粉針劑無菌工藝驗證培養基模擬分裝

李惠

摘 要：想要粉針針劑車間生產線能夠對無菌注射劑進行分裝，同時能夠滿足有關的法規和無菌生產的工藝。需要在已經經過滅菌清洗的針劑瓶中灌入3%TSB培養基，在模擬無菌分裝時，可將實際物料用無菌乳糖進行代替，惰性氣體保護可用壓縮的潔凈空氣進行模擬，經過燈檢、壓塞及軋蓋后再來培養。樣品先培養7d保持在20℃～25℃環境中，再在30℃～35℃的環境中進行7d的培養，并且設置陽性、陰性的對照組。最后操作人員表面微生物和無菌分裝環境的微生物都通過了檢測，也符合陽性、陰性的對照，未檢出試驗樣本有微生物。所以在分裝無菌粉針時，只要操作人員通過嚴格的培訓，也按照要求的流程來操作，就可以實現實際生產產品保證無菌。

關鍵詞：粉針劑 無菌工藝 分裝

中圖分類號：R944.1+1 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2018）01（b）-0235-02

粉針生產線生產過程要實現無菌化，需人員、環境、設備及工藝相結合，進行定期的無菌工藝試驗來模擬，才能使得無菌分裝注射劑符合相關規定及生產工藝的要求。為了讓無菌制劑安全性得到保障，在生產過程中，就需要對整個過程中的無菌化程度進行評價，整個流程需經過嚴格精心設計且需要經過驗證的流程和方法來進行。通常會用無菌惰性粉末代替藥品來進行培養基模擬分裝試驗，在其中裝進培養基來促進微生物的生長，通過觀察微生物培養生長情況，就可以了解整個生產的無菌化情況及存在的問題。因為培養基與實際情況相比對微生物的生長繁殖更加有利，對無菌化生產過程進行模擬，就能對整個無菌措施的有效性進行驗證。

1 驗證準備工作

1.1 前提條件

首先針對參與無菌區、潔凈區的人員，如果進行培養基分裝操作，就要進行GMP知識的培訓并進行考核通過后才能得到許可，對人員所負責的工作進行職責明確和授權。相關資源需要及時安排到位，比如膠塞、培養基、西林瓶及分裝器具等都進行了滅菌清洗；保證監控生產過程的設備符合規定；有關設備和儀器如果用于分裝培養基，需要進行相關的認證或復核以確保正常運行；有關于分裝培養基的流程及結果確保經過了審核、培訓等手續并具有有效性。

1.2 乳糖的無菌處理

用大概25kGy的鈷60對乳糖先進行過度輻射進行滅菌，然后測試樣本抑菌、無菌及溶解情況。對微生物的滋生情況進行每天觀察，在試驗過程中發現，微生物在所有樣本及對照物上生長很明顯，表明白色念珠菌及金黃色葡萄球菌在乳糖上不能被抑制。在對乳糖進行溶解性試驗時，乳糖溶解為澄清溶液，根據我國藥典附錄中的“無菌檢驗法”檢查乳糖樣品是否無菌，結果全部乳糖均檢測為無菌狀態，所以根據試驗可以確認乳糖滿足無菌模擬分裝測試的需求。

1.3 培養基的微生物生長性能

為確保所使用的培養基在無菌模擬實驗中的有效性，需對培養基進行無菌及生物性能測試，保證在模擬分裝測試中使用的培養基滿足要求。通過實踐說明，培養基模擬分裝試驗使用胰酪大豆胨液體配成3%的水溶液來測試是否符合測試要求的。

2 粉針劑無菌分裝模擬驗證

2.1 驗證方法

首先需要進行培養基水溶液的配制，此過程需根據廠商的規定來進行，配制出3%水溶液，將其放入脈動滅菌柜進行滅菌操作后，再倒入所需數目的西林瓶中，瓶中也需確保無菌。然后，將無菌乳糖分裝進有無菌培養基的西林瓶內，此過程需根據無菌分裝的操作規定來進行，整個分裝的過程應該詳細的進行記錄保存。在操作完之后，對西林瓶的分裝順序給予相應的標記或者標號。將分裝好的樣品進行倒置培養，環境溫度需滿足20℃～25℃，在此條件下至少要進行7d的培養，如果有的瓶子有密封性風險問題的需要及時去除。之后在30℃～35℃的溫度環境中，再進行至少7d的培養。如果在此期間內，觀察微生物生長狀況時，發現有污染的情況，需要及時進行記錄污染的批號、瓶數及日期等信息。再對污染的樣品情況進行仔細鑒別，主要包括細胞形態、菌落和革蘭染色特征等信息。還需要監測分裝人員及環境狀況，對于所取得的樣本中如果微生物有陽性的，還要鑒別其微生物屬、種等信息，同時也要檢測所用的材料和工具是否都是無菌狀態。

2.2 單位分裝體積及分裝數量

在進行體積選擇時，要能夠讓容器內表面接觸到培養基，再進行旋轉和翻轉，讓密封件的內表面也接觸到培養基，使得在培養微生物之后具體情況能夠被觀察到。在進行分裝時，需考慮到微生物能夠獲得充足的氧氣，頂部需留1/4的空間，培養基體積需大于瓶子總容積的1/3。此次測試把6.7mL的培養基裝進了20mL的試驗瓶中，根據相關規定及試驗需求，此次共有3臺KF32型分裝機來進行分裝，預計每臺分裝5000瓶，總共15000瓶。

2.3 培養基促生長性試驗

在分裝后的培養基中隨即選擇18份，其中進行細菌陰性對比的兩份，進行真菌陰性對比的兩份，在其他的樣本中加入環境分離菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌及黑曲霉，分別準備各兩份，含菌數均小于100cfu。陰性對照組也需要同時培養，培養真菌需5d，細菌需3d，其他的接種管都是有菌生長，而陰性對照組應該保持無菌的環境。

3 討論

3.1 驗證要求

只有廠房設施等已經完成確認，才可以進行分裝模擬的試驗，主要包括水系統、空氣凈化系統、真空系統及壓縮空氣系統；對物料傳遞系統及人員更衣系統進行驗證；對環境熏蒸滅菌情況和干熱、濕熱滅菌系統進行驗證；保證儀器設備都通過了校準。

3.2 從事驗證的人員

管理、組織及實施人員如要進行培養基的分裝測試，必須通過驗證方案、更衣驗證、崗位SOP、微生物知識及分析方式等培訓，并且其能力需符合參與條件。在進行驗證測試時，需讓人員現場活動的頻次降低，動作幅度盡量減小，嚴格遵守規定來進行無菌生產的操作。

3.3 驗證過程中環境的監測

在進行驗證時，監測微生物狀態需根據有關的規定來操作，和平常的生產頻次數保持一致，應該把無菌工藝的各個流程都包含進去。通常包含：浮游菌、沉降菌、空氣粒子數、人員監測及表面微生物，對工作人員的口罩、無菌衣及手套等地方進行取樣，保證微生物的數量保持在可以接受的范圍以內。

3.4 對驗證全過程控制

培養基在開展驗證時，需要確認分裝設備已經實現了無菌化，按照要求對膠塞、鋁蓋及西林瓶都要滅菌清洗而且通過了檢驗，同時所需要的文件都通過了審核批準可以進行。為了讓最差情況的干擾活動得到體現，需要對實際過程中的計劃干擾進度詳細制定。在進行分裝時，需要對中斷、人員干擾操作、空機運轉和異常狀況等進行完整及時的記錄。為了避免驗證給后面的生產產生污染，需制定完善的方法來進行防止。

3.5 建議

培養基的選擇應結合生產企業的產品特點和微生物菌種庫的情況，選擇能夠適合廣泛微生物的培養基。想要培養基能夠維持并捕聚微生物活性的能力時，其中工藝惰性氣體可使用無菌空氣來代替；如果環境中需要低于0.1%的氧氣濃度時，培養基可使用適合厭氧微生物成長的類型。在設計分裝模擬計劃時，應對實際班次進行考慮，因為其中包含了多個班次，在計劃中還應該包含第二、三個班次，其他還需照顧到像夜班人員等的實際狀態。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2] 白慧良，李武臣.藥品生產驗證指南（2003）[M].北京：化學工業出版社現代生物技術與醫藥科技出版中心，2003.

[3] 國家食品藥品監督管理局認證中心編寫.藥品GMP指南[M].北京：中國醫藥科技出版社，2011.