VGLL4蛋白在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)及其臨床意義

韓新影，劉紅正，孫杰，張志剛

（1.河北省滄州市人民醫(yī)院 病理科，河北 滄州 061000；2. 河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，河北 滄州 061001）

侵襲和轉(zhuǎn)移是胃癌惡性生物學(xué)行為的重要特征，是一個(gè)多步驟、多因素參與的復(fù)雜過程，也是造成胃癌患者預(yù)后差的主要原因[1-2]。轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白4（vestigial-like family member 4，VGLL4）是最新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，VGLL4可以與Yes激酶相關(guān)蛋白（Yes-associated protein，YAP）競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子（transcription enhancer factor domain family member，TEAD），從而搶先一步控制YAP-TEAD信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。有研究報(bào)道，VGLL4在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[3-6]。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)胃癌和癌旁組織中VGLL4蛋白的表達(dá)，判斷VGLL4蛋白表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

選取2011年6月-2015年6月河北省滄州市人民醫(yī)院病理科存檔胃癌患者的石蠟包埋組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織（距癌變部位＞5 cm）各168例。重新制備4μm切片，免疫組織化學(xué)法染色，由2位有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師重新審核病理診斷報(bào)告的準(zhǔn)確性和組織學(xué)分型。其中，女性48例，男性120例；年齡24～89歲，平均60.5歲。組織學(xué)類型包括普通型腺癌、印戒細(xì)胞癌及少數(shù)神經(jīng)內(nèi)分泌癌，采用2010年國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，將所有患者分為0期（4例）、Ⅰ期（32例）、Ⅱ（45例）、Ⅲ期（74）、Ⅳ期（13）。

1.2　方法

1.2.1免疫組織化學(xué)法兔抗人VGLL4單克隆抗體（bs-9185R）（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。嚴(yán)格按照免疫組織化學(xué)SP法試劑盒說明書進(jìn)行操作，VGLL4一抗稀釋比例為1∶200，用已知陽性組織切片做陽性對(duì)照，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.2.2判定標(biāo)準(zhǔn)VGLL4蛋白著色部位為細(xì)胞核，少數(shù)患者可見細(xì)胞漿著色。采用染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比綜合評(píng)定陽性結(jié)果。染色強(qiáng)度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞百分比：無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞＜25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比2項(xiàng)積分相加：0～3分為陰性，4～7分為陽性[7]。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　VGLL4蛋白在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)

VGLL4蛋白的陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒，VGLL4在胃癌組織中多呈陰性表達(dá)（見附圖），表達(dá)陽性率僅為17.3%（29/168），免疫組織化學(xué)法評(píng)分（1.45±0.15）分；而在癌旁組織中多呈陽性表達(dá)（見附圖），表達(dá)陽性率為62.5%（105/168），免疫組織化學(xué)法評(píng)分（4.75±0.20）分。對(duì)VGLL4蛋白在胃癌和癌旁組織中的陽性表達(dá)率進(jìn)行比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=71.698，P=0.000）；對(duì)VGLL4蛋白在胃癌和癌旁組織中的免疫組織化學(xué)法評(píng)分進(jìn)行比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=171.092，P=0.000），VGLL4蛋白在胃癌組織中的表達(dá)低于癌旁組織。

2.2　VGLL4蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

按性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、有無淋巴結(jié)及TNM分期進(jìn)行分組，檢測(cè)胃癌組織中VGLL4蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明，VGLL4蛋白在深度浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期較高的胃癌組織中表達(dá)較少（P＜0.01）。見附表。

附圖　VGLL4蛋白在胃癌和癌旁組織中的表達(dá)　（SP×100）

附表　胃癌臨床病理特征與VGLL4蛋白表達(dá)的關(guān)系

續(xù)附表

3　討論

胃癌是一種常見的消化道惡性腫瘤之一，大多數(shù)胃癌患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已到晚期，死亡率較高，預(yù)后較差。胃癌發(fā)生的分子機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)，涉及眾多癌基因和抑癌基因的表達(dá)，深入研究胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)基因和蛋白產(chǎn)物，有助于發(fā)現(xiàn)新的靶點(diǎn)。

VGLL4是VGLL的家族成員之一，是最新發(fā)現(xiàn)的原癌蛋白YAP的一個(gè)致命對(duì)手。VGLL4通過與YAP競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合TEAD4，可以搶先一步控制YAP的活性開關(guān)，從而抑制YAP的活性來抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)，VGLL4蛋白在胃癌組織中減少，且與腫瘤的發(fā)展、惡化呈負(fù)相關(guān)，是一種潛在的抑癌蛋白，且癌細(xì)胞對(duì)于該多肽抑制劑的敏感性與癌細(xì)胞本身的YAP/VGLL4蛋白比率呈正相關(guān)[8]。另有研究發(fā)現(xiàn)，miR-222與VGLL4表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，生物信息學(xué)分析結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明VGLL4是miR-222在胃癌細(xì)胞中的直接靶標(biāo)[9]。目前國內(nèi)該項(xiàng)研究甚少，河北省還未有相關(guān)方面的報(bào)道。

VGLL蛋白家族由2個(gè)TDU結(jié)構(gòu)域組成，其抑癌作用主要來自于第2個(gè)結(jié)構(gòu)域。Hippo信號(hào)通路是近年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)重要抑癌通路，原癌蛋白YAP是其下游主要的效應(yīng)分子。正常情況下，YAP不表達(dá)或者呈低表達(dá)，通路中的一些分子通過一系列磷酸化來抑制YAP的表達(dá)，一旦上游或者下游的分子發(fā)生突變，這些分子就會(huì)激活原先不表達(dá)或低表達(dá)的YAP，作為轉(zhuǎn)錄共激活因子與TEAD1結(jié)合，誘導(dǎo)靶基因表達(dá)，從而發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡、上皮間質(zhì)化轉(zhuǎn)移與癌變的作用，產(chǎn)生腫瘤[10-12]，因此YAP蛋白的表達(dá)與胃癌、肺癌等多種癌癥密切相關(guān)，是腫瘤治療的潛在分子靶點(diǎn)，因此靶向YAP的抑制劑可能會(huì)更有效、更直接地糾正失調(diào)的Hippo信號(hào)通路，殺死腫瘤。研究者解析VGLL4與TEAD4形成復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)，并發(fā)展針對(duì)YAP的多肽類抑制劑，結(jié)果顯示，該多肽類抑制劑能有效抑制胃癌細(xì)胞的增殖及腫瘤的生長(zhǎng)[8]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VGLL4在胃癌中的表達(dá)較癌旁組織減少，且VGLL4蛋白在深度浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期較高的胃癌組織中表達(dá)較少，提示胃癌組織中VGLL4低表達(dá)與胃癌患者預(yù)后差相關(guān)，是一種潛在的抑癌蛋白。綜上所述，胃癌組織中VGLL4的檢測(cè)可以反映腫瘤細(xì)胞的侵襲、增殖及轉(zhuǎn)移情況，可以在一定程度上反映胃癌的生物學(xué)特征，VGLL4可以通過中斷YAP-TEADs相互作用，來抑制腫瘤的生長(zhǎng)，為YAP驅(qū)動(dòng)的腫瘤提供新的治療策略[13]。

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