長沙市無償獻血者血液樣本酶聯免疫檢測聯合核酸檢測HBV的結果分析

白穎　張鋼　郭咚　蔣義

[摘要] 目的 分析2017年度長沙血液中心所有無償獻血者的血液樣本HBV項目的酶聯免疫檢測聯合核酸檢測篩查結果。 方法 對該站2017年1—12月采集的159 228份血液的相應標本，先采用2種不同廠家試劑進行2遍包括HBsAg等4項感染性標志物的酶聯免疫檢測以及轉氨酶的血清學檢測，后對所有血清學檢測結果合格的進行包括HBV DNA等3項經血傳播病毒的核酸檢測。 結果 在159 228份獻血者樣本中，共3 552份樣本血清學檢測項目不合格，其中1 259份HBsAg的結果為不合格。對血清學檢測合格的155 676份樣本進行核酸檢測后，71份為HBV DNA陽性。結論 對無償獻血者的樣本采取酶聯免疫檢測和核酸檢測相結合的聯合檢測模式，使HBV的檢出率有明顯提高，有效避免因隱匿性乙肝、窗口期等因素造成的漏檢，降低輸血傳播乙肝風險，提高血站的血液質量安全。

[關鍵詞] 酶聯免疫檢測；核酸檢測；HBsAg；HBV DNA

[中圖分類號] R446.11 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）07（a）-0171-02

血液安全是血站永恒的質量主題，如何降低輸血傳播疾病風險是血站人不斷追求和持續改進的目標。我國采供血系統血液篩查的傳統檢測方法為酶聯免疫吸附試驗，雖然方法靈敏度和特異性不斷提升，但是由于窗口期感染，免疫靜默，病毒變異，隱匿性感染等原因，檢測后依然存在較高的殘余風險[1]。乙肝在我國具有高流行率，有研究表明[2]，1～59歲人群中約5.84%為HBV攜帶者。無償獻血者標本通過酶免試驗篩查血液HBsAg后，血液中HBV仍然存在較大的漏檢風險。按照國家要求，近年來該中心實施在2遍酶免試驗的基礎上，全面增加一遍核酸檢測的檢測模式?，F對該中心獻血者的HBsAg酶免檢測聯合HBV DNA核酸2017年1—12月檢測的篩查結果進行比較分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該中心采集的159 228名無償獻血者的血液標本作為研究材料。所有獻血者在獻血前經過ALT干式生化儀檢測和HBsAg、TP快速金標法檢測合格，體檢符合《獻血者健康檢查要求》（GB18467-2011）。每位獻血者留取2管含EDTA-K2抗凝劑的血液標本，各5 mL，一管用于血清學檢測，另一管還包含分離膠、無菌、無RNA酶的用于核酸檢測。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 酶免檢測試劑：HBsAg；核酸檢測試劑：HBV、HCV、HIV（1+2型）聯合試劑。所有試劑均為經過國家批批檢合格產品，且在有效期內使用。

1.2.2 儀器 酶免檢測設備：EVO全自動加樣儀（奧地利帝肯）、STAR全自動加樣儀、FAME 24/20和FAME 24/30全自動酶聯免疫后處理系統；核酸檢測設備：德國羅氏Cobas S201核酸檢測系統、上海科華核酸檢測系統，二者互為備用系統。所有設備均在校驗合格期內使用。

1.3 方法

1.3.1 血清學檢測 所有標本由不同工作人員采用兩種不同廠家試劑嚴格按照試劑說明書要求進行2次HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的酶免檢測，以及不同廠家試劑的2遍ALT項目的速率法檢測。

其中ALT>50U/L判為不合格；HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP酶免檢測S/CO值≥1.0判為有反應性，進口試劑0.7≤S/CO值≤1.0、國產試劑0.5≤S/CO值≤1.0判為灰區。2種試劑陽性/灰區，判為不合格；一種試劑陰性，另一種試劑陽性/灰區，采取雙孔復查，復查結果任意一孔為陽性/灰區即判為不合格。

1.3.2 核酸檢測 對血清學檢測結果合格的標本采用一種核酸試劑進行HBV DNA、HCV RNA、 HIV RNA（1+2型）的核酸檢測。羅氏檢測系統為6人份（167 uL/份）混樣成1份（1 mL）匯集池（pool），科華核酸檢測系統為8人份（180 μL/份）混樣成1份（1.44 mL）匯集池（pool），匯集后由該核酸檢測系統的相應儀器進行核酸提取和熒光-PCR試驗。每批試驗均設置試劑盒自帶的陰性質控、陽性質控、外部弱陽性質控，每個pool均含內對照（IC）。

匯集孔檢測為陰性，則此匯集池（pool）中所有的標本合格；匯集池（pool）檢測為陽性，則需要對此匯集池（pool）中的所有標本進行拆分試驗，拆分試驗相應標本陽性即判為不合格，陰性即判為合格。

2 結果

2.1 酶聯免疫檢測結果

該站2017年1—12月共采集159 228份獻血者的血液樣本，經過酶聯免疫檢測，共1 259份為HBsAg反應性（0.79%），其中HBsAg雙試劑反應性數為510份，HBsAg單試劑反應性數為749份。酶免檢測結果見表1。

2.2 核酸檢測結果

經過血清學檢測，所有項目不合格的總數為3 352份，所有項目合格的標本為155 676份，這些標本均做核酸檢測，共112個匯集池（pool）檢測結果呈HBV DNA反應性，經過拆分后，71例的核酸檢測結果為HBV DNA反應性（0.456‰）。核酸檢測結果見表2。

3 討論

2017年度本中心159 228份獻血者樣本的酶免檢測HBsAg陽性標本1 259例，檢出率為0.79%。而血清學檢測陰性的155 676份獻血者標本中，經過核酸檢測HBsAg陰性標本HBV DNA反應性達到了71例，HBV DNA陽性檢出率達到0.456‰，與上海、河南焦作、漯河等地文獻報道的數據接近[3-5]。證明HBV經輸血傳播的風險較高，這一方面與我國的HBV感染率高、感染基數大有關，另一方面與方法學局限性有關。即使經過兩遍酶免檢測，且酶免檢測設置了灰區，仍然存在一定程度的漏檢。因此，對于酶免檢測HBsAg陰性的標本增加核酸檢測十分必要，這樣可以更大限度地減少HBV的漏檢，降低輸血傳播乙肝風險。

乙肝的酶聯免疫檢測以HBsAg為檢測對象，有較長的窗口期。而核酸檢測技術是檢測乙肝病毒本身的DNA，窗口期較短，跟酶聯免疫檢測相比，平均可將HBV的檢測“窗口期”縮短40%[6]。同時，對于隱匿性乙肝（OBI），核酸檢測也有著十分重要的意義。有研究表明，HBV DNA檢測可降低ELISA檢測后的殘余風險73.77%，且降低的HBV的風險中的87.9%為隱匿性風險[7]。此外，核酸檢測對于病毒的免疫靜默、病毒亞型和病毒變異也能檢出[8]。值得注意的是，核酸檢測同樣也有呈現假陰性結果的情況，例如病毒載量過低的乙肝攜帶者、核酸不穩定易于降解等情況，這部分標本通常用酶免檢測HBsAg可以檢出，所以酶免檢測與核酸檢測存在方法學的互補性。因此，在當前的檢測水平下，采取酶聯免疫檢測聯合核酸檢測，可以更大限度地檢出HBV，降低漏檢風險，保障用血安全。

[作者簡介]

[1] 李雪梅，楊春茂，楊春晴，等.獻血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TPELISA檢測陽性與確證試驗的對比研究[J].中國輸血雜志，2013，26（6）：541-543.

[2] Yu Liu，Jingxing Wang，Yi Huang，et al. Molecular epidemiological study of hepatitis B virus in blood donors from five Chinese blood centers[J].Archives of Virology，2012，157（9）：1699-1707.

[3] 陸韜宏，周國平，張晰.集中化檢測后上海地區血液核酸篩查數據的回顧性分析[J].臨床輸血與檢驗，2016，18（3）：276-280.

[4] 來祝檁，韓惠云，張國平.核酸檢測HBV DNA陽性獻血者的追蹤檢測結果分析[J].中國輸血雜志，2017，30（5）：525-528.

[5] 黃丹.獻血者血液樣本核酸檢測降低經血傳播感染性疾病風險的效果分析[J].泰山醫學院學報，2017，38（9）：1043-1044.

[6] 郭超群，李運琴，來祝檁.基層血站開展血液核酸篩查的必要性及可行性分析[J].醫藥前沿，2014（9）：84-85.

[7] 曹誼，陸榮，王凱，王玲玲，等.HBsAg陰性獻血者核酸檢測結果分析及其降低HBV殘余效果研究[J].中國輸血雜志，2015，28（11）：1348-1351.

[8] 梁啟忠，程玉根.核酸檢測技術在獻血者血液篩查中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2015，36（22）：3265-3270.

（收稿日期：2018-04-10）