基因多態性與華法林的起始給藥劑量的相關性研究

袁 璞 珺

(河南省職工醫院 鄭州 450000)

心血管內科疾病主要包括心力衰竭、心絞痛、心肌梗塞等，且心血管內科疾病往往呈現急性發作，病情發展迅速，預后較差，臨床上以重癥為主要特點。抗凝治療是栓塞類疾病非常重要的治療手段，涉及臨床多個學科[1]。目前臨床常用的抗凝藥物有肝素和華法林等傳統藥物。華法林安全范圍較小，劑量存在明顯的個體化差異。因此如何進行個體化的抗凝治療有著非常重要的臨床意義。為探討CYP2C9、VKORC1基因的突變對于個體華法林的起始給藥劑量的影響，以我院232例心血管疾病患者為研究對象，現將有關結果報道如下。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2014年1月～2016年1月收治的232例心血管疾病患者，平均分為對照組和觀察組，每組各116例。對照組男69例，女47例；年齡19～58歲，平均(48.64±2.91)歲；有吸煙史12例，有飲酒史13例，有高血壓史48例。觀察組男72例，女44例；年齡18～61歲，平均(49.87±3.05)歲；有吸煙史15例，有飲酒史19例，有高血壓史45例。兩組患者在性別、年齡、身體狀況等方面比較無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 試劑和儀器

儀器：Roche公司Light Cycler 480Realtime PCR System、Labnet離心機、Labnet恒溫金屬浴、LX-100離心機、科邁恒溫水浴鍋、DYY-6C電泳儀、Bio-Rad多功能紫外分析儀。試劑均采購于上海生工生物工程有限公司，包括DNA提取試劑盒、聚合酶鏈式反應液。

1.3 方法

實驗流程:抽取患者外周靜脈血2～3ml，加入EDTA等抗凝劑。(1)DNA提取：在生物安全柜中使用全血基因組抽提試劑盒提取患者的DNA；(2)PCR：擴增采用的系統是Roche公司Light Cycler 480 Realtime PCR System；(3)基因測序：使用限制性片段長度多態性和測序技術對患者的基因進行檢測，并利用BE-2.0基因圖象分析軟件確定患者基因分型[2]；(4)INR檢測及給藥：檢測患者華法林用藥前及用藥起始10d內每天的 INR 值。對照組初次華法林劑量為3.0mg/d，觀察組基因指導用量參考華法林國際藥理學聯盟推薦計算公式[3]。根據 INR 基線值，當日的INR值作為次日華法林用藥劑量的調整標準。患者住院用藥期間均予以均衡適量飲食；(5)數據記錄：記錄每組每日華法林劑量和 INR 檢測結果以及每位患者服藥后INR首次進入治療窗的時間和服藥起始10d內華法林的平均劑量。并隨時記錄用藥期間發生的并發癥等突發狀況，以INR達到2.0～3.0為進入治療窗標準。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 基因型影響華法林起始劑量

與對照組相比，CYP2C9*3 基因多態性的 AA型和VKORC1-1639G/A基因多態性的 AA型華法林的進入治療窗起始劑量均較低，差異具有統計學意義(P<0.05)；CYP2C9*3 基因多態性的 AC型和VKORC1-1639G/A基因多態性的 GA型華法林的進入治療窗起始劑量均較低，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 首次進入治療窗華法林使用劑量對比

組別基因型例數華法林起始劑量(mg/d)對照組1163觀察組CYP2C9?3AA902．76±0．96?AC42．64±0．58??VKORC1?1639G/AAA202．71±0．96?GA12．61±0．53??GG13．02±1．24

注：與對照組相比，*P<0.05，**P<0.05。

2.2 不良反應

相比于對照組，參考基因型治療劑量下觀察組患者的不良反應發生率較低，Fisher精確檢驗顯示P<0.05，說明差異具有統計學意義，觀察組不良反應發生率明顯降低，見表2。

表2 兩組患者不良反應比較[n,%]

組別n皮下出血牙齦出血黑便合計對照組1166(5．17)3(2．58)8(6．89)17(14．65)觀察組1162(1．72)1(0．86)2(0．17)5(4．31)

3 討論

3.1 影響華法林起始劑量的遺傳原因

本研究通過研究CYP2C9*3 基因多態性的 AA型和VKORC1-1639G/A基因多態性發現基因多態性發現基因多態性影響華法林起始用量。研究認為[4]，影響華法林劑量穩定性的相關基因主要有影響其藥代動力學、藥效動力學和影響其轉運和外排3類。CYP2C9、CYP3A4、CYP2C18等屬于第一類，VKORC1 、CYP2C9等屬于第二類，第三類則主要包括APOE4ORM1/ORM2等。其中首要的是CYP2C9與VKORC1。

3.2 個體化治療

本次研究表明，基因個體化用藥中的華法林穩定劑量普遍低于對照組，其治療療效和不良反應數據也顯著優于對照組。基因多態性是導致華法林在抗凝治療中個體差異化的最重要的原因。不同研究針對需抗凝治療的對象不同，比如心臟瓣膜置換術、房顫、深靜脈血栓，其適應證不同，所需華法林的劑量也可能不同。因此，在華法林的使用過程中應充分考量其研究間異質性。口服華法林前若能對患者進行基因檢測，并根據基因分型指導華法林的用量，將減少因反復抽血檢測INR帶來的麻煩，降低因服藥不當引起的并發癥，達到個體化用藥的目的。

目前國內的有關研究基因多態性與藥物使用，多聚集在劑量使用的研究，存在涉及基因不全面，包含因素較少等問題。盡管如此，隨著基因檢測進行藥物的指導形成趨勢，未來的個體醫療將變得更具針對性，高效和安全。

參 考 文 獻

1 洪鮮花,于峰,朱君榮.華法林個體化劑量影響因素的選取.中國醫院藥學雜志,2014,34(16):1408～1414.

2 陽麗梅,黃旭慧,王少明,等.基于CYP2C9、VKORC1及CYP4F2基因多態性的華法林給藥模型的驗證.中國醫院藥學雜志,2013,33(23):1957～1961.

3 彭娟.基因多態性對中國漢族機械瓣膜置換術后患者華法林穩態劑量的影響.中南大學,2014.

4 雷兆錦,張瑞麟,李忠東.CYP2C9基因多態性對華法林日平均劑量影響的Meta分析.臨床藥物治療雜志,2014,3:29～35.