宮頸鱗癌及CIN中FOXP3的表達及其意義

袁利

（遵義醫學院附屬醫院婦科 貴州 遵義 563000）

宮頸癌在全球婦女癌癥死亡率中居第二位，也是與病毒感染密切相關的癌癥之一。目前認為，免疫逃逸是腫瘤的發生發展的重要機制，而越來越多的證據表明CD4+CD25+Treg在腫瘤免疫逃逸中扮演了重要角色。叉樣頭轉錄因子3（forkheadbox protein 3，FOXP3）是CD4+CD25+Treg的特異性標志，并在其分化發育及介導的腫瘤免疫逃逸中發揮關鍵作用。本研究意在探討FOXP3在宮頸癌及癌前病變中的表達及其意義。

1.材料與方法

1.1 標本采集

收集2011年10月—2012年6月首次在遵義醫學院附屬醫院婦科門診接受宮頸活檢患者共67例，經遵義醫學院附屬醫院病理科確診宮頸鱗癌26例（Ⅰ級5例，Ⅱ級14例，Ⅲ級7例），癌前病變21例，慢性宮頸炎20例。

1.2 試劑

鼠抗人FOXP3單克隆抗體（工作濃度為1：50）購自美國abcam公司；Envision試劑盒及其他配套試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 方法

將病理科存檔蠟塊作4μm厚連續切片，行HE染色重新閱片進一步明確診斷，Envision免疫組化染色。免疫組化實驗過程嚴格按照說明書操作步驟進行，DAB顯色，蘇木精復染。用淋巴結組織染色作陽性切片對照。組織抗原修復采用高壓處理。

1.4 結果判斷

FOXP3蛋白陽性信號染色呈棕黃色或棕褐色，定位于細胞核。免疫組織化學染色強度按如下標準進行評分：著淺黃色為1分，著棕黃色為2分，著棕褐色為3分。隨機選擇10個高倍視野，每個視野計數100個細胞，共計1000個細胞，計算出每張切片上的陽性表達百分比(公式為：陽性細胞數/總細胞數@100%)。陽性細胞數10%～30%為2分，陽性細胞數31%～50%為3分，陽性細胞數＞51%為4分；無明顯陽性細胞或不論染色強度只要陽性細胞數＜10%為陰性(-)，3分為(+)，4～5分為(6)，6～7分為(7)，+、6、7均歸為陽性表達[4]。綜合染色強度和陽性細胞占總細胞數的百分比進行半定量處理。

1.5 統計學方法

所得數據采用SPSS17.0統計軟件對相關數據進行分析，計數資料采用等級相關秩和檢驗，兩者之間的相關性采用spearman相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 觀察切片

FOXP3陽性反應呈棕黃色或棕褐顆粒，表達于淋巴細胞，定位在細胞核，集中在癌巢周圍的間質中，宮頸鱗癌及CIN細胞中無表達。

2.2 慢性宮頸炎組織中可見FOXP3呈弱表達或無表達，宮頸鱗癌及CIN中見FOXP3呈強表達；宮頸鱗癌組織中FOXP3的表達高于CIN組織及慢性宮頸炎組織（P＜0.05），CIN組織中FOXP3表達高于慢性宮頸炎組（P＜0.05）。

2.3 尚不能認為宮頸鱗癌中FOXP3的表達與組織學分級及年齡無關（P＞0.05）。(見表1、表2)。

表1 FOXP3在各宮頸組織中的表達情況Tab.1 The results of FOXP3 expression in different group

表2 FOXP3在宮頸癌組織中陽性表達與病理特征的關系Tab.2 In cervical squamous carcinoma, the comparision of the positive expression of FOXP3 in different histological grade and age

3.討論

目前，已在動物模型及多種人類惡性腫瘤中檢測到FOXP3的表達增加，且數目與腫瘤的進展程度和預后、生存率等呈負相關[1]。去除Tregs或封閉其抑制功能，可增強抗腫瘤免疫反應[2]。FOXP3在某些惡性腫瘤中除表達于CD4+CD25+Treg外，其在腫瘤細胞上也有表達，如在胰腺導管細胞癌[3]、黑色素瘤[4]、食道鱗癌[5]等腫瘤的癌細胞中，均有Foxp3陽性表達。同時在肺癌、乳腺癌、結腸癌等細胞株上也觀察到有Foxp3的表達[6]。國內在對皮膚癌及癌前病變中FOXP3的表達情況進行研究時發現，Foxp3+Tregs和Foxp3在皮膚癌前病變和惡性腫瘤中均有表達，但在正常表皮上未見表達。且Foxp3在皮膚腫瘤中的陽性率與病情的惡性程度呈現相關性[7]。

目前宮頸癌中FOXP3表達特異性定位于胞漿或薄膜上及定位于細胞核均有報道，本實驗與后者相符，FOXP3在宮頸鱗癌中僅表達于淋巴細胞，癌細胞中無表達，定位于細胞核。現有研究表明，FOXP3在慢性宮頸炎、CIN及宮頸癌中表達逐漸加強，本實驗也提示宮頸癌中FOXP3的表達與其余兩組存在差異（P＜0.05）。通過檢測宮頸鱗癌局部FOXP3表達增強，可能提示其局部CD4+CD25+Treg數量增多或功能加強，這能使機體局部的免疫抑制功能加強，使其處于一種高度的免疫耐受狀態，導致腫瘤能在一定程度上逃避免疫攻擊。

在對CIN中局部免疫的研究中也發現，CINⅠ與CINⅡ之間的變化無統計意義，而CINⅢ與CINⅠ、CINII比較有明顯差異。對FOXP3在CIN中的表達進行研究時發現，宮頸炎、CINΙ級及CINⅡ級各組病變組織中Foxp3 表達無差異（P＞0.05），而CINⅢ級與其他各組間Foxp3表達均有統計學差異（P＜0.05）[9]。

[1]Hiraoka N，Onozato K，Kosuge T，et al.Prevalence of FOXP3+ regulatory T cells increases during the progression of pancreatic ductal adenocarcinoma and its premalignant lesions[J].Clin Cancer Res，2006，12（18）:5423-5434.

[2]Nagai H，Horikawa T，Hara I，et al.In vivo elimination of CD25+ regulatory T cells leads to tumor rejection of B16F-10 melanoma，when combined with interleukin-12 genetransfer[J].Exp Dermatol，2004，13（10）:613-620.

[3]Sebastian Hinz，Laia Pagerols-Raluy，Hans-Heinrich Oberg，et al. Foxp3 expression in pancreatic carcinoma cells as a novel mechanism of immune evasion in cancer[J].Cancer Res，2007，67（17）:8344-8350.

[4]Lisa M.Eber，Bee Shin Tan，Judy Browning，et al.The Regulatory Tcell-associated transcription factor FoxP3 is expressed by tumor cells [J].Cancer Res，2008，68（8）:3001-3009.

[5]Xue L，Lu H Q，He J，et al.Expression of FOXP3 in esophagial squamous cell carcinoma relating to the clinical data[J].Dis Esophagus，2010，23（4）:340-346.

[6]Vaios Karanikas，Matthaios Speletas，Maria Zamanakou，et al.Foxp3 expression in human cancer cells[J].Journal of Translational Medicine，2008，6（1）:19.

[7]劉干，黃堒.皮膚鱗癌及癌前病變中Foxp3蛋白的表達[J].重慶醫科大學學報，2011，36（6）：660-663.