健脾益氣通絡中藥對糖尿病腎病大鼠腎組織nephrin、CD2AP基因表達的影響

（云南省中醫醫院 云南 昆明 650021）

李瓊鋒 王宮林（通訊作者） 韋袞政 趙義

糖尿病腎病是糖尿病比較常見的一種全身微血管相關并發癥，帶來比較大的危害[1]。對糖尿病腎病開展健脾、益氣及通絡治療能獲得良好效果。本文主要研究將健脾益氣通絡中藥應用于糖尿病腎病大鼠模型中對其腎組織nephrin、CD2AP基因表達的影響作用。

1.材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

選取60只健康雄性SD大鼠，均為SPF級，大鼠體重是200g到250g，由昆明楚商科技有限公司提供。

1.1.2 試劑及儀器

健脾益氣通絡中藥包含黃芪30g、白術20g、黨參20g、茯苓20g、澤蘭20g、丹參20g、水蛭6g。試鏈脲佐菌素（由美國Sigma公司提供）。Trizol試劑（由美國Invitrogen公司提供）。西藥選用洛汀新（鹽酸苯那普利片，10mg/片，北京諾華制藥有限公司制造）。逆轉錄試劑盒（由加拿大MBI Fermentas公司提供）。DNA純化試劑盒、CD2AP、nephrin、β-actin試劑和相關引物（均由上海生工生物工程技術服務有限公司提供）。PCR循環儀（由英國horhnoHybaid公司提供）。

1.2 實驗動物分組

60只SD大鼠飼養一周后通過背部切口開展左腎切除手術，兩周之后隨機抽10只為左腎切除組，剩余大鼠在其腹腔將STZ注入，72小時之后經尾靜脈抽血檢測血糖，若血糖檢測值大于等于16.7mmol/L則評定為模型構建成功。剩余大鼠隨機分成糖尿病腎病模型組、r一組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，一組收入10只，洛汀新組大鼠予以0.9mg/kg.d實施灌胃處理，糖尿病腎病+中藥低劑量組大鼠予以5.29mg/kg.d健脾益氣通絡中藥實施灌胃處理，糖尿病腎病+中藥中劑量組大鼠予以5.29mg/kg.d健脾益氣通絡中藥實施灌胃處理，糖尿病腎病+中藥高劑量組大鼠予以21.16mg/kg.d健脾益氣通絡中藥實施灌胃處理，左腎切除組、糖尿病腎病模型組予以等量的生理鹽水實施灌胃處理，每天進行1次灌胃，持續灌胃6周。

1.3 RT-PCR檢測nephrin、CD2AP基因表達情況

開展30個RT-PCR循環，將擴增得到長度是192bp的片段，將產物置于2℃下儲存。之將產物在1.5%的瓊脂糖凝膠上點樣開展電泳實驗，半小時之后于紫外光燈下面對結果進行觀察和判定。

1.4 統計學分析

數據采取統計學軟件（SPSS21.0版本）開展驗證，nephrin吸光度測定值、CD2AP吸光度測定值表示為均數±標準差（±s）的形式，開展t檢驗，P＜0.05，出現數據檢測統計學意義。

2.結果

2.1 六組大鼠一般情況分析

左腎切除組神狀態良好，飲食正常，動作敏捷，反應靈敏，毛色光澤，肌肉豐滿，尿量正常，沒用死亡情況。將STZ注入之后，五組大鼠均多食、多飲及多尿，大鼠的精神較為萎靡，大鼠的反應較為遲鈍等。治療期間均有死亡情況，其中中藥低劑量、高劑量組各死亡3只，中藥中劑量、洛汀新組各死亡2只，模型組死亡4只。

2.2 對比和分析六組大鼠腎組織nephrin吸光度測定值、CD2AP吸光度測定值

糖尿病腎病模型組的nephrin吸光度測定值、CD2AP吸光度測定值與左腎切除組對比均降低，P＜0.05，各個治療組的nephrin吸光度測定值、CD2AP吸光度測定值與糖尿病腎病模型組對比都增加，P＜0.05，出現數據檢測統計學意義。

表1 六組大鼠腎組織nephrin吸光度測定值、CD2AP吸光度測定值對比和分析

3.討論

糖尿病腎病是糖尿病相對常見的并發癥，容易引發出現終末期的腎衰竭現象，而糖尿病腎病患者出現蛋白尿與其腎小球的濾過屏障損害存在一定關系[2]。

nephrin是于裂孔膜上面特異表達的跨膜蛋白，為裂孔膜蛋白復合體的重要組成成分，糖尿病腎病初期出現比較肥大的腎小球與nephrin表達量比較低及蛋白尿存在一定的關系，而CD2AP于腎小球的足細胞以及腎小管的上皮細胞中均可表達，nephrin和CD2AP組成脂筏樣的結構及功能相關復合體而對裂孔膜相關結構以及功能完整性進行維持[3]。本文相關數據展示，糖尿病腎病模型組的nephrin吸光度測定值、CD2AP吸光度測定值與左腎切除組對比均降低，P＜0.05，呈現數據檢測統計學意義，其他各組沒有呈現數據檢測統計學意義（P＞0.05）。各個治療組的nephrin吸光度測定值、CD2AP吸光度測定值與糖尿病腎病模型組對比都增加，P＜0.05，呈現數據檢測統計學意義。

綜上所述，對糖尿病腎病大鼠模型予以健脾益氣通絡中藥治療可促使nephrin、CD2AP基因表達明顯增加。

[1]丁海華,邱原野,王盈盈,等.小檗堿對糖尿病腎病大鼠nephrin、podocin和α3β1整合素表達的影響[J].中國藥理學通報,2015(10):1414-1420.

[2]鄧順有,黃賜平,葉穎霞,等.活血降糖膠囊對糖尿病腎病大鼠足細胞相關分子蛋白表達的影響[J].中國醫院藥學雜志,2016,36(14):1167-1173.

[3]王雁秋,黃平,鄧旻,等.絞股藍總皂苷對糖尿病腎病大鼠nephrin、VEGF表達及腎功能的影響[J].浙江中西醫結合雜志,2015(1):17-19,108.