卡介菌-多糖核酸不同干預方式對哮喘小鼠氣道反應性和氣道炎癥的影響

姜華 賴克方 沈璐 席寅 南巖東 金發光

支氣管哮喘是一種以氣道高反應性、可逆的氣流受阻、氣道嗜酸性粒細胞等浸潤、氣道黏液高分泌及血清高IgE為特征的氣道慢性炎癥性疾病，Th1/Th2失衡學說解釋了哮喘的部分發病機制[1-3]。此后有研究證實調節性T細胞也參與了哮喘的免疫紊亂[4]。卡介苗(bacillus calmette-guerin, BCG)具有很強的Th1細胞作用，多個研究證實在造模前給予BCG干預可明顯降低哮喘小鼠的氣道反應性、氣道炎癥[5-8]。卡介菌多糖核酸(BCG polysaccharide nucleotide, BCG-PSN)是BCG經過滅活后制成的一種免疫制劑，具有多種免疫活性[9-10]。目前臨床BCG-PSN的用藥途徑為肌肉注射，其缺點是用藥周期長，臨床應用受限，且需在相關動物研究為造模前給藥。因此本研究主要探討BCG-PSN不同方式干預對已造模成功的哮喘小鼠氣道炎癥和氣道反應性的影響。

材料和方法

一、材料及試劑

Balb/c小鼠(購自廣東省實驗動物中心)5～6周齡，體質量16～18 g，雌性。飼養在廣州呼吸疾病研究所SPF級動物房。卵白蛋白(OVA，Sigma公司)，佐劑Al(OH)3(Sigma公司)。卡介菌-多糖核酸購自醫院藥房(國藥準字92S020100，湖南斯奇生物制藥有限公司生產)。小鼠無創肺功能儀(美國Buxco公司)。

二、試驗方法

1. 動物致敏、激發： 以OVA首次致敏為0 d，在0、7、14 d OVA(0.01%OVA，0.2 ml/只)腹腔注射致敏，28、29、30 d(早期)，42、43、44 d(晚期) OVA(0.4%OVA，50 μl/只)滴鼻激發，一次/d。正常組在每次給藥時間點給予相應劑量的生理鹽水。動物造模干預流程，見圖1。

圖1 研究中動物致敏、激發、BCG-PSN干預流程；注：ip腹腔注射致敏20 μg OVA(0.01% OVA,0.2 ml/只)；in麻醉滴鼻激發200 μg OVA(0.4% OVA，50 μl/只)im 肌肉注射

2. BCG干預： 劑量為20 μg/只，體積為60 μl，均為末次激發后(30 d)進行干預，根據干預方式分為肌肉注射組(im)和麻醉滴鼻組(in)。……