高鹽飲食對健康人和高血壓患者血漿血管內皮生長因子C水平的影響及其與血壓的相關性研究

鞠文浩，劉金波，趙紅薇，周迎燕，王宏宇

人體的鈉鹽總量和細胞外液容量關系密切，鈉鹽儲存在體液里，鈉鹽的量主要受飲食攝入和腎臟排泄的影響。腎排鈉的特點：多攝多排，少攝少排。因此細胞外液的滲透壓是穩定的，過多的組織間液的鈉鹽流入血液，通過腎臟清除[1]。但是最近的動物實驗發現，存在無水儲存的鈉鹽。在組織間液內，鈉鹽通過結合陰離子的蛋白聚糖和糖胺聚糖，儲存在皮下的組織間質腔室內，這部分鈉鹽不需要等體積的水[2,3]。進一步研究發現，這部分鈉鹽造成的滲透壓力，使巨噬細胞聚集，促進其分泌血管內皮生長因子-C（VEGF-C），VEGF-C 進一步促進血管新生和內皮型一氧化氮（eNOS）的表達增加，部分緩解血壓升高。如果抑制巨噬細胞-VEGF-C-血管新生這條信號通路，高鹽飲食就會導致血壓升高[4-7]。另有研究發現，頑固性高血壓患者血漿中VEGF-C水平也升高[8]。這些發現都提示，在人的鈉鹽代謝中也存在一種腎外調節機制，即巨噬細胞-VEGF-C-血管新生信號通路，它可能通過調控鈉鹽，進一步調控血壓[9-11]。因此，血漿中VEGF-C水平和高鹽飲食可能存在相關性，高鹽飲食會使血漿中VEGF-C水平升高。本研究在原發性高血壓患者中進一步探討血漿VEGF-C水平與血壓的相關性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

北京大學首鋼醫院血管醫學中2013-2014年度住院的原發性高血壓患者 75例（高血壓組）和同期體檢健康者98例（對照組）。按照《中國高血壓防治指南2010》定義，收縮壓≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒張壓≥90 mmHg；既往有高血壓病史，2周內服用降壓藥物，體檢時血壓＜140/90 mmHg，也診斷為高血壓。排除冠心病、糖尿病、腦梗死、心力衰竭、肝腎功能異常、全身炎癥反應、感染性疾病、癌癥患者。

1.2 研究方法

血壓的測定和平均動脈壓的計算方法：按照國際通用的測量方法和質量控制規范進行，使用經過校準的水銀血壓計，在安靜狀態下測量。連續測量兩次，每次間隔2 min，取兩次結果的平均值。平均動脈壓=舒張壓+1/3脈壓。

食鹽攝入量評估方法：通過量化食物頻率法（SALTFFQ）獲得。調查對象計算得出的食鹽攝入量包括在家烹飪食物和在外就餐的食用鹽兩部分的總和[12]。

頸-股脈搏波傳導速度（CF-PWV）的測定：應用動脈硬化檢測儀器Compliar SP（r），受檢者采取平臥位，壓力探頭分別置于頸動脈及股動脈搏動點，取得最佳波形，并檢測兩點間的距離，儀器自動計算CF-PWV。

實驗室檢查：取空腹靜脈血，用EDTA抗凝，應用自動分析儀（HITACHI-7170）檢測空腹血糖（FBG）、血肌酐（CCr）、血尿酸（UA）、血總膽固醇 （TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。

血漿VEGF-C的測定：（1）試劑盒和儀器：VEGF-C（ELISA）試劑盒（購自美國R&D公司），測量吸光度的酶標儀為550型（美國BIO-RAD公司）。（2）檢測方法：-80℃凍存樣品復溫。以試劑盒提供的標準品繪制標準曲線，每批檢測設空白、陰性對照各 2 孔。嚴格按照說明書進行操作。在酶標分析儀上 450 nm 處讀取吸光度值，每孔測定3次，取均值。結果計算：參照試劑盒操作步驟與方法繪制標準曲線，并求濃度與吸光度的回歸方程，依標準曲線和回歸方程確定各樣品 VEGF-C 含量。（3）血漿VEGF-C水平的正常參考值范圍:109.0～7 000.0 pg/ml。

一般病史的采集：收集受試者的一般資料如年齡、性別、體重指數（BMI）、收縮壓、舒張壓、脈壓、平均動脈壓、心率、血管相關的病史（冠心病、腦梗死、糖尿病、高脂血癥、下肢動脈疾病） 等。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0統計軟件進行統計檢驗。兩組間性別構成比較采用χ2檢驗。計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗。相關性分析采用Spearman相關性檢驗，P＜0.05（雙側）認為具有統計學意義。

2 結果

兩組受試者的基本臨床資料比較（表1）：高血壓組與對照組相比，血漿VEGF-C水平升高，差異有統計學意義[（3 940.8±1 141.1）pg/ml vs （2 938.0±987.0）pg/ml，P＜0.001],同時兩組在年齡、BMI、收縮壓、舒張壓、脈壓、平均動脈壓、CFPWV上的差異也均有統計學意義（P均＜0.05）。

表1 兩組受試者的基本臨床資料比較（±s）

表1 兩組受試者的基本臨床資料比較（±s）

注：TC：總膽固醇； HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯；CF-PWV：頸-股動脈脈搏傳導速度；VEGF-C：血管內皮生長因子。1 mmHg=0.133 kPa

年齡 (歲) 57.0±8.0 60.4±9.4 0.013 CF-PWV (m/s) 9.6±1.5 10.7±1.9 ＜0.001

高血壓組中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（表2）：高血壓組中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組相比，血漿VEGF-C水平升高，差異有統計學意義[（4 208.8±113.1）pg/ml vs （3 515.8±1 070.1）pg/ml，P=0.009]，同時兩亞組在年齡、收縮壓、舒張壓、脈壓上的差異也均有統計學意義（P均＜0.05）。

表2 高血壓組患者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

表2 高血壓組患者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

注：TC：總膽固醇； HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯；CF-PWV：頸-股動脈脈搏傳導速度；VEGF-C：血管內皮生長因子。1 mmHg=0.133 kPa

項目 低鹽飲食亞組(n=29)高鹽飲食亞組(n=46) P值年齡 (歲) 63.9±9.3 58.1±8.8 0.009性別 (男/女，例) 9/20 21/25 0.208體重指數 (kg/m2) 24.8±3.1 26.0±3.0 0.089空腹血糖 (mmol/L) 5.3±0.6 5.2±0.5 0.686 TC (mmol/L) 4.7±1.5 4.9±1.1 0.575 HDL-C (mmol/L) 1.2±0.2 1.2±0.3 0.894 LDL-C (mmol/L) 3.1±1.0 3.1±0.7 0.994 TG (mmol/L) 1.7±0.9 1.7±1.3 0.768肌酐清除率 (ml/min) 89.9±21.7 101.7±31.5 0.080血尿酸 (μmol/L) 291.6±57.2 311.3±83.0 0.265血鈉離子 (mmol/L) 141.0±2.4 140.9±2.8 0.838血鉀離子 (mmol/L) 4.0±0.4 4.1±0.4 0.409血氯離子 (mmol/L) 104.8±3.0 104.5±3.0 0.680收縮壓 (mmHg) 134.6±13.3 146.8±12.6 ＜0.001舒張壓 (mmHg) 81.2±8.2 89.7±7.9 ＜0.001脈壓 (mmHg) 53.4±11.0 57.1±12.5 ＜0.001平均動脈壓 (mmHg) 99.0±8.8 108.7±7.7 0.195心率 (次/min) 67.1±8.6 65.1±10.5 0.388 CF-PWV (m/s) 10.6±1.3 10.7±2.3 0.972 VEGF-C (pg/ml) 3 515.8±1 070.1 4 208.8±113.1 0.009

對照組中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（表3）：對照組中高鹽飲食亞組血漿VEGF-C水平高于低鹽飲食亞組，差異有統計學意義[（3 158.7±917.2）pg/ml vs （2 655.7±1 011.3）pg/ml，P=0.012]，兩亞組在年齡、BMI、CCr的差異也均有統計學意義（P均＜0.05）。

平均動脈壓與血漿VEGF-C水平的相關性分析（表4）：Spearman相關分析顯示，在所有入組受試者中，平均動脈壓與 BMI（r=0.290，P＜0.001）、LDL-C（r=0.122，P=0.018）、TG（r=0.230，P=0.002）、VEGF-C（r=0.209，P＜0.001）、CFPWV（r=0.106，P＜0.001）、鈉鹽攝入量（r=0.274，P＜0.001）呈正相關，與HDL-C呈負相關(r=-1.777，P=0.020)。 進 一 步 校 正 BMI、LDL-C、TG、CF-PWV、 鈉 鹽攝入量后，平均動脈壓仍與VEGF-C呈 正 相 關 (r=0.536，P＜0.001)。在高血壓組中，平均動脈壓與CCr （r=0.236，P=0.041）、鈉鹽攝入量（r=0.534，P＜0.001）、VEGF-C（r=0.617，P＜0.001）呈正相關；進一步校正CCr、鈉鹽攝入量后，平均動脈壓仍與VEGF-C呈正相關（r=0.546，P=0.002）。在對照組中，平均動脈壓與BMI（r=0.227，P=0.025）、FBG（r=0.212，P＜0.037）、TG（r=0.221，P=0.030）、UA（r=0.201，P=0.048）、VEGF-C（r=0.379，P＜0.001）、CF-PWV（r=0.517，P＜0.001）呈正相關；進一步校正BMI、FBG、TG、UA、CF-PWV后，平均動脈壓仍與VEGF-C呈正相關（r=0.291，P=0.006）。

表3 對照組受試者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

表3 對照組受試者中高鹽飲食亞組與低鹽飲食亞組的基本臨床資料比較（±s）

注：TC：總膽固醇； HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯；CF-PWV：頸-股動脈脈搏傳導速度；VEGF-C：血管內皮生長因子。1 mmHg=0.133 kPa

項目 低鹽飲食亞組(n=43)高鹽飲食亞組(n=55) P值年齡 (歲) 59.3±8.6 55.3±7.1 0.012性別 (男/女，例) 14/29 21/34 0.564體重指數 (kg/m2) 23.0±3.6 24.8±3.0 0.009空腹血糖 (mmol/L) 5.1±0.4 5.1±0.6 0.699 TC (mmol/L) 4.7±0.9 5.1±1.1 0.073 HDL-C (mmol/L) 1.4±0.4 1.3±0.3 0.613 LDL-C (mmol/L) 2.9±0.7 3.2±0.8 0.107 TG (mmol/L) 1.3±0.8 1.9±2.1 0.061肌酐清除率 (ml/min) 83.4±22.5 109.1±26.1 ＜0.001血尿酸 (μmol/L) 301.3±83.9 298.3±89.5 0.871血鈉離子 (mmol/L) 140.1±2.2 140.5±2.4 0.367血鉀離子 (mmol/L) 4.0±0.3 4.0±0.3 0.634血氯離子 (mmol/L) 105.0±2.7 105.0±2.6 0.904收縮壓 (mmHg) 123.0±13.9 125.1±11.7 0.420舒張壓 (mmHg) 77.6±6.4 79.7±8.1 0.152脈壓 (mmHg) 45.4±11.3 44.5±10.0 0.677平均動脈壓 (mmHg) 92.7±8.0 93.1±15.4 0.867心率 (次/min) 65.5±9.9 67.8±12.6 0.333 CF-PWV (m/s) 9.5±1.6 9.8±1.5 0.377 VEGF-C (pg/ml) 2 655.7±1 011.3 3 158.7±917.2 0.012

表4 平均動脈壓與血漿VEGF-C水平的Spearman相關分析

3 討論

我們發現，高血壓組血漿VEGF-C水平比對照組高，且血漿VEGF-C水平受高鹽飲食的影響。在健康人群和高血壓人群中，高鹽飲食亞組的血漿VEGF-C水平均更高。在高血壓組中，與低鹽飲食亞組相比，高鹽飲食亞組的收縮壓[（146.8±12.6）mmHg vs （134.6±13.3）mmHg，P＜0.001]和舒張壓 [（89.7±7.9）mmHg vs（81.2±8.2）mmHg，P＜0.001]明顯升高；而在健康人群中，高鹽飲食對血壓的影響不大；這提示可能與高血壓患者腎外血壓調節軸（巨噬細胞-VEGF-C-血管新生）受損、血壓調節失代償有關。在健康人群中，該調節軸功能正常。

在動物試驗中，高鹽飲食干預后動物皮下的組織間質鈉鹽蓄積，滲透壓增大，糖胺聚糖含量和糖胺聚糖所帶的負電荷增加[13]。為了響應間質的高滲透壓力，巨噬細胞聚集，分泌VEGF-C，誘導eNOS表達，其結合VEGFR-2或VEGFR-3受體，促進血管新生[14-16]。隨后血管舒張，鈉鹽從組織間質中清除掉，從而調控血壓[15-17]。

健康人群經高鹽飲食干預一周后，血漿中VEGF-C水平升高，同時細胞外體積和CCr也增加，提示腎臟也參與了高鹽飲食的調節[18,19]。我們的數據顯示，在健康人群中，與低鹽飲食亞組相比，高鹽飲食亞組的CCr明顯上升，而高血壓人群經高鹽飲食干預后CCr變化不明顯；這提示可能是腎外血壓調節軸（巨噬細胞-VEGF-C-血管新生）通路和傳統的腎內鹽平衡腎滲透壓通路一起調控血壓，腎內也可能存在巨噬細胞-VEGF-C-血管新生的調節通路。

我們的研究證明，在原發性高血壓患者中，高鹽飲食對血漿中VEGF-C水平有影響，血漿VEGF-C水平和血壓存在相關性；這提示了人體腎外巨噬細胞-VEGF-C-血管新生信號通路在血壓調節中的重要作用，該通路在正常人群和高血壓患者中均發揮作用。

我們的研究存在缺陷：第一，鈉鹽攝入評估方法采取的是膳食史法，主觀性強，容易出現一些偏差和錯誤；第二，由于技術限制，我們沒有準確測定皮膚中鈉鹽的總含量和VEGF-C的表達情況。隨著技術的改善，現在用新的核磁共振技術測量皮膚中鈉鹽的含量[19]，為下一步研究奠定了基礎。

綜上所述，與健康人群相比，高血壓患者血漿VEGF-C水平升高。血漿VEGF-C水平受高鹽飲食的影響，且血漿VEGF-C水平和血壓呈正相關。VEGF-C介導的巨噬細胞-VEGF-C-血管新生這條信號通路在人體鹽平衡調節中有重要作用，未來應進一步探討VEGF-C介導的間質的電解平衡和體內穩態的相關性。

高鹽飲食在我國北方比較普遍，考慮到個體易感性，檢測某一高血壓患者是否為鹽敏感性高血壓患者是有難度的。而我們可以通過檢測血漿中VEGF-C水平，以其作為靶標，干預鹽敏感高血壓患者因高鹽飲食引起的血壓升高。

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