糞便隱血及腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗在診斷結(jié)直腸癌中的臨床價值

黃廣武

（欽北區(qū)人民醫(yī)院，廣西 欽州 535000）

結(jié)直腸癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤之一。近年來，我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈逐漸上升的趨勢。董愛萍[1]的研究表明，對結(jié)直腸癌患者的病情進行早期診斷和治療，對提高其治療效果和改善其預(yù)后具有重要意義。目前，影像學(xué)檢查、直腸指檢、糞便隱血檢驗、結(jié)腸鏡檢查和糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗等均是臨床上診斷結(jié)直腸癌的常用方法。有研究表明，使用糞便隱血及腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對結(jié)直腸癌患者的病情進行診斷，可有效地提高其診斷的準確率。為了進一步證實此研究結(jié)果的有效性，筆者對欽北區(qū)人民醫(yī)院收治的100例結(jié)直腸癌患者的臨床檢驗資料進行回顧性研究。現(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

本次研究的對象為2015年12月至2016年12月期間欽北區(qū)人民醫(yī)院收治的100例結(jié)直腸癌患者。在這100例患者中，有男性患者60例，女性患者40例；其年齡為25～70歲，平均年齡為（47.59±2.14）歲。

1.2　研究方法

對這100例患者分別進行糞便隱血檢驗、腫瘤標(biāo)志物檢驗、糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗、病理活檢。具體的方法是：1）對患者進行糞便隱血檢驗。⑴使用便隱血膠體金檢測紙嚴格按照說明書上的流程對患者進行糞便隱血檢驗。⑵為每位結(jié)直腸癌患者采集2份糞便標(biāo)本進行檢驗。⑶陽性結(jié)果的判定標(biāo)準是：①同一患者同一份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果均呈陽性，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。②同一患者同一份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果不一致，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。③同一個患者的2份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果均呈陽性，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。④同一個患者的2份糞便標(biāo)本的2次檢驗結(jié)果不一致，即可判定其最終的檢驗結(jié)果為陽性。2）對患者進行糞便P53及APC檢驗。⑴提取糞便標(biāo)本中的DNA。①將0.5 g的糞便加入抽提液中，在抽提液的總體積達到2ml后充分搖晃，再以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對糞便標(biāo)本與抽提液的混合物進行5min的離心處理，然后轉(zhuǎn)移上清液。②將糞便抽提液置入到沉淀物中加至2ml后充分搖勻，將其置于37℃下過夜。第二天以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對混合液進行15min的離心處理，然后轉(zhuǎn)移上清液。③將等體積的平衡酚加入到沉淀物中充分搖勻，再以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對其進行10min的離心處理。用上述方法重復(fù)抽提3次，然后轉(zhuǎn)移上清液。④將積氯仿-異戊醇按照24：1的比例加入到經(jīng)酚處理后的沉淀物中充分搖勻，再以每分鐘10 000 r的轉(zhuǎn)速對其進行10min的離心處理，然后轉(zhuǎn)移上清液[2]。⑤將1/10體積的HAC-NaAC緩沖液及過量酒精加入到經(jīng)積氯仿-異戊醇處理后的沉淀物中，其濃度為3mol/L，pH值為5.2。將上述混合液置于30℃下2個小時，再以每分鐘12 000 r的轉(zhuǎn)速對其進行15min的離心處理，然后去除上清液。⑥用預(yù)冷酒精（濃度為70%）對沉淀物進行2次沖洗，自然晾干后加入DDH2O進行溶解，再以每分鐘12 000 r的轉(zhuǎn)速對其進行20min的離心處理，然后去除沉淀物。⑦采用瓊脂糖電泳法對上清液中的DNA進行驗證，然后將其置于零下20℃的溫度下備用。⑵進行APC基因突變檢驗。將APC基因中的兩個外顯子分別設(shè)計兩對引物（由上海生工生物工程公司生產(chǎn)），進行PCR擴展，將擴展的條件設(shè)為56℃30 s、94℃40 s、72℃40 s，循環(huán)60次，將72℃的延展設(shè)為10分鐘。PCR產(chǎn)物通過濃度為8%的非聚丙烯酰胺凝膠電泳法顯現(xiàn)觀察結(jié)果。⑶進行P53基因突變檢驗。將P53基因中的第5～8外顯子設(shè)為引物，然后對PCR進行擴展，將擴展的條件設(shè)為72℃60 s、55℃60 s、94℃40 s，PCR產(chǎn)物通過濃度為8%的非聚丙烯酰胺凝膠電泳后，采用銀然顯現(xiàn)法觀察結(jié)果。3）糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗。對患者的糞便隱血、糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗的結(jié)果進行綜合分析，然后確定其檢驗結(jié)果。4）對患者進行病理活檢。

1.3　觀察指標(biāo)

將病理活檢的結(jié)果作為最終的診斷結(jié)果，比較使用糞便隱血檢驗、糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗和糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對結(jié)直腸癌患者的病情進行診斷的準確率。

1.4　統(tǒng)計學(xué)處理

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS20.0軟件中進行處理，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用%表示，采用X2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

進行病理活檢的結(jié)果是：這100例患者均患有結(jié)直腸癌。進行糞便隱血檢驗的結(jié)果是：在這100例患者中，有30例患者的檢驗結(jié)果呈陽性，對其病情進行診斷的準確率為30%。進行糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果是：在這100例患者中，有50例患者的檢驗結(jié)果呈陽性，對其病情進行診斷的準確率為50%。進行糞便隱血及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗的結(jié)果是：在這100例患者中，有95例患者的檢驗結(jié)果呈陽性，對其病情進行診斷的準確率為95%。與單獨進行糞便隱血檢驗或糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果相比，使用糞便隱血檢驗及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對患者的病情進行診斷的準確率更高（P＜0.05）。詳見表1～表3。

表1　對這100例患者進行糞便隱血檢驗的結(jié)果

表2　對這100例患者進行糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果

表3　對這100例患者進行糞便隱血檢驗及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗的結(jié)果

3　討論

對結(jié)直腸癌患者的病情進行早期診斷，可明顯提高其治療的效果，改善其預(yù)后，降低其死亡率[3]。影像學(xué)檢查、實驗室生化學(xué)檢驗和病理學(xué)檢查均是臨床上診斷結(jié)直腸癌的常用方法。糞便檢測是一種無創(chuàng)檢查方法。糞便隱血檢驗主要是通過生化學(xué)檢測法對患者的糞便進行檢驗，其原理是對患者糞便中所含過氧化物酶的活性成分進行檢驗，如血紅蛋白中的亞鐵血紅素會催化糞便中的過氧化氫釋放新生態(tài)氧使其底物氧化顯色等。但是，對結(jié)直腸癌患者單純進行糞便隱血檢驗，無法明確其出血的位置。喬寶軍等[4]的研究表明，腫瘤標(biāo)志物作為臨床上敏感性及特異性均較高的檢驗指標(biāo)，可為腫瘤患者的臨床診斷和治療提供準確可靠的參考依據(jù)。糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗是臨床上應(yīng)用較為廣泛的檢驗方法之一。與進行糞便隱血檢驗相比，在對結(jié)直腸癌患者進行糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗時其病情的檢出率較高。臨床上常用的糞便腫瘤標(biāo)志物有CA242、CA2199、CA125、CA153、CEA、TSGF等。其中CEA是在結(jié)腸粘膜組織中分離所得，是臨床上診斷結(jié)直腸癌的常用輔助檢驗指標(biāo)，此項指標(biāo)的靈敏度及特異性均較差，易發(fā)生漏診。TSGF是一種分子量不大的可溶性多肽類，是臨床上常用的特異性腫瘤標(biāo)志物之一。TSGF主要由惡性腫瘤細胞所分泌，在惡性腫瘤形成和生長時，腫瘤及腫瘤周圍的毛細血管會大量地增殖腫瘤因子，導(dǎo)致TSGF被釋放。但是，對結(jié)直腸癌患者進行單一的糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗，其臨床檢出率并不高，易發(fā)生漏診。因此，臨床上應(yīng)將糞便隱血檢驗與糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗兩者聯(lián)合起來，從而提高對結(jié)直腸癌患者的病情進行診斷的準確率。本次研究的結(jié)果顯示，與單獨進行糞便隱血檢驗或糞便腫瘤標(biāo)志物檢驗的結(jié)果相比，使用糞便隱血檢驗及糞便腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗對患者的病情進行診斷的準確率更高。進行糞便隱血及腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗可作為診斷結(jié)直腸癌的主要方法。

[1]董愛萍.聯(lián)合檢驗糞便及腫瘤標(biāo)志物在結(jié)直腸癌診治中的價值觀察[J].中國急救醫(yī)學(xué),2015,35(z2)：160-161.

[2]姚宏偉,姚響蕓,孫濤，等.腹腔鏡結(jié)直腸癌根治性切除聯(lián)合同期腹腔鏡或開腹肝大部切除術(shù)治療同時性結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的療效分析[J].中華消化外科雜志,2016,15(2)：128-134.

[3]陳文琪,李小琴,張曉梅，等.羧基張力蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達及其臨床意義[J].中華消化外科雜志,2016,15(8)：809-814.

[4]喬寶軍,李世榮,武子濤，等.納米葉酸磁珠靶向檢測技術(shù)在老年結(jié)直腸癌患者早期診斷中的應(yīng)用[J].中國老年學(xué)雜志,2016,36(5)：1134-1136.