丹參、三七藥對配方顆粒單煎、合煎成分含量變化的對比研究

鄭建欣，毛春芳

（1.福建省仙游縣醫院，福建 莆田 351200；2.福建省邵武市立醫院，福建 南平 354000）

三七始載于《本草綱目》，臨床應用多為研末沖服。 丹參為常用中藥，《神農本草經》列為上品［1］159，李時珍：“丹參，按《婦人明理論》云：四物湯……惟一味丹參散，主治與之相同。 ”［1］1204丹參、三七兩藥功效相近，常配伍使用，是中醫臨床上常用的藥對之一，具有“活血化瘀、理氣止痛”的功效，用于預防和治療冠心病、心絞痛，比如被列為國家臨床急救必備藥物之一的復方丹參滴丸，就是以丹參、三七為主要成分。學術界對于該藥對的研究由來已久，僅在萬方數據知識平臺檢索到關于丹參、三七的文章就多達1 636篇，已有研究發現藥對不同的配伍比例對于成分的溶出量存在明顯的影響，以經典方（丹參∶三七為 5∶3）丹參素的溶出量最高［2］，而在復方丹參片（丸、顆粒、膠囊、噴霧劑）中丹參∶三七為15∶4.7［3］。 中藥配方顆粒是以符合炮制規范的傳統中藥飲片為原料，通過現代制藥技術模擬家庭水煎煮模式，經過提取、濃縮、制粒而成的中藥產品，其性味、功效與原中藥飲片一致，供臨床調配，即沖即服，與傳統中藥飲片使用相比，減少共煎的過程。傳統中藥湯劑煎煮是一個復雜的物理、化學反應過程，單煎與合煎引起化學成分及含量變化都很大［4］，雖有許多臨床醫生及藥學工作者研究認為配方顆粒的臨床療效值得肯定，但對中藥配方顆粒的即沖即服與合煎所產生化學成分影響的對比研究比較少。丹參、三七藥對在臨床上應用廣泛，使用頻次高，丹參素、丹酚酸B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1是丹參、三七制劑常用的質量控制指標［2-5］，該藥對的傳統飲片及配方顆粒的溶液與合煎液有效成分溶出的定性、定量分析，能為臨床更合理使用中藥配方顆粒提供數據參考，為其發揮更大的臨床效用提供新思路。

1 實驗材料

1.1 實驗藥物 丹參素（110855-200405）、丹酚酸B（111562-201615）、丹參酮Ⅰ（110867-200406）、丹參酮ⅡA（110766-200619）、原兒茶醛（110810-200205）、三七皂苷 R1（110745-200617）均購自中國食品藥品檢定研究院。丹參、三七飲片及配方顆粒均由廣東一方制藥有限公司提供，經廣東一方制藥有限公司質量檢測中心鑒定均符合《中華人民共和國藥典》（2015年版）項下規定。

1.2 實驗儀器 Waters Xevo TQ-S型三重四極桿液質聯用儀（美國Waters公司）；H-Class高效液相色譜儀包括在線脫氣機、四元泵、自動進樣器（美國Waters公司）；XP26百萬分之一天平（梅特勒-托利多公司）；Milli-Q純水儀（默克股份有限公司）。

1.3 實驗試劑 甲醇（色譜純，默克股份有限公司）；乙腈（色譜純，默克股份有限公司）；甲酸（色譜純，科密歐化學試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜分離采用Acquity UPLC HSS T3 column（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相 A：乙腈，流動相B：0.1%的甲酸水，梯度洗脫，洗脫程序為 0～2.29 min，13%～87%A；2.29～8 min，13%～28%A；8～9 min，28%～61%A；9～15 min，61%～90%A；流速 0.5 mL／min，柱溫 30 ℃，進樣量2 μL。

2.2 質譜條件 離子源為電噴霧離子源（ESI），同時進行正、負離子檢測，正離子模式下檢測的化合物為丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、三七皂苷R1；負離子模式下檢測的化合物為原兒茶醛、丹參素、丹酚酸B。工作參數設置為：離子源溫度500℃，錐孔電壓3.0 kV，霧化氣氮氣的流速為1 000 L／h，碰撞氣氬氣的流速為0.12 mL／min。掃描方式為MRM多反應監測模式；用于定量分析的離子反應分別為m／z 295→277（丹參酮ⅡA）；m／z277→249（丹參酮Ⅰ）；m／z717→519（丹酚酸 B）；m／z137→108（原兒茶醛）；m／z197→135（丹參素）；m／z955→775（三七皂苷 R1）。

2.3 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取丹參素、丹酚酸B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1對照品適量，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對照品儲備液。各對照品溶液由混合對照品儲備溶液用甲醇稀釋制備。

2.4 供試品溶液的制備

2.4.1 飲片合煎液 將丹參飲片與三七粗粉按照兩個配伍比例混合后，用10倍水量浸泡1 h后，煎煮2次，每次1 h，第二次煎煮加水量為8倍量水。過濾，合并兩次煎液加水補足至18倍量，即得。

2.4.2 飲片單煎液 分別稱取2份丹參飲片15 g，煎煮與樣品處理方法均同上，得兩份丹參單煎液后，分別稱取三七細粉4.7 g和9 g，分別將三七細粉加入丹參單煎液中，攪拌均勻，即得。

2.4.3 中藥配方顆粒合煎液 分別稱取飲片當量丹參15 g配方顆粒與飲片當量三七9 g配方顆粒，加18倍量熱水合煎20 min，過濾，加水補足至18倍量，即得。

2.4.4 中藥配方顆粒溶液 分別稱取飲片當量丹參15 g配方顆粒與飲片當量三七9 g配方顆粒，分別加18倍量熱水溶解，即得。

取上述7種供試品儲備液，分別精密吸取5 mL至20 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，過0.22 μm微孔濾膜，即得。

2.5 標準曲線的制備 分別精密吸取丹參素、丹酚酸 B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1系列混合對照品溶液各2 μL，在上述色譜條件下進樣測定（色譜圖見圖1）。以峰面積（Y）對對照品進樣量（μg）進行回歸，得回歸方程，見表1。

圖1 6個對照品的MRM質譜圖

表1 6種對照品的回歸方程、線性范圍和相關系數

2.6 方法學考察

2.6.1 精密度試驗 取丹參素、丹酚酸 B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1系列混合對照品溶液各2 μL，按上述色譜條件，連續進樣6次，分別測定各對照品峰面積，結果顯示6種對照品的 RSD 分別為 1.1%、1.6%、1.0%、1.1%、1.7%、1.5%，表明儀器精密度良好。

2.6.2 穩定性試驗 分別精密吸取各供試品，按上述色譜條件在 0、4、8、12、24 h 分別進樣測定，結果顯示，丹參素、丹酚酸B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1的RSD分別為1.3%、1.8%、1.6%、2.0%、1.2%、1.9%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.6.3 重復性試驗 將飲片丹參、三七及配方顆粒丹參、三七，按“2.4”項方法制備供試品溶液平行6份，按上述色譜條件，分別連續測定6次，計算含量，結果顯示，丹參素、丹酚酸B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1含量的RSD分別為1.6%、1.2%、2.1%、1.8%、1.5%、1.2%，說明方法重復性良好。

2.6.4 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品溶液6份，精密加入丹參素、丹酚酸 B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1系列混合對照品溶液各2 μL，按上述色譜條件，分別測定6種有效成分的峰面積，計算回收率，求得平均回收率分別為 93.57%、97.76%、94.8%、95.03%、98.71%、94.19%，RSD 分別為 1.7%、0.6%、1.8%、1.6%、0.7%、1.9%，說明此方法回收率良好。

2.7 樣品含量測定結果 分別取各供試品液按實驗色譜條件進行測定，計算各樣品每克飲片中含丹參素、丹酚酸B、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、原兒茶醛、三七皂苷R1的量，結果見表2。

表2 丹參、三七飲片及配方顆粒單煎及合煎中6種成分含量比較 μg／g

3 討 論

丹參中已經發現的成分有一百多種，其有效成分主要分為脂溶性和水溶性兩類，其中水溶性成分丹酚酸A、丹參素、丹酚酸B、原兒茶醛是防治動脈粥樣硬化、治療冠心病及抗氧化作用的主要有效成分；脂溶性成分丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA是抗菌消炎、抗腫瘤的主要有效成分，同時對心血管疾病有預防和保護作用［5-6］。三七中的三七總皂苷對循環系統作用效果顯著，尤其是在心血管疾病的治療應用更為廣泛［7-8］。

研究結果顯示：由兩個配伍比例的飲片單、合煎液中丹參素、丹參酮Ⅰ合煎液的含量稍有提高；丹酚酸B、丹參酮ⅡA合煎液的含量未看出規律性變化；原兒茶醛合煎液的含量略有下降，但總的趨勢不太明顯。三七皂苷R1合煎液的含量明顯下降，這可能是由于合煎時采用粗粉而單煎時采用細粉，說明三七入煎劑時采用傳統的細粉兌入法成分溶出率更高。

在丹參配方顆粒與傳統飲片煎煮比較結果發現6種成分含量差異不大，僅丹參酮類成分稍高。中藥配方顆粒為水溶性提取物，在水中完全溶解，不存在受溶出量因素的影響，三七和丹參配方顆粒混合再煎煮，丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA含量下降明顯，推測可能是脂溶性成分再煎煮過程中析出或破壞；丹酚酸B受熱后會轉化成丹參素和原兒茶醛。彭九嫚等［6］的研究表明丹參酚酸B隨著提取時間的延長峰面積開始下降，而丹參素的峰面積開始增加，配方顆粒經過合煎后，丹參素和原兒茶醛含量明顯提高，這可能由于再煎煮過程中受熱導致丹酚酸B含量降低，丹參素和原兒茶醛含量增加。

配方顆粒合煎后三七皂苷R1的含量提高，可能是由于三七配方顆粒為超微粉，經加熱提取增加了三七皂苷R1的含量，而三七配方顆粒的溶液只是用熱水溶解，所以含量相對較少。

復方中藥是復雜的一個整體，通過多靶點、多途徑發揮療效，合煎過程所伴隨復雜的物理、化學變化使得中藥有了發揮臨床療效的物質基礎，也是復方中藥制劑質量評價的難點和重點。丹參、三七藥對在臨床上主要用于心血管疾病的預防與治療，有研究發現丹參、三七單煎與合煎的薄層色譜斑點數及色澤存在一定的差異，表明成分的含量及種類有一定的差別［9］。所以，我們認為從有效成分的含量變化考察，當某些藥對或處方經過合煎能提高有效成分的含量［10］，使用配方顆粒時應該再煎煮或高溫燜；或者將一些常用的、有效成分溶出量明顯提高的經典藥對直接制成免煎復方顆粒，可以提高中藥配方顆粒臨床使用合理性。但對于受熱易轉化分解的藥物，不能對藥對配方顆粒再進行煎煮，否則由于延長藥物的受熱時間導致化學成分和傳統煎煮藥對的化學成分不一致，因此，不同藥對之間或藥對不同的使用范圍應該具體情況具體分析。

［1］ 《中藥辭海》編審委員會.中藥辭海［M］.北京：中國醫藥科技出版社，1993.

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