次手術治療，非二次手術，既往未行手術、化療或放療治療；③無其他包括腫瘤等疾病，無嚴重心、腦、肺疾病；④無手術禁忌證。另選擇同期行胃鏡活檢病理組織學檢查結果為慢性胃炎的30例患者的病歷資料為對照組。兩組患者性別、年齡、吸煙史、酗酒史和體重指數比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，詳見表1。

1.2 細胞與試劑

正常人胃黏膜細胞系（GES‐1）和胃癌細胞系（AGS、SGC‐7901和KATO‐Ⅲ）購自美國ATCC公司。兔抗人SⅠX1抗體購自美國Sigma公司，SP免疫組織化學試劑盒購自碧云天生物科技公司。幽門螺桿菌檢測采用14C呼氣試驗檢測。腫瘤最大徑采用刻度尺直接測量手術切除標本原發灶。

表1 兩組患者的一般資料

1.3 胃癌組患者SIX 1蛋白表達檢測

胃癌組胃癌患者取胃癌組織和癌旁正常組織（距離腫瘤組織3 cm），對照組慢性胃炎患者取胃鏡活檢組織，采用SP法檢測SⅠX1蛋白表達，標本加入兔抗人SⅠX1抗體一抗后37℃孵育2 h，后加入酶標二抗室溫下孵育30 min，二氨基聯苯胺（di‐aminobenzidine，DAB）顯色劑顯色15 min。SⅠX1蛋白陽性染色呈棕黃色顆粒，主要定位于細胞質和核仁，根據陽性細胞數的比例將染色結果分為3級：陰性為陽性細胞數占0～10%，陽性為陽性細胞數占11%～50%，強陽性為陽性細胞數占50%以上，陽性和強陽性被定義為蛋白表達陽性。

1.4 胃癌細胞系SIX 1蛋白表達檢測

采用Western blot法檢測正常人胃黏膜細胞系GES‐1和胃癌細胞系AGS、SGC‐7901和KATO‐Ⅲ的SⅠX1蛋白表達，選擇β‐actin為內參照。檢測方法如下：采用 Trizol提取 GES‐1、AGS、SGC‐7901和KATO‐Ⅲ胃癌細胞系蛋白質，加入兔抗人SⅠX1抗體，顯色后，計算SⅠX1蛋白與內參β‐actin表達百分比。

1.5 統計學方法

采用SPSS 12.0統計軟件進行數據處理與統計學分析。計數資料以例數表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK‐q檢驗，兩獨立樣本組間比較采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組與對照組SIX 1蛋白表達的比較

胃癌組胃癌組織SⅠX1蛋白表達陽性41例，陽性表達率為68.3%；癌旁正常組織SⅠX1蛋白表達陽性為1例，陽性表達率為1.7%；對照組慢性胃炎組織SⅠX1蛋白表達陽性為1例，陽性表達率為3.3%；胃癌組胃癌組織SⅠX1蛋白表達陽性率高于癌旁組織和對照組慢性胃炎組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 胃癌組織SIX 1蛋白表達與臨床病理特征的關系

不同性別、年齡、病變位置、病理類型和是否患幽門螺桿菌感染的胃癌組織SⅠX1蛋白陽性表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；中+低分化、腫瘤最大徑≥5 cm、淋巴結轉移為 N2～3、有遠處轉移及病理分期為Ⅲ+Ⅳ期患者胃癌組織SⅠX1蛋白陽性表達高于高分化、腫瘤最大徑＜5 cm、淋巴結轉移為N0～1、無遠處轉移及病理分期為Ⅰ+Ⅱ期患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 胃癌組織SⅠX 1蛋白表達與臨床特征的關系

2.3 胃癌細胞系SIX 1蛋白表達情況

胃癌細胞系 AGS、SGC‐7901和 KATO‐Ⅲ中SⅠX1蛋白表達均高于正常人胃黏膜細胞系GES‐1，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（圖1）

3 討論

胃癌的發病機制與多種因素有關，其中基因表達異常是最重要的發病機制，包括基因突變、單核苷酸多態性及表觀遺傳學等眾多機制，與胃癌基因表達密切相關。SIX1基因屬于轉錄調控因子，是E2F1的轉錄靶基因，在G1～S期轉錄激活，S期轉錄水平增加。SⅠX1通過激活靶基因如Cyclin A1、Cyclin D1等，啟動靶基因轉錄，抑制與DNA結合的能力，最后在有絲分裂后期經蛋白水解降解[5‐6]，而SⅠX1的過表達則削弱了這一作用，加速細胞周期進程，造成細胞增殖，導致腫瘤的發生。此外，SⅠX1作為磷酸化蛋白，可被酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化失活，從而調控細胞周期G1～M期的轉變，尤其對DNA損傷的反應[7‐8]。目前的研究發現，SⅠX1蛋白表達在多種惡性腫瘤中顯著上升，可能與病情及預后密切相關。王彤等[9]采用免疫組織化學SP法檢測宮頸癌組織、宮頸上皮內瘤變組織及正常宮頸組織中SⅠX1蛋白的表達，發現宮頸癌組織SⅠX1蛋白陽性表達率高于宮頸上皮內瘤變組織及正常宮頸組織，認為SⅠX1與宮頸癌的發生發展密切相關，可能成為預測宮頸癌侵襲與轉移的分子標志物。魏巧等[10]發現食管鱗癌患者SⅠX1蛋白在癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，進一步發現SⅠX1蛋白表達與腫瘤大小、腫瘤浸潤深度及生存狀態有關，認為SⅠX1蛋白高表達是食管鱗癌患者預后不良的因素，可作為臨床預測食管鱗癌患者預后的一個重要指標。本研究中，胃癌患者癌組織中SⅠX1蛋白陽性表達率高于癌旁組織和慢性胃炎組織，胃癌細胞系AGS、SGC‐7901和KA‐TO‐Ⅲ中SⅠX1蛋白陽性表達均高于正常人胃黏膜細胞GES‐1（P＜0.05），這些證據證實SⅠX1蛋白表達異常與胃癌的發病機制有關。

圖1 正常人胃黏膜細胞系GES‐ 1和胃癌細胞系AGS、SGC‐7901和KATO‐Ⅲ中SⅠX 1蛋白表達情況

傳統的胃癌病情評估指標包括分化程度、腫瘤最大徑、淋巴結轉移、遠處轉移和病理分期，這些指標與病情及預后密切相關，可客觀科學地反映胃癌患者的病情及預后，但這些傳統指標多通過手術切除標本病理組織學檢查獲得，對于無法獲取標本患者則不適用而限制其臨床應用。本研究發現不同性別、年齡、病變位置、病理類型和是否患幽門螺桿菌感染的胃癌組織SⅠX1蛋白陽性表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；不同分化程度、腫瘤最大徑、淋巴結轉移、遠處轉移和病理分期患者胃癌組織SⅠX1蛋白陽性表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；中+低分化、腫瘤最大徑≥5 cm、淋巴結轉移為N2～3、有遠處轉移及病理分期為Ⅲ+Ⅳ期患者胃癌組織SⅠX1蛋白陽性表達高于高分化、腫瘤最大徑＜5 cm、淋巴結轉移為N0～1、無遠處轉移及病理分期為Ⅰ+Ⅱ期患者，差異均有統計學意義（P＜0.05），這些證據表明SⅠX1蛋白表達與胃癌的病情嚴重程度有關，可能SⅠX1蛋白陽性表達越高，胃癌病情越嚴重。SIX1基因可用于預測胃癌的病情，隨著檢測技術的發展，可能通過術前檢測外周血或胃鏡活檢組織SⅠX1蛋白表達即可提供客觀科學證據，較傳統的評估指標可能具有更高的準確度及特異度，臨床應用價值更高。值得注意的是，本研究對胃癌患者預后無相關研究，相信隨著研究不斷深入，SⅠX1蛋白表達的檢測可能在胃癌預后評估中具有一定價值。

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