胃癌組織中COX-2、NF-κB及VEGF的表達及與血管生成的關系

張建軍，鄒建平，馬曉雁，王志恒，劉素芳

(1. 河北省張家口市第一醫院，河北 張家口 075000；2. 河北省張家口市萬全區中醫院，河北 張家口 076250)

胃癌是常見的消化系統惡性腫瘤，也是造成人類死亡的主要原因[1-2]。胃癌的發生、發展與腫瘤細胞的侵襲、遷移密切相關，且以上生物學行為均離不開腫瘤組織中血管新生，而腫瘤血管生成受多種因子調控[3-4]。血管內皮生長因子(VEGF)是目前公認的特異性高、活性最強的血管生長因子，與多種惡性腫瘤的侵襲及預后息息相關；環氧合酶-2(COX-2)可刺激VEGF表達，進而促進微血管及淋巴管的生成；而細胞核因子-κB(NF-κB)是調節細胞基因轉錄的關鍵因子，參與多種基因的轉錄調控，在腫瘤血管生成中也具有重要的調節作用[5-7]。基于以上研究背景，本研究對比分析了胃癌組織及其癌旁組織中VEGF、COX-2、NF-κB的表達情況，并探究了三者表達情況與胃癌患者病理組織中血管生成的關系，現將結果報道如下。

1　臨床資料

1.1標本來源選取2015年1月—2016年11月張家口市第一醫院收治的69例胃癌患者，均經術前胃鏡及術后病理學檢查確診，患者臨床資料完整，術前未接受過任何抗腫瘤治療，且排除伴有其他嚴重疾病者。69例患者中男39例，女30例；年齡38～79(52.9±8.3)歲。采集所有患者病理組織切片標本，另隨機抽取40例患者采集其癌旁組織(距離癌組織邊緣2～3 cm)。

1.2主要試劑COX-2多克隆抗體(購于Santa Cruz Biotechnology公司)；兔抗人NF-κB多克隆抗體(購于Santa Cruz Biotechnology公司)；VEGF單克隆抗體(購于新達生化實驗公司)；兔抗人CD34多克隆抗體(購于上海滬峰化工有限公司)；SP免疫組化試劑盒(購于上海魯汶生物科技有限公司)。

1.3實驗方法將所有石蠟標本進行常規組織切片，厚度約4 μm，經脫蠟、水化、3%過氧化氫封閉內源性過氧化物酶處理后，以免疫組織化學法進行染色。操作步驟：所有切片常溫下復溫，滴加合適濃度的一抗：COX-2多克隆抗體/兔抗人NF-κB多克隆抗體/VEGF單克隆抗體/兔抗人CD34多克隆抗體，于37 ℃下孵育30 min，經PBS洗滌，3 min/次，洗3次；同時設立陰性對照(以PBS代替一抗)；滴加二抗：廣譜通用型非生物素化IgG，于37 ℃下孵育20 min，經PBS洗滌，3 min/次，洗3次；滴加DAB染色液，顯微鏡下控制顯色反應時間；然后經蘇木精復染2 min，梯度乙醇脫水，自然晾干后，以中性樹膠封片，于光學顯微鏡下判定染色結果。

1.4觀察指標①觀察胃癌組織及癌旁組織中COX-2、NF-κB、VEGF表達情況，以棕黃色顆粒為陽性著色，陽性細胞比例≥10%判定為陽性，否則為陰性。②分析COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達胃癌患者的臨床病理特征，包括性別、年齡、腫瘤大小及淋巴結轉移情況等。③統計COX-2、NF-κB、VEGF不同表達情況胃癌患者的微血管密度(MVD)。以棕色或棕黃色為CD34陽性，計數陽性內皮細胞或內皮細胞簇為1個血管計數，取3個視野的微血管數的平均值即為MVD。

2　結　　果

2.1胃癌組織及癌旁組織中COX-2、NF-κB、VEGF免疫組化染色表現COX-2、NF-κB、VEGF陽性著色主要為棕黃色染色，COX-2及VEGF主要表達于細胞質及細胞膜中，而NF-κB主要表達于細胞核及細胞質中，且胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性著色更為明顯。見圖1～6。

圖1　胃癌組織中COX-2表達情況(×40)

圖2　癌旁組織中COX-2表達情況(×40)

圖3　胃癌組織中NF-κB表達情況(×40)

圖4　癌旁組織中NF-κB表達情況(×40)

圖5　胃癌組織中VEGF表達情況(×40)

圖6　癌旁組織中VEGF表達情況(×40)

2.2胃癌組織及癌旁組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達情況比較胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達率均顯著高于癌旁組織(P均<0.05)。見表1。

表1　胃癌組織及癌旁組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達情況比較　例(%)

注：①與胃癌組織比較，P<0.05。

2.3胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF表達與患者臨床病理特征的關系不同性別、年齡、腫瘤大小的胃癌患者胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達率比較差異均無統計學意義(P均>0.05)；淋巴結轉移者COX-2、NF-κB陽性表達率顯著高于淋巴結未轉移者(P均<0.05)，而VEGF陽性表達率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.4胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF表達與胃癌患者MVD的關系胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達患者MVD均顯著高于陰性表達者(P均<0.05)；且三者均陽性表達者MVD顯著高于三者中任意一個陰性表達者(P<0.05)。見表3。

3　討　　論

在導致胃癌的代謝酶基因中，COX-2的作用最為突出，其過度表達與腫瘤細胞的過度增殖、侵襲及轉移等生物學行為息息相關，是腫瘤患者靶向治療的候選基因之一，已經成為當前胃癌研究領域的熱點[8-9]。VEGF與多種惡性腫瘤的發生密切相關，其陽性表達與腫瘤細胞的轉移、侵襲及預后也具有明顯的相關性[10]。NF-κB是一種基因轉錄調控因子，具有多向性，通過調控多種基因的轉錄促進腫瘤血管新生，當NF-κB活化時，會由胞漿轉位至細胞核，誘導并促進靶基因mRNA合成，參與COX-2、VEGF及bcl-2等多種基因的調控[11]。本研究結果顯示，癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達率均顯著高于癌旁組織，提示三者對胃癌進展及預后具有重要的評估價值；不同性別、年齡、腫瘤大小的胃癌患者胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達率差異均無統計學意義，淋巴結轉移者COX-2、NF-κB陽性表達率顯著高于淋巴結未轉移者，提示COX-2、NF-κB、VEGF表達與胃癌患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯相關性，而COX-2、NF-κB陽性表達與淋巴結轉移與否顯著相關；淋巴結轉移與否對胃癌患者VEGF陽性表達率無明顯影響，可能是由于本研究樣本量過小所致，仍需進一步研究確認。

表2　胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達與患者臨床病理特征的關系

表3　胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF表達與胃癌患者MVD的關系

腫瘤新生血管為轉移和復發提供了重要通道，在胃癌進展中起關鍵作用。其中VEGF可直接作用于細胞的有絲分裂原，增加微血管、細血管及小靜脈的通透性，還可促進血管內皮細胞分化、增殖，有利于血管新生[12]；COX-2過度表達可上調VEGF、成纖維細胞生長因子等多種與血管生成相關基因的表達，促進腫瘤血管生成；NF-κB則可通過調節上述兩者的表達調控胃癌血管生成，可作為胃癌治療的靶點[13]。本研究結果顯示，胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達者MVD均高于陰性表達者，提示COX-2、NF-κB、VEGF高表達均有助于促進胃癌組織腫瘤血管的生成；此外，三者均陽性表達者MVD也顯著高于三者中任意一個陰性表達者，提示三者間可能存在明顯的協同促進作用，但有關其具體的相關性仍需進一步研究。

綜上所述，胃癌組織中COX-2、NF-κB、VEGF陽性表達率顯著高于癌旁組織，且三者均可明顯促進胃癌組織中腫瘤血管新生，但有關三者間的相互關系仍需進一步深入研究。

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