正交試驗優化參芪婦康顆粒的提取工藝Δ

孫臻，張影，汪杰，陳明聰，黃祖光，高華宏（1.三亞市婦幼保健院，海南三亞57000；.三亞市中醫院，海南三亞 57000；3.廣東省中藥研究所，廣州 510095）

參芪婦康顆粒為純中藥復方制劑，原方為三亞市婦幼保健院周玉海主任中醫師臨床經驗方，有多年臨床應用史。該方由黃芪、黨參、當歸、赤芍、紅藤、敗醬草、川楝子、香附、益母草、丹參、三棱、甘草等12味中藥材組合而成，具有益氣化瘀、清熱祛濕之功效。臨床研究表明，該方能顯著降低人體血液黏稠度，改善微循環，提高免疫功能，用于治療慢性盆腔炎的總有效率達93.33%[1]。

該方原為湯劑給藥，易吸收、起效快，但口感差，不方便服用、攜帶和貯存。為提高患者用藥依從性，本課題組以傳統中醫藥理論為指導，結合現代制藥技術，采用干法制粒技術將其改制為顆粒劑[2]，在保持湯劑優勢的前提下，克服其不足，達到服用劑量小、療效穩定、使用方便的目的。為確保制劑的提取效果，保證成品質量和療效，本課題組根據處方藥材的主要有效成分性質、藥理作用、中藥配伍原則和臨床用藥特點，確定采用全方水提取的方法，以干膏得率和75%乙醇浸出物含量作為評價指標，采用正交試驗對該藥的提取工藝進行優化，以期為其工業化生產提供一定參考。

1 材料

1.1 儀器

TC20KA型電子稱、JJ300型電子分析天平（常熟市雙杰測試儀器廠）；DHG-9036A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；DZF-6050型真空干燥箱（上海浦東榮豐科學儀器有限公司）；HHS-2型電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海虞龍儀器設備有限公司）。

1.2 試劑

試驗所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 飲片

黃芪（批號：20160401）、黨參（批號：20160401）、當歸（批號：20160501）、赤芍（批號：20160401）、紅藤（批號：20160501）、敗醬草（批號：20151102）、川楝子（批號：20151101）、香附（批號：20160501）、益母草（批號：20151103）、丹參（批號：20160401）、三棱（批號：20151101）、甘草（批號：20160401）均購自海南健鵬藥業有限公司，經三亞市中醫院藥檢室張影副主任中藥師鑒定為真品。

2 方法與結果

2.1 指標的測定

2.1.1 干膏得率 精密量取“2.2.2”項下樣品溶液20 mL，分別置于干燥至恒定質量的蒸發皿中，水浴蒸干，濃縮、干燥，得干膏。按2015版《國家藥典》（四部）通則0831“干燥失重測定法”[3]測定質量，計算干膏得率。干膏得率（%）=浸膏質量×200/（藥材質量×20）×100%。

2.1.2 75%乙醇浸出物含量 精密量取“2.1.1”項下干膏，粉碎，過2號篩，得干膏細粉，備用。稱取上述干膏細粉2～4 g，精密稱定，置于250 mL錐形瓶中，加75%乙醇溶液100 mL，密塞，稱定質量，靜置1 h；連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h；放冷，取下錐形瓶，密塞，稱定質量，用75%乙醇溶液補足減失的質量，搖勻；用干燥濾器濾過，精密量取續濾液25 mL，置于干燥至恒定質量的蒸發皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h；移至干燥器中，冷卻30 min，迅速精密稱定質量。以干燥品計算供試品中75%乙醇浸出物含量（%）[3]。浸出物含量（%）＝（m/M）×（100/25）×100%，其中，m為蒸發皿中干膏質量，M為干燥樣品質量。

2.2 單因素試驗

2.2.1 藥材吸水率考察 按處方的2倍量稱取藥材，共3批，分別加10倍水量（L/kg，下同）浸泡藥材至透心，6 h后棄去多余水分，稱定藥材質量，計算藥材吸水率[4]。結果，藥材吸水率為170%（RSD＝1.59%，n＝3）。因此，在第1次提取時應加1.7倍水量。

2.2.2 浸泡時間考察 稱取1/2處方量藥材，第1次以1.7倍水量浸泡，第2次以10倍水量浸泡，均浸泡0.5、1、1.5、2 h，提取2次，每次1 h；濾過，取續濾液，合并，濃縮，放冷，以水定容至200 mL，得樣品溶液。精密量取上述樣品溶液20 mL，分別置于干燥至恒定質量的蒸發皿中，水浴蒸干。按2015版《國家藥典》（四部）通則0831“干燥失重測定法”[3]測定質量，并計算干膏得率[5]。結果表明，浸泡時間對干膏得率影響不大，考慮節約時間和成本的原則，選擇浸泡0.5 h。

2.3 正交試驗

采用水提取法制備本品。以單因素試驗結果為基礎，確定第1次提取時加1.7倍水量，浸泡0.5 h。以干膏得率和75%乙醇浸出物含量為指標，以提取時間（A）、加水倍量（B）和提取次數（C）[6-8]為因素，采用L9（34）正交表進行試驗設計優化提取工藝。采用加權綜合評分法對正交試驗所得的干膏得率和75%乙醇浸出物含量（%）進行綜合評分[9]，權重系數各為0.5。加權綜合評分＝（干膏得率×50/最高干膏得率）+（75%乙醇浸出物含量×50/最高75%乙醇浸出物含量）。因素與水平見表1，正交試驗設計與結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 因素與水平Tab 1 Factors and levels

由表2、表3可知，各因素影響程度排序為C＞A＞B，直觀分析得最優提取工藝為A3B2C3；A因素和B因素的影響均無統計學意義（P＞0.05），C因素的影響具有統計學意義（P＜0.05）。故從省時、降低生產成本等角度綜合考慮，最后確定提取方案為A1B1C3，即加8倍水量，提取3次，每次1 h。

2.4 驗證試驗

稱取1倍處方量藥材，加8倍水量，提取3次，每次1 h，按“2.1”項下方法測定干膏得率和75%乙醇浸出物含量，按“2.3”項下方法計算加權綜合評分。平行測定3批，結果見表4。結果表明，本工藝穩定可行。

表2 正交試驗設計與結果Tab 2 Design and results of orthogonal tests

表3 方差分析結果Tab 3 Analysis result of variance

表4 驗證試驗結果（n＝3）Tab 4 Results of validation tests（n＝3）

3 討論

干浸膏是口服中藥復方制劑發揮臨床療效的最基礎的物質，干膏得率高低直接影響制劑工藝和臨床療效，是水提工藝最有效、最直接的控制標準[10]。

本處方在臨床以湯劑的形式使用多年，療效顯著。本課題組結合醫院制劑室的生產條件，為盡量保持原方的療效優勢，故選擇與湯劑相同形式的水提取法。

浸出物含量是復方中藥制劑質量控制的另一個重要指標，通過測定浸出物含量可對中藥復方制劑有效成分進行控制，充分體現中藥復方多成分、多靶點治療疾病的整體觀，是保證中藥制劑藥效的重要手段[11]。方中黃芪、黨參為君藥，二者配伍使用，出自《脾胃論》中的補中益氣湯，黃芪主要有效成分為黃芪甲苷等黃酮苷類[12]，黨參主要有效成分為黨參炔苷、蒼術內酯、黨參苷類[13]；臣藥紅藤、敗醬草、益母草、香附、川楝子有效成分為生物堿[14-16]，上述有效成分均易溶于75%乙醇溶液。因此，本課題組以75%乙醇溶液為溶劑，對正交提取工藝水提液所得干膏進行浸出物含量測定。

中藥復方制劑由于成分復雜、劑型多樣化，用單一的考察指標篩選最佳提取工藝并不全面，亦不能代表中藥制劑的整體質量和優劣。故采用加權綜合評分方法，將干膏得率和75%乙醇浸出物含量作為提取工藝的考察指標，權重系數各設為0.5，按各指標對有效成分產生的影響進行權重分配，避免了考察指標的片面性，使優化的提取工藝更具科學性。

綜上所述，優化的提取工藝操作穩定、質量可控，可為參芪婦康顆粒的工業化生產提供一定參考。

[1] 周玉海，章慧.益氣化瘀法治療慢性盆腔炎30例臨床觀察[J].中國中醫藥科技，2003，10（5）：303-304.

[2] 林淵，周良良，吳水生.對中藥湯劑劑型改革研究的思考[J].中國方劑學雜志，2011，17（5）：265-266.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：103、203.

[4] 張霞，王榮，楊健宏，等.復方蕓歸顆粒制備工藝研究[J].中國現代應用藥學，2011，28（3）：223-235.

[5] 金玉琴，曾國武，王龍虎，等.不同浸泡時間對浙貝母有效成分提取的影響[J].中國藥業，2012，21（20）：24-25.

[6] 涂瑤生，高華宏，張建軍，等.丹芪調經顆粒的制備工藝研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（2）：212-213.

[7] 牛陽，張霞，王榮，等.八珍益智顆粒制備工藝優選[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（7）：35-36.

[8] 尤文質，陳雪梅，蘇娟娟，等.通脈顆粒水提及制粒工藝優化[J].中國藥房，2016，27（34）：4836-4837.

[9] 劉弘，王俊杰，張玲昂，等.加權綜合評分法優化心得寧口服液提取工藝的研究[J].中醫學報，2014，29（1）：77-79.

[10] 李煌，謝偉容，夏裕發，等.正交優選參斛顆粒水提組提取工藝研究[J].福建中醫藥大學學報，2012，22（6）：34-35.

[11] 謝秀瓊，韓麗，羅海燕.中藥新制劑開發與應用[M].2版.北京：人民衛生出版社，2006：232-233.

[12] 陳建真，呂圭源，葉磊，等.黃芪黃酮的化學成分與藥理作用研究進展[J].醫藥導報，2009，28（10）：1314-1315.

[13] 孫政華，邵晶，郭玫.黨參化學成分及藥理作用研究進展[J].安徽農業科學，2015，33（43）：174-176.

[14] 李敏，金則新，陳彤，等.紅藤飲片提取物抑菌活性與次生代謝產物含量的相關性[J].浙江大學學報（醫學版），2006，35（3）：274-279.

[15] 劉生肸，劉喜平，董鈺，等.延胡索與川楝子配伍中總生物堿含量變化的研究[J].中醫兒科，2006，2（5）：42-44.

[16] 周寶玉，虞文妹.敗醬草與其混淆品蘇敗醬及北敗醬的鑒別[J].實用中醫藥雜志，2014，30（8）：778-779.