針刺聯合補陽還五湯對大鼠急性脊髓損傷后相關血清學指標的影響

孫慧麗　

(長春醫學高等專科學校，吉林　長春　130031)

脊髓損傷是由于外界暴力作用于脊髓導致損傷節段各種感覺、運動和括約肌功能障礙，病理反射和肌張力異常等相應改變，外周神經聯系部分則完全中斷，造成機體感覺運動功能嚴重障礙，患者多表現為不全癱或全癱〔1〕。目前在治療上有脊髓神經減壓、激素沖擊、后期神經生長因子應用、細胞移植、中醫藥等方法，其中中醫藥是治療急性脊髓損傷重要步驟，本研究探討針刺聯合補陽還五湯對急性脊髓損傷大鼠相關指標的影響。

1　資料與方法

1.1臨床資料隨機選取36只大鼠分成3組，分別為模型對照組、激素組、針刺聯合補陽還五湯組各12只，雌雄各半，平均體重(125±15)g，衛生部實驗動物長春繁育場中心提供，均為普通大鼠，先飼養10 d后開始造模。再進行藥物配置，模型對照組予0.9%氯化鈉注射液10 ml，激素組應用地塞米松5 mg，補陽還五湯組成有生黃芪、當歸尾、赤芍、地龍、川芎、紅花、桃仁等，來源為長春中醫藥大學提供的顆粒物。

1.2方法大鼠均喂養10 d，采用脊髓打擊造模方法，先用2%烏拉他按7 ml/kg腹腔內麻醉，成功后將大鼠俯臥在手術臺上，以胸12為中心去除大鼠毛發，常規消毒鋪巾，取后正中切口，切開皮膚約3 cm，暴露出棘突和椎板咬除后暴露硬膜囊，在硬膜表面放置一曲度和表面一致，面積約為0.5 cm的墊片，將玻璃墊片垂直放置在墊片上，然后將12 g克氏針在玻璃墊片引導下從約6 cm處垂直落下，打擊墊片，以大鼠雙下肢劇烈抽搐為有效打擊，取出墊片后棉片壓迫止血，縫合后無菌敷料包扎，術后青霉素80萬U肌肉注射，1次/d，連續1 w預防感染。

模型對照組以10 ml/kg胃內灌注0.9%氯化鈉注射液，2次/d，連續2 w。激素組以5 mg/kg向靜脈內注射地塞米松，2次/d，連續2 w。針刺聯合補陽還五湯組則以1∶200 ml生理鹽水稀釋后配制灌胃液，按10 ml/kg灌胃，2次/d，連續2 w；選22-24號針刺針為電極，在脊髓損傷平面的上下各一個節段的夾脊穴分別刺入2對針刺針針尖斜刺入脊柱方向，對L5-S1損傷者遠側電極針可自骶裂孔連續刺入，1次/d，每次30 min，2 w為1個療程。

1.3實驗試劑方法采用酶聯免疫吸附檢測法檢測血清學指標基質衍生因子(SDF)-1和血清髓鞘堿性蛋白(MBP)，分別在動物損傷后3、7、14 d取腹主動脈血后置于4℃冰箱內2 h，凝固離心后放置在離心機上經1 500 r/min離心15 min，分離出血清后置于-80℃冰箱內保存，檢測方法嚴格按照說明書步驟進行操作。

1.4統計學處理采用SPSS16.0軟件行方差分析。

2　結　果

2.1損傷后3組血清學指標MBP水平比較模型對照組損傷后隨著時間推移MBP水平均升高，而激素組、針刺聯合補陽還五湯組則逐漸下降。模型對照組在損傷后3、7 d MBP水平明顯低于激素組和針刺聯合補陽還五湯組，14 d MBP水平明顯高于激素組和針刺聯合補陽還五湯組(P<0.05)，激素組和針刺聯合補陽還五湯組損傷后3、7、14 d MBP水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2損傷后3組血清學指標SDF-1水平比較3組損傷后隨著時間推移SDF-1水平均下降，其中模型對照組最高，針刺聯合補陽還五湯組最低。模型對照組損傷后3、7、14 d SDF-1水平明顯高于激素組、針刺聯合補陽還五湯組(P<0.05)，激素組和針刺聯合補陽還五湯組損傷后3、7、14 d SDF-1水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

與模型對照組比較：1)P<0.05

3　討　論

在中樞神經系統中，髓鞘蛋白質是由MBP等組成的，其占蛋白質總量的30%左右〔2〕，該物質位于髓鞘多層膜結構的漿面，和髓鞘脂質結合較為緊密，能維持中樞神經系統髓鞘結構和功能的穩定性，但由于血腦屏障作用，髓鞘堿性蛋白質很容易釋放到腦脊液中，只有少量會釋放到血液中。研究〔3〕稱，中樞神經出現實質性損害后，特別是出現了髓鞘脫失時，構成髓鞘主要蛋白質的髓鞘堿性蛋白就會和結合脂質出現分離現象，造成MBP劇烈升高。腦損傷后血清MBP水平和損傷嚴重程度為正相關，而MBP染色則明顯減少〔4〕。

急性脊髓損傷后神經干細胞會出現增殖、遷移和分化成神經元和膠質細胞，而其中內源性神經干細胞則有修復損傷脊髓作用。研究〔5，6〕稱，SDF-1在小腦中能調節突觸傳遞作用，在成年大鼠損傷脊髓區其在損傷后2 h則會出現下降趨勢，這提示其對神經具有可塑性和修復作用。

中醫將急性脊髓損傷辨證屬“痿證”范圍。由于外傷損傷督脈，導致瘀血阻滯不通，久則使病人元氣敗傷，或外感熱邪，耗傷津液，日久肝腎或腎督虧虛所致。其病位在督脈為主，與肺、肝、腎有關，其病性，早期以實證為主，晚期多為虛證〔7〕。中醫針刺抗脊髓損傷的機制認為針刺抗脊髓損傷的作用可能與針刺改善患病部位的微循環和組織的新陳代謝，減輕受損組織的水腫和脊髓神經的壓迫有關，同時，針刺可反射性地調節大腦和脊髓相應神經的細胞功能，提高脊神經細胞對病變造成的壓迫、缺氧等耐受性，也屬針刺治療脊髓損傷機制〔8，9〕。

補陽還五湯具有補氣活血、疏通經絡的功效，其中君藥味黃芪，有補益脾胃，促使氣血運行通暢，瘀祛絡通作用；臣藥為當歸，具有活血養血功效，加赤芍、桃仁、紅花等為佐藥，有活血祛瘀作用，全方優勢是大量補氣藥和少量活血藥物相配合，氣行則血行，活血不傷正。而從現代藥理學上看，該中藥方劑能改善微循環，能改善血液流變學性質，抗動脈硬化，能促進組織修復和再生，抑制膠原纖維合成，能增強免疫代謝功能，增加組織細胞興奮性，可促進內源性神經干細胞生長、存活和向神經元分紅，促使神經功能恢復正常。研究〔10，11〕稱，補陽還五湯能促進大鼠海馬低糖低氧腦損傷作用，能誘導骨髓干細胞向神經細胞分化，改善腦損傷后微環境，能降低SDF-1含量從而促進細胞增殖和再生。研究〔12，13〕證實，其對脊髓損傷有恢復和促進作用，而其機制可能是能促進軸突再生；能抑制脂質過氧化作用；能抑制細胞死亡，能保護神經功能；能降低血小板活化因子含量，能抑制水通道蛋白-4表達，改善損傷后缺血和炎癥反應。

本研究結果說明針刺聯合補陽還五湯能改善脊髓損傷功能，能促進脊髓損傷后神經再生和康復，可作為臨床上手術治療后的輔助治療方法之一。

1石繼祥，曹成福，紀斌，等.補陽還五湯對急性脊髓損傷大鼠神經功能康復作用的研究〔J〕.臨床和實驗醫學雜志，2012；11(21)：1684-6.

2陳建良，張龍君，王水橋，等.補陽還五湯加味合甲基強的松龍治療急性脊髓損傷16例〔J〕.浙江中醫雜志，2013；45(2)：125.

3侯兆陽，陳哲，魏家森，等.補陽還五湯對急性脊髓損傷模型大鼠神經細胞凋亡的影響〔J〕.浙江中西醫結合雜志，2015；5(1)：8-11，106.

4Inada T，Takahashi H，Yamazaki M，etal.Multicenter prospective nonrandomized controlled clinical trial to prove neurotherapeutic effects of granulocyte colony-stimulating factor for acute spinal cord injury：analyses of follow-up cases after at least 1 year〔J〕.Spine，2014；39(3)：213-9.

5彭祖年，姚曉勃.補陽還五湯對大鼠脊髓損傷后神經功能影響的實驗研究〔J〕.中醫藥導報，2012；14(5)：109-10.

6李保林，何洪陽，鄭重，等.加味補陽還五湯治療急性脊髓損傷的實驗研究〔J〕.中醫正骨，2011；13(6)：3-4.

7柯曉華，葛杜鵑，王文春，等.運動點電針對急性脊髓損傷大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和降鈣素基因相關肽表達的影響〔J〕.中國康復醫學雜志，2014；29(10)：913-7.

8徐斌，侯顯濤，于志海，等.一例犬急性脊髓損傷的針刺治療體會〔J〕.山東畜牧獸醫，2015；(2)：37-7，38.

9馬睿杰，孫連珠，張柳娟，等.電針結合減重步行訓練對急性脊髓損傷大鼠巢蛋白和神經生長因子表達的影響〔J〕.中國康復醫學雜志，2015；30(6)：532-7.

10Zamarioli A，Battaglino RA，Morse LR，etal.Standing frame and electrical stimulation therapies partially preserve bone strength in a rodent model of acute spinal cord injury〔J〕.Am J Physical Med Rehabil，2013；92(5)：402-10.

11周葉軍，王興中.補氣活血通絡中藥治療急性脊髓損傷實驗研究〔J〕.浙江中醫雜志，2012；47(3)：208-10.

12趙永青，黃長勝，孫叢曉，等.脊復康對急性脊髓損傷大鼠行為影響的觀察〔J〕.中國骨傷，2013；16(4)：213-6.

13張敏，柴勇，楊成，等.補陽還五湯對大鼠脊髓損傷后移植神經干細胞存活、增殖與遷移的影響〔J〕.神經解剖學雜志，2011；27(3)：326-30.