膜性腎病患者人類白細胞抗原-DP基因多態性與黃葵膠囊療效的關系

楊鳳文　陳素枝　藏倩男　袁國棟　檀金川　

(河北省中醫院腎病科，河北　石家莊　050011)

1天津中醫藥大學2河北醫科大學

膜性腎病(MN)病理主要表現為在腎小球上皮下沉積大量免疫復合物，而臨床主要表現為無癥狀的蛋白尿〔1〕。流行病學調查顯示，過半的MN患者會發生腎功能惡化，急需及時、規范、合理的治療。MN的具體發病機制尚未完全清楚〔2〕。近年來，中成藥對MN病的治療效果越來越受到重視。其中，黃葵膠囊是國內研究較多的一種中成藥〔3〕。現有研究發現，黃葵膠囊對MN患者的療效具有遺傳差異性，提示機體遺傳因素導致黃葵膠囊治療的個體差異〔4〕。人類白細胞抗原(HLA)Ⅱ類基因是迄今為止研究最多的人類遺傳因素之一，主要分為HLA-DQ、DR、DP三個亞型〔5〕。本課題組前期研究發現，HLA-DP基因rs3077位點多態性與膜性遺傳的發病風險存在關聯，且對MN患者的腎功能也存在影響〔6〕。本研究探討MN患者HLA-DP基因rs3077位點多態性與黃葵膠囊治療MN療效之間的關系。

1　對象與方法

1.1研究對象本研究獲河北省中醫院倫理委員會的批準。研究對象均為河北省中醫院收治且病理學診斷為MN的患者，共計139例。入選標準：①患者均符合Ehrenreich-churg MN的診斷標準；②年齡18～70歲；③漢族；④自且確保完成實驗過程。排除標準：①其他腎臟相關疾??；②妊娠或哺乳婦女；③心、腦、血管、腫瘤等嚴重原發性疾病；④未能堅持完成整個實驗者。

1.2治療方案所有研究對象口服黃葵膠囊治療(生產企業：蘇中藥業集團股份有限公司，批準文號：國藥準字Z19990040)，5粒/次，3次/d，治療周期為8 w。治療前后觀察指標包括24 h尿蛋白、血清肌酐和血清白蛋白。按照MN療效標準，完全緩解：尿蛋白量<0.3 g/d，血清白蛋白正常68例為完全緩解組。部分緩解：尿蛋白量0.3～2.9 g/d，血清白蛋白≥30 g/L 39例為部分緩解組。此兩組為有效組。無效：未能達到上述緩解標準32例為無效組。

1.3DNA提取和HLA-DP基因rs3077位點分型采集研究對象外周靜脈血5 ml，通過酚-氯仿法提取細胞DNA。運用ABI公司設計的TaqMan-MGB熒光探針實時定量聚合酶鏈反應(PCR)法檢測rs3077位點基因型。探針和引物均由南京驥驁生物技術公司設計，探針序列為P-C：FAM-AAACTACCCCAGTGGC-MGBP-T：HEX-AAACTACTCCAGTGGCT-MGB，引物序列為F：TCAGCTTTTCTTCTCACTTCATGTG；R：GAGCTTGAAG-GGTCAGCAATT。反應在ABI 7900 PCR儀中進行，采用SDS2.3軟件讀取檢測數據。

1.4統計分析應用SPSS17.0軟件進行Logistic回歸分析、方差分析及χ2檢驗。

2　結　果

2.1不同療效組別HLA-DP基因rs3077位點基因型分布情況完全緩解組中GG基因型分布低于部分緩解組，部分緩解組中GG基因型分布低于無效組。rs3077位點AA基因型在無效組中的分布顯著低于有效組(OR=0.19，95%CI=0.04～0.90)；rs3077基因型在完全緩解組和部分緩解組中分布差異無統計學意義(OR=0.21，95%CI=0.21～1.16)。見表1。

2.2不同rs3077位點基因型組別中各項血生化指標的分布不同rs3077位點基因型組別中24 h尿蛋白的分布水平差異有統計學意義(P=0.04)，血肌酐和血清白蛋白在不同rs3077位點基因型組別中分布差異無統計學意義(P均>0.05)。見表2。

2.3不同rs3077位點基因型組別中不良反應情況25例發生不良反應(GG 5例、GA 14例、AA 6例)，主要表現為胃腸道反應，肺部感染反應等。不良反應個體在不同rs3077位點基因型組別中(GG 46例、GA 51例、AA17例)差異無統計學意義(χ2=3.89，P=0.11)。

表1　不同療效組別HLA-DP基因rs3077位點基因型分布情況〔n(%)〕

1)為完全緩解組+部分緩解組vs無效組；2)為完全緩解組vs部分緩解組

表2　不同基因型組別中血生化指標分布

3　討　論

周勁峰等〔7〕最早探討了HLA-DP位點等位基因多態性對鼻咽癌發病風險的影響，然而未能發現HLA-DP位點等位基因多態性與鼻咽癌發病存在關聯。在一項日本學者開展的全基因組關聯分析(GWAS)研究中發現，HLA-DP基因rs3077位點多態性與肝細胞癌的發病風險有關〔5〕。張凱等〔8〕在北方漢族人群中發現，rs3077可能是女性宮頸癌的易感性位點。本課題組前期研究發現，HLA-DP基因rs3077位點多態性與MN發病風險存在關聯〔6〕。

黃葵膠囊具有抗濕、消炎、保護腎小管上皮細胞等功能。臨床上，黃葵膠囊廣泛應用于腎臟相關疾病〔9〕。本研究結果發現，HLA-DP基因rs3077位點多態性可能與黃葵膠囊治療MN的療效有關。本文提示攜帶AA基因型的患者黃葵膠囊治療效果較好。攜帶AA基因型的MN患者最終治療效果較好。黃葵膠囊的主要成分總黃酮元素，其可以抑制濕熱型慢性炎癥反應，從而抑制機體免疫反應〔10〕。攜帶AA基因型的個體HLA-DP mRNA表達較少，從而削弱了HLA分子在固體免疫和適應性免疫方面的功能〔11〕。因此，抑制機體免疫可能是黃葵膠囊和rs3077位點AA基因型共同作用于機體的結合點，從而發揮聯合作用。

本研究在該領域尚屬首次，也存在一些不足，如本研究樣本量不夠多，且研究對象局限于本院，不可避免存在選擇偏移，因此，還需進一步擴大樣本量，在其他人群中進行驗證；此外，rs3077位點位于HLA-DP基因3′-非編碼區，不能排除該區域其他位點也可能影響黃葵膠囊治療MN的療效。

1Grupper A,Cornell L,Lorenz E,etal.Recurrent membranous nephropathy(mn) post-kidney transplant(ktx).treatment and long term implications〔J〕.Am J Transplant,2014;14:97-8.

2丁小強,劉春鳳.特發性膜性腎病研究進展〔J〕.中國實用內科雜志,2011;31(2):108-12.

3譚富媛,汪衛.黃葵膠囊治療難治性膜性腎病的臨床療效觀察〔J〕.中國中西醫結合腎病雜志,2010;11(9):819-20.

4胡桂才,黃蘭,趙亞娟,等.黃葵膠囊對特發性膜性腎病患者 ET-1 及 PAI 的臨床研究〔J〕.中國中西醫結合腎病雜志,2012;13(4):346-7.

5Kamatani Y,Wattanapokayakit S,Ochi H,etal.A genome-wide association study identifies variants in the HLA-DP locus associated with chronic hepatitis B in Asians〔J〕.Nature Genetics,2009;41(5):591-5.

6楊鳳文,馮忖,陳文軍,等.人類白細胞抗原DP基因多態性與特發性膜性腎病遺傳易感性研究〔J〕.現代預防醫學,2017;44(11):2108-12.

7周勁峰,郭實士,余平.湖南漢族人群 HLA-DP,-DQ 位點等位基因多態性與鼻咽癌的相關性〔J〕.中華醫學遺傳學雜志,2003;20(3):262-4.

8張凱,孫萍,郭蘭偉,等.中國北方漢族女性 HLA-DP/DQ 基因多態性與宮頸癌易感性的關聯研究〔J〕.中國腫瘤,2013;22(6):442-7.

9李鑫,蔡蘭英,黨毓起.黃葵膠囊聯合用藥治療腎性蛋白尿的臨床研究進展〔J〕.中國現代醫藥雜志,2014;16(8):109-12.

10徐麗云.黃葵膠囊在慢性腎炎治療中的研究新進展〔J〕.醫學理論與實踐,2015;28(19):2605-6.

11O′brien TR,Kohaar I,Pfeiffer RM,etal.Risk alleles for chronic hepatitis B are associated with decreased mRNA expression of HLA-DPA1 and HLA-DPB1 in normal human liver〔J〕.Genes Immun,2011;12(6):428.