膠原水凝膠與基質膠作為骨組織工程支架材料表面涂層修飾效果的比較研究▲

朱永佳 靳 攀 何 熠 繆志康 韋慶軍*

(1 廣西醫科大學第一附屬醫院；2 廣西生物醫藥協同創新中心，南寧市 530021)

骨缺損是骨科手術的挑戰。骨替代物，支架的作用是創造細胞微環境進而模擬體內情況，并影響著增殖、分化和凋亡等細胞過程的必要條件。天然骨組織包括羥基磷灰石(HA)和膠原蛋白。目前膠原材料已引起人們的廣泛關注且用于骨組織工程。I型膠原蛋白具有良好的生物相容性，可作為大分子藥物緩慢釋放的載體[1-2]，其制作方法包括礦化[3]、熱觸發組裝[4]、真空滲透[5]、凍干及超臨界點干燥[6]。基質膠，是一種基底膜提取物，被廣泛應用于腫瘤轉移的研究中[7]，其表面涂層可用于提高支架的成骨活性等生物學功能[8-9]，但目前針對這兩種材料的比較研究尚未有報道。

本研究通過堿性磷酸酶檢測、組織學染色以及RT-PCR檢測成骨特異性基因的表達水平比較膠原水凝膠及基質膠的效果，以此來尋找更合適的骨組織工程支架涂層修飾材料?，F報告如下。

1 材料與方法

1.1 原代成骨細胞的分離提取 3～7 d日齡SD乳鼠購自廣西醫科大學實驗動物中心，且后續操作均獲得廣西醫科大學倫理委員會批準。用頸椎脫臼法處死SD乳鼠，無菌環境下用滅菌紗布取出頂骨，浸于滅菌磷酸鹽緩沖液(PBS)中，然后用0.25%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)(北京索萊寶生物技術有限公司)在37℃消化30 min除去結締組織及骨膜。將頂骨剪成1 mm3的碎片后，用Ⅰ型膠原酶(Gibco，Thermo Fisher Scientific，Inc.，Waltham，MA，USA)37℃下孵育4 h。800 g離心5 min后，將細胞重懸于含有10%(v/v)胎牛血清(FBS，Gibco)和1%青霉素/鏈霉素溶液(青霉素100 U/mL，鏈霉素100 U/mL)的培養基中，置于37℃ 5% CO2培養箱中培養，選擇第3代細胞用于后續實驗?！?br>