自擬耳復(fù)康口服液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)的影響＊

劉曉斌，郝少君，陳維亮，孫有樹(shù)，王紅宇，郭俊毅，管志江，張正臣

自擬耳復(fù)康口服液由人參、紅花、酸棗仁、骨碎補(bǔ)、路路通、石菖蒲、枸杞、麥冬等八味藥組成；人參：微苦性溫，主補(bǔ)五臟氣血，正氣足，外邪祛也。紅花：辛溫入肝腎，活血化瘀，瘀行則血活。人參、紅花補(bǔ)氣、活血化瘀為君；酸棗仁：甘平微酸，入肝脾心臟經(jīng)，均補(bǔ)五藏中氣則耳聰目明，為臣藥。骨碎補(bǔ)：味苦性溫，入肝腎二經(jīng)，肝開(kāi)竅于目，腎寓竅于耳，肝腎足則耳聰目明，路路通：味苦性平，入肝腎，真性大能通行十二經(jīng)，石菖蒲：辛，微溫，出音聲，通九竅，九竅通靈故使耳聰目明，骨碎補(bǔ)、路路通、石菖蒲共為佐藥；枸杞：甘平微寒，滋補(bǔ)肝腎真陰，強(qiáng)筋骨而壯陽(yáng)，有滋陰補(bǔ)陽(yáng)之功，麥冬：微苦，寒，滋養(yǎng)胃陰，脾腎。枸杞、麥冬共為使藥。諸藥合用具有補(bǔ)氣，活血化瘀，通脈養(yǎng)心，通九竅使耳聰目明。用于耳鳴、耳聾等。

根據(jù)耳鳴和耳聾病“氣虛血瘀”病機(jī)，宗“標(biāo)本兼治”的治則進(jìn)行組方，該方用藥精當(dāng)，配伍嚴(yán)謹(jǐn)，共奏補(bǔ)氣行血、活血化瘀、通脈搜絡(luò)養(yǎng)心，通九竅之功。與名方補(bǔ)陽(yáng)還五湯比較，有同“功”異曲之妙。為驗(yàn)證其作用、并探討其作用特點(diǎn)，筆者觀察了耳復(fù)康口服液對(duì)腎上腺素致急性血瘀癥小鼠微循環(huán)障礙模型細(xì)靜脈及細(xì)動(dòng)脈的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 KM雌、雄性小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：37009200001779。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 耳復(fù)康口服液，生產(chǎn)廠家：中國(guó)人民解放軍第371中心醫(yī)院，生產(chǎn)批號(hào)：20150706。腦得生片，生產(chǎn)廠家：廣東國(guó)醫(yī)堂制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：151101。生理鹽水，河南雙鶴華利藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：c215123103-2。水合氯醛，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)：20151014。鹽酸腎上腺素注射液，遂成藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：1507252。香柏油，中國(guó)上海懿洋儀器有限公司，批號(hào)：20150403。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 （1）JM 1000電子秤，余姚記銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司；（2）AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；（3）BI-2000圖像分析系統(tǒng)，成都泰盟科學(xué)儀器有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 分組及給藥［1］取健康小鼠60只按體重大小隨機(jī)均勻分成5組，即空白組，腦得生片，大、中、小劑量耳復(fù)康口服液組，每組12只。空白組給予生理鹽水，腦得生片組給予腦得生片（1.35 g/kg，相當(dāng)于臨床劑量的15倍），大劑量耳復(fù)康口服液組（30 ml/kg，相當(dāng)于臨床劑量的30倍），中劑量耳復(fù)康口服液組（15 ml/kg，相當(dāng)于臨床劑量的15倍）、小劑量耳復(fù)康口服液組（7.5 ml/kg，相當(dāng)于臨床劑量的7.5倍），給藥1次/d，連續(xù)給藥7 d，于第7天早上給藥1 h（禁食不禁水12 h）后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 對(duì)正常小鼠耳廓微循環(huán)的作用 用10%的水合氯醛按0.03 ml/10 g給小鼠腹腔注射麻醉，用小剪刀剪去小鼠耳廓上的細(xì)毛，將麻醉好的小鼠腹部向下固定在小鼠觀察臺(tái)上，調(diào)節(jié)耳托高度，使小鼠的耳廓平整地展開(kāi)在耳托上，并滴加1～2滴香柏油在其耳廓上，然后將觀察臺(tái)置于顯微鏡的載物臺(tái)上，用全自動(dòng)圖像分析儀觀察各組小鼠耳廓微動(dòng)脈（A）、微靜脈（V）管徑［2］。調(diào)節(jié)視野范圍，使正常小鼠耳殼微循環(huán)情況相似。

1.4.3 對(duì)急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)的影響 各組小鼠測(cè)定給藥后小鼠耳廓微動(dòng)脈、微靜脈管徑后，尾靜脈注射鹽酸腎上腺素注射液（10 mg/kg）前后，分別觀察各小鼠耳廓微動(dòng)脈（A）、微靜脈（V）管徑［3］。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)分析用SPSS 17.0醫(yī)用統(tǒng)計(jì)包進(jìn)行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，以 P＜005 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 耳復(fù)康口服液對(duì)正常小鼠耳廓微循環(huán)的影響從表1可看出，與空白組相比，大、中劑量耳復(fù)康口服液組及腦得生組對(duì)正常小鼠耳廓微靜脈管徑有不同程度地?cái)U(kuò)張，而小劑量耳復(fù)康口服液組對(duì)正常小鼠耳廓微靜脈管徑及大中小劑量耳復(fù)康口服液組及腦得生組對(duì)正常小鼠耳廓微動(dòng)脈管徑有不同程度的收縮，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說(shuō)明耳復(fù)康口服液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)無(wú)影響。

2.2 耳復(fù)康口服液對(duì)急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)的影響 從表2可知，與腎上腺素前相比，空白組小鼠耳廓微靜脈管徑、微動(dòng)脈管徑的減少，抑制血液流速的減慢，說(shuō)明急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)造模成功。與模型組相比，大劑量耳復(fù)康口服液組可顯著對(duì)抗腎上腺素所致小鼠耳殼細(xì)靜脈管徑的收縮（P＜0.01），中劑量耳復(fù)康口服液組和腦得生組可明顯對(duì)抗腎上腺素所致小鼠耳殼細(xì)靜脈管徑的收縮（P＜0.05）；大、中、小劑量耳復(fù)康口服液組和腦得生組均可顯著對(duì)抗腎上腺素所致小鼠耳廓細(xì)動(dòng)脈管徑的收縮（P＜0.01）。

表1 耳復(fù)康口服液對(duì)正常小鼠微循環(huán)障礙模型細(xì)靜脈的影響

3 討論

血瘀癥現(xiàn)代臨床病理學(xué)表現(xiàn)主要為體循環(huán)和微循環(huán)障礙，該文主要觀察微循環(huán)。研究微循環(huán)的意義在于可從微觀角度更加深入地了解生命活動(dòng)，可進(jìn)一步地認(rèn)識(shí)到發(fā)病的機(jī)制，開(kāi)展疾病防、診、治的研究具有重要意義，同時(shí)可全面分析病情、預(yù)后估計(jì)、提高臨床療效等。而微循環(huán)是維持組織正常功能及組織代謝的保證也在機(jī)體局部血液供應(yīng)中起重要的作用［4］。評(píng)價(jià)微循環(huán)可通過(guò)觀察微循環(huán)的3個(gè)指標(biāo)，即微血管管徑、毛細(xì)管網(wǎng)交點(diǎn)計(jì)數(shù)、微血管流速［5］的變化。實(shí)驗(yàn)觀察了微血管管徑，即微靜脈和微動(dòng)脈管徑。

腎上腺素兼有α受體和β受體激動(dòng)作用，皮膚、黏膜及腹腔內(nèi)臟血管尤其是微動(dòng)脈和微靜脈分布著大量的 α 受體［6，7］。 注射腎上腺素后，可與其結(jié)合后，激活了與磷脂酶相連的鳥(niǎo)苷酸調(diào)節(jié)蛋白，形成α-鳥(niǎo)苷三磷酸，激活磷脂酶C，水解膜磷脂中的磷脂酰肌醇二磷酸，生成肌醇三磷酸和二酰甘油。促使細(xì)胞內(nèi)貯存鈣釋放為游離鈣，胞質(zhì)鈣濃度增加，激活鈣依賴性蛋白激酶，使得底物磷酸化，進(jìn)而產(chǎn)生縮血管的作用，即微循環(huán)障礙模型［8，9］。 該實(shí)驗(yàn)中小鼠尾靜脈注射腎上腺素后，局部微血管舒縮功能紊亂導(dǎo)致微循環(huán)障礙。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，耳復(fù)康口服液對(duì)正常正常小鼠微靜脈、微動(dòng)脈管徑無(wú)明顯作用，說(shuō)明耳復(fù)康口服液對(duì)小鼠耳廓微循環(huán)實(shí)驗(yàn)無(wú)影響。耳復(fù)康能抑制急性血瘀癥小鼠耳廓微靜脈、微動(dòng)脈管徑的縮小，抑制血液流速的減慢，能有效緩解腎上腺素導(dǎo)致的急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)障礙。

耳復(fù)康口服液臨床主要用于耳鳴、耳聾及氣虛血瘀性中風(fēng)等癥，療效較好，耳鳴和耳聾是耳鼻咽喉—頭頸外科常見(jiàn)疾病和癥狀，耳鳴和耳聾的病因主要和病毒感染，微循環(huán)障礙，神經(jīng)本身發(fā)生疾病等有關(guān)［10］。治宜活血化瘀、祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)通絡(luò)之法。耳復(fù)康口服液能改善急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)障礙，提示了耳復(fù)康口服液具有活血化淤，改善微循環(huán)障礙的作用，是耳復(fù)康口服液治療耳鳴、耳聾的機(jī)制之一，從而為其臨床治療耳鳴、耳聾進(jìn)一步提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

（志謝 本實(shí)驗(yàn)在河南中醫(yī)藥大學(xué)苗明三教授指導(dǎo)下完成，特此致謝！）

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［2017－11－30 收稿，2017－12－27 修回］