桔梗飲片的質(zhì)量控制研究

王船英，劉 圣，王成永

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥 230038；2.安徽醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，安徽合肥 230601；3.安徽省立醫(yī)院，安徽合肥 230001)

桔梗(Platycodon grandiflorus)是桔?？撇荼局参?，可用于治療痰多、咽痛、抗炎、鎮(zhèn)靜等。桔梗中的化學(xué)成分很多，含有大量皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、酚類(lèi)、多糖類(lèi)化合物等。其中桔梗皂苷D是主要皂苷，是其主要的有效成分，具有顯著的鎮(zhèn)咳祛痰、抗腫瘤、抗氧化及免疫增強(qiáng)作用[1]。因此，桔梗皂苷在食品、醫(yī)藥和化工領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用。但市場(chǎng)上銷(xiāo)售的桔梗飲片質(zhì)量參差不齊，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)15批桔梗飲片的質(zhì)量進(jìn)行定性定量分析并作出總結(jié)，為市場(chǎng)和企業(yè)飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考和依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 藥材、儀器與試劑

1.1.1 藥材

桔梗飲片(安徽源和堂藥業(yè)股份有限公司提供)，桔梗藥材來(lái)源安徽亳州(1-3)、太和(4-6)、渦陽(yáng)(7-9)、吉林(10-12)、撫松(13-15)。

1.1.2 儀器

硅膠G薄層板、稱(chēng)量瓶、打粉機(jī)、馬弗爐、恒溫水浴鍋、超聲清洗儀(UP-2200H型)、萬(wàn)分之一電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(PHG-9140A)、Waters1525 Binary HPLC泵、Waters2489紫外檢測(cè)器、AT-330柱溫箱。

1.1.3 試劑

桔梗皂苷D對(duì)照品(批號(hào)：11851-2016-07，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度94.0%)、桔梗對(duì)照藥材(批號(hào)：121028-201210，中國(guó)食品藥品檢定研究院)、娃哈哈純凈水、乙醇、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉、甲醇、乙腈、乙醚、濃硫酸。以上試劑，甲醇、乙腈為色譜純級(jí)別，其余為分析純。

2 水分、灰分及浸出物的測(cè)定

2.1 測(cè)定方法

水分測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則中的水分測(cè)定法第二法(烘干法)，總灰分測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則中灰分測(cè)定法，浸出物測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則中浸出物測(cè)定法(熱浸法)。

2.2 結(jié)果分析

15批飲片的水分、灰分及浸出物檢查結(jié)果見(jiàn)表1所示。

表1 15批飲片的水分、灰分及浸出物檢查結(jié)果

3 鑒別

15批飲片，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王成永教授和安徽省立醫(yī)院藥劑科主任藥師劉圣的鑒別，確認(rèn)為桔?？浦参锝酃５母稍锴衅?。

按中國(guó)藥典第一部桔梗項(xiàng)下薄層色譜鑒別的處理方法制得15批飲片的供試品溶液。另取桔梗對(duì)照藥材一份，采用同樣的方法制成對(duì)照藥材溶液。用毛細(xì)管吸取上述溶液，分別點(diǎn)于相同規(guī)格的硅膠G薄層板上，將配置好的石油醚-乙酸乙酯(7∶4)的展開(kāi)劑倒入展開(kāi)槽內(nèi)進(jìn)行展開(kāi)，晾干后用10%硫酸乙醇溶液噴灑后，晾干[2]。將薄層板放置于烘箱中105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，結(jié)果顯示：供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上有相同顏色的斑點(diǎn)(圖1)。

圖1 DZYC為桔梗對(duì)照藥材；1-15為不同批次的桔梗飲片

4 桔梗皂苷D含量的測(cè)定

4.1 色譜條件

高效液相色譜儀(Waters1525二元高壓泵，Waters2489紫外檢測(cè)器),大連依利特C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水(28∶72)，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm,流速1mL/min,柱溫30℃。

4.2 對(duì)照品的制備

精密稱(chēng)取桔梗皂苷D對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含桔梗皂苷D 1mg的溶液(1.0026 mg/mL)即得，備用。

4.3 供試品的制備

按藥典方法，制取供試品。取本品粉末(過(guò)二號(hào)篩)約2.0 g，精密加入甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻、濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25 mL，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液。用氨試液50 mL洗滌，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水50 mL洗滌，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状? mL使溶解，加硅膠0.5 g拌勻，置水浴上蒸干，加在以氯仿-甲醇(9∶1)裝好的硅膠柱(內(nèi)徑2 cm，10 g)上，以氯仿-甲醇(9∶1)50 mL洗脫，棄去洗脫液，再以氯仿-甲醇-水(60∶20∶3)100 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用氯仿-甲醇-水(60∶29∶6)100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，搖勻，即得[3]。15批供試品溶液均用此法制得。

4.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取4.2項(xiàng)對(duì)照品溶液稀釋成0.1、0.25、0.5、0.75 mg/mL不同濃度的溶液，分別取0.1、0.25、0.5、0.75、1 mg/mL溶液20 uL注入液相色譜儀，得回歸方程Y=2×106X+15618，R2=0.9992。結(jié)果表明，桔梗皂苷D在2～20 ug之間，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系(圖2)。

圖2 不同濃度的樣品溶液的線性關(guān)系

4.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取4.4項(xiàng)制取的0.1 mg/mL對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20 uL。得到桔梗皂苷D的峰面積，其RSD值為2.4%，表明儀器精密度良好。

4.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密吸取4.3項(xiàng)制取的同一供試品溶液6次，每次20 uL。其桔梗皂苷D的平均含量為1.0466 mg/g，其RSD值為1.6%。表明該方法的重復(fù)性較好。

4.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取4.3項(xiàng)同一供試品溶液20 uL，在4.1色譜條件下，在放置0、2、4、10、24 h測(cè)定桔梗皂苷D峰面積，并計(jì)算RSD值為2.0%。說(shuō)明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

4.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱(chēng)定同一批烘干至恒重的飲片6份，每份約1 g，再精確加入1mg/mL桔梗皂苷D對(duì)照品溶液1mL，按4.3制成供試品溶液，記錄峰面積，計(jì)算回收率為101.2%,RSD值為2.1%。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)回收率良好。

4.9 供試品含量測(cè)定

分別取4.3項(xiàng)制得的15批供試品溶液和對(duì)照品溶液各進(jìn)樣20 uL,在同一色譜條件下，測(cè)定出供試品桔梗皂苷D含量在0.10%～0.15%之間，均不低于國(guó)家藥典規(guī)定的0.1%的標(biāo)準(zhǔn)。桔梗皂苷D對(duì)照品和桔梗飲片的HPLC圖譜見(jiàn)圖3和圖4。

圖3 桔梗皂苷D對(duì)照品HPLC圖譜

圖4 桔梗飲片HPLC圖譜

5 結(jié)語(yǔ)

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，15批桔梗飲片的水分、灰分及浸出物和桔梗皂苷D含量均達(dá)到中國(guó)藥典2015版標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)檢查均達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)。在進(jìn)行薄層色譜鑒別時(shí)，在15版藥典基礎(chǔ)上，通過(guò)改變展開(kāi)劑等方法，獲得了更清晰、更持久的薄層色譜圖譜，取得了更佳的實(shí)驗(yàn)效果。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李盈,王舉濤,桂雙英,等.桔梗的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].食品與藥品,2016(1):72-75.

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[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[M].北京:化工出版社,2015:172.