溫和灸腎俞穴對衰老大鼠血清MDA及肝腎功能的影響

馬金丹，黃 艷，顧沐恩，方臻臻，馬 喆，趙 琛，殷之光*

（1.上海中醫藥大學，上海 201203；2.上海市針灸經絡研究所，上海 200030）

世界衛生組織（WHO）明確強調：健康壽命比壽命更重要，最終目的是提高人口的健康壽命[1-3]。本課題組以往開展了有關針灸延緩衰老的臨床研究，結果顯示，艾灸可明顯改善老年人衰老相關癥狀，增強老年人外周血單個核細胞Bcl-2、PKC 表達[4]，并從衰老相關基因篩選、衰老信號傳導通路調控等方面研究艾灸抗衰老的調控機制[5]。但衰老的發生發展是機體功能狀態的時空漸變，隨時間的漸進性，衰老的進程由密變疏逐步弱化而衰退[6]。因此，現階段關于抗衰老的研究熱點已從方法與手段過渡到時序方案。本研究基于自然衰老大鼠模型，通過檢測大鼠血清MDA含量變化，觀察不同時序艾灸腎俞穴延緩衰老效應，并探索長期艾灸腎俞穴的安全性，為進一步闡明衰老的發病機制及不同時機艾灸延緩衰老的作用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 動物 選用12月齡，體質量（600±20）g，雄性清潔級SD大鼠40只（上海中醫藥大學動物實驗中心）；溫度22～27 ℃，相對濕度為50%～70%。所有大鼠自由飲水進食，進行適應性飼養，1周后如無不良反應，飲食飲水正常，則可納入正式實驗。

1.2 試劑與儀器 特制細艾條（南陽漢醫艾絨有限責任公司）。TBA試劑盒（南京建成生物研究所）；ELISA試劑盒（上海源葉生物有限公司）。

1.3 分組與治療

1.3.1 分組 40只大鼠隨機分為4組，分別為24月齡對照組、艾灸1組、艾灸2組、18月齡對照組，每組10只。

1.3.2 治療 18月齡對照組（n = 10）：飼養至18月齡，不進行治療。24月齡對照組（n = 10）：飼養至24月齡，不進行治療。艾灸1組（n = 10）：從大鼠12月齡開始艾灸腎俞穴（穴位定位參照李忠仁主編《實驗針灸學》，中國中醫藥出版社，2003），采用直徑5 mm小艾條點燃后在距離穴位2 cm處施灸，兩側腎俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至18月齡，再飼養至24月齡。艾灸2組（n = 10）：從大鼠18月齡開始艾灸腎俞穴，采用直徑5 mm小艾條點燃后在距離穴位2 cm處施灸，兩側腎俞交替操作，1次/d，20 min/次，直至24月齡。

1.4 標本采集 18月齡對照組大鼠于飼養至18月齡時處死取材，其余4組均在24月齡時處死取材。實驗結束后，大鼠24 h禁食、不禁水。2%戊巴比妥鈉50 mg/kg行腹腔注射，待大鼠麻醉后，取腹主動脈血4～5 mL，離心制備血清待檢。

1.5 指標檢測 采用TBA方法檢測各組大鼠血清MDA含量變化。采用ELISA方法檢測各組大鼠血清丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）以及血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量變化。

1.6 統計學方法 采用SPSS 13.0 統計軟件進行數據分析。計量資料數據服從正態分布，采用均數±標準差（）表示；不服從正態分布，則以中位數（四分位間距）M（Q）表示。數據方差齊時，采用單因素方差分析，兩兩比較采用最小顯著差法（LSD）；方差不齊時采用Games-Howell比較組間差異。數據不符合正態分布，組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗，兩兩比較則采用Mann-Whitney U檢驗。檢驗水準為α = 0.05。

2 結果

2.1 最終納入實驗各組大鼠數量 18月齡對照組大鼠沒有出現死亡情況，24月齡對照組大鼠死亡2只、艾灸1組大鼠死亡2只，艾灸2組死亡2只，故最終納入實驗的為18月齡對照組（n = 10）、24月齡對照組（n = 8）、艾灸1組（n = 8）、艾灸2組（n = 8）。2.2 大鼠血清MDA含量的比較 見表1。

表1 大鼠血清MDA含量比較（） nmol/mL

表1 大鼠血清MDA含量比較（） nmol/mL

注：與18月齡對照組比較，## P＜0.01；與24月齡對照組比較，△△ P＜0.01

組 別 n MDA 18月齡對照組 10 2.09±0.85 24月齡對照組 8 4.36±0.55##艾灸1組 8 2.46±0.77△△艾灸2組 8 2.12±0.67△△

2.3 各組大鼠血清AST、ALT水平比較 見表2。

表2 各組大鼠血清ALT、AST水平比較 U/L

2.4 各組大鼠血清CRE、BUN水平比較 見表3。

表3 各組大鼠血清CRE、BUN水平比較（x±s）

3 討論

腎俞穴出自《靈樞·背腧》，別名少陰俞，與腎相應，屬足太陽膀胱經。腎俞穴是腎中精氣輸注的部位，中醫認為，通過刺激腎俞穴能夠益精補腎、培補腎元，又可以緩解腰肌勞損[7-8]。現代醫學研究[9-10]認為，刺激腎俞穴可以通過抗氧化、提高免疫力、改善神經內分泌等途徑達到延緩衰老的目的。

抗衰老治療已經廣泛并運用在人體衰老的進程中，研究[11-12]認為，對于不同時間艾灸干預的對衰老的干預效應不同，針灸在不同時間窗的介入對機體產生的生物學效應存在差異。本研究中，艾灸1組從大鼠12月齡開始艾灸，灸至18月齡，灸時半年，即從大鼠壯年期開始灸至初老期；艾灸2組從大鼠18月齡灸至24月齡，灸時也為半年，即從大鼠初老期灸至衰老期，比較艾灸介入時間的不同。結果顯示，衰老大鼠血清MDA水平升高，而2組艾灸組對MDA的影響效應相當，可以推測，對于氧化應激所致衰老，艾灸1組與艾灸2組的時間對其影響并無明顯差別。而對BUN的調節，艾灸2組的調節作用更明顯，這也可能與艾灸1組介入時間較早，其效應未能持續至24月齡有關。

MDA的水平高低可以直接反應出機體氧自由基水平，以及過氧化反應的強度和速率，是反映因過氧化導致機體組織和細胞損傷程度的重要指標[13]。因此MDA作為氧化應激系統的重要指標被廣泛研究[14]。本實驗結果顯示，衰老大鼠血清MDA水平隨著組織的衰老而逐漸升高，艾灸腎俞穴可以通過降低自然衰老大鼠腎血清MDA水平，產生抗衰老作用。本研究結果顯示，各組大鼠血清MDA的表達：與18月齡對照組比較，24月齡對照組大鼠血清MDA含量明顯升高，與24月齡對照組比較，艾灸1組、艾灸2組血清MDA水平均有明顯降低（P＜0.01），但不同介入時間比較，艾灸1組與艾灸2組并無統計學意義。

本研究結果表明，與18月齡對照組比較，24月齡對照組大鼠血清ALT、BUN含量明顯升高，而艾灸后艾灸1組、艾灸2組血清ALT及AST表達與24月齡對照組比較無差異，艾灸2組大鼠血清BUN水平降低。提示了本研究所采用的艾灸療程與劑量，對自然衰老大鼠肝功能無損害，并且對其腎功能有一定的改善作用。這也與祖國醫學理論中的“治未病”概念相符合[15]。

參考文獻：

[1]KHANSS, SINGER BD, VAUGHAN DE. Molecular and physiological manifestations and measurement of aging in humans[J]. Aging Cell, 2017, 16(4):624-633.

[2]郭金華.中國老齡化的全球定位和中國老齡化研究的問題與出路[J].學術研究, 2016(2):61-67.

[3]劉志甫.農村養老與醫療保障:中國老齡化問題的重心[J].求索, 2016(8):22-26.

[4]崔云華,施茵,國蘭琴,等.艾灸對老年人衰老癥狀及外周血單個核細胞細胞周期的影響[J].遼寧中醫雜志, 2008,35(5):758-760.

[5]譚琳鎣,趙天平,國蘭琴,等.溫和灸對自然衰老模型大鼠肝組織Rb、P53、Bcl-2、PKC表達的影響[J].環球中醫藥,2011, 4(6):406-412.

[6]葛亮,王樺,曾爾亢,等.衰老相關基因研究進展[J].中國老年學雜志, 2014, 34(22):6529-6532.

[7]張貴濤,何新芳.神闕灸與養生[J].長春中醫藥大學學報,2016, 32(4):739-741.

[8]楊杰,張玲莉,陳炳霖,等.艾灸腎俞穴對男子散打運動員血清睪酮和免疫球蛋白的影響[J].上海體育學院學報,2014, 38(5):61-64,78.

[9]國蘭琴,陳漢平,吳煥淦,等.腎俞穴延緩衰老的應用與研究[J].遼寧中醫雜志, 2007, 34(6):732-734.

[10] LEI F, SHEN W-B, CUI Y-H, et al. Effect of moxibustion at Shenshu(BL 23)on the ethology,corticosterone and glucocorticoid receptor in aging rats[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2016,14(4):250-256.

[11] 劉陽,王蓓蕾,高潔,等.不同時間艾灸預處理對大鼠運動疲勞緩解作用的實驗研究 [J]. 湖南中醫雜志, 2016,32(1):162-163.

[12]宋艷,嵇波,汪德生,等.不同時機針刺對模擬失重大鼠腎功能和腎臟氧自由基代謝的影響[J].中國針灸, 2014,34(11):1106-1110.

[13]郭曉農,王兵,張念姣.黨參多糖對D -半乳糖衰老模型小鼠的影響[J].中國獸醫醫藥雜志, 2014, 33(3):45-47.

[14]周次利,吳璐一,竇傳字,等.艾灸生成物對大鼠腦神經系統形態學的影響[J].上海針灸雜志, 2014, 33(6):495-498.

[15]熊娟,徐笑紅.衰老過程中端粒、線粒體及干細胞功能的相關性[J].國際檢驗醫學雜志, 2017, 38(8):1082-1084.