XN-20 WPC對外周血原始細胞與異常淋巴細胞檢測的價值

夏永輝， 韓慶慶， 王守磊， 李 勇

（中國醫學科學院血液病醫院檢測中心，天津 300020）

XN-20血液分析儀（簡稱XN-20）運用半導體激光流式細胞術原理對細胞進行分類、計數，準確性高，重復性好，可檢測參數多，分析速度快。在白細胞分類檢測過程中，當存在異常細胞時，XN-20白細胞前體通道（white cell precursor channel，WPC）信息欄處會出現儀器報警，如原始細胞、原始細胞/異常淋巴細胞、異常淋巴細胞等。本研究通過比較XN-20 WPC與人工鏡檢的檢測結果，來探討XN-20 WPC對外周血原始細胞、異常淋巴細胞的檢測性能，從而評價其臨床應用的價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年3月13—17日中國醫學科學院血液病醫院住院及門診患者1 135例，其中住院患者919例，門診患者216例。

1.2 儀器和試劑

XN-20及其配套校準品、質控品（日本Sysmex公司），BX31顯微鏡（日本Olympus公司），瑞氏吉姆薩染液，血常規抗凝管。

1.3 方法

采集患者外周血標本，用乙二胺四乙酸二鉀抗凝管進行抗凝處理。按《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）[1]的要求，采用XN-20對標本進行檢測，同時進行室內質量控制，所有標本均在2 h內完成檢測。打開WPC，對疑似有原始細胞、原始細胞/異常淋巴細胞、異常淋巴細胞儀器報警的標本進行檢測，統計檢測結果。

根據美國國家臨床實驗室標準委員會（the National Committee for Clinical Laboratory Standards，NCCLS）EP15-A文件[2]要求，取3份不同水平（低水平、中水平、高水平）標本，采用常規方法重復檢測11次，去掉第1次檢測結果，取后10次檢測結果，計算均值、標準差（s）及批內精密度[變異系數（coefficient of variation，CV）]，評價XN-20 WPC檢測外周血原始細胞及異常淋巴細胞的重復性。

根據國際血液學標準化委員會（t h e International Council for Standardization in Haematology，ICSH）的指導方法[3]，取1份高水平標本，連續檢測外周血白細胞3次，檢測值分別記為H1、H2、H3。取1份低水平標本，連續檢測外周血白細胞3次，檢測值分別記為L1、L2、L3。按照公式計算攜帶污染率，該公式為攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

對所有出現儀器報警的標本，制作血涂片；隨機選取未出現儀器報警的標本，制作血涂片。標本經瑞氏吉姆薩染色后，由2名有經驗的操作人員，根據美國臨床實驗室標準化協會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）H20-A2文件[4]要求，用BX31顯微鏡油鏡對血涂片體尾交界處200個白細胞進行觀察、分類，對原始細胞、異常淋巴細胞進行計數，并計算原始細胞百分比、異常淋巴細胞百分比。整個分類過程采用單盲方式，結果取2名操作人員觀察結果的平均值。原始細胞百分比=原始粒細胞百分比+原始單核細胞百分比+幼稚粒細胞百分比+幼稚單核細胞百分比，異常淋巴細胞百分比=原始淋巴細胞百分比+幼稚淋巴細胞百分比+淋巴瘤細胞百分比+漿細胞百分比。異常細胞百分比≥5%，即判定檢測結果為陽性；異常細胞百分比＜5%或未見異常細胞，即判定檢測結果為陰性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。

2 結果

2.1 XN-20 WPC的重復性

XN-20 WPC對外周血原始細胞及異常淋巴細胞檢測的重復性良好。見表1、表2。

表1 出現原始細胞儀器報警的標本重復性檢測結果

表2 出現異常淋巴細胞儀器報警的標本重復性檢測結果

2.2 XN-20 WPC的攜帶污染率

采用XN-20 WPC對出現原始細胞儀器報警的標本進行檢測，H1為54.92×109/L，H2為54.34×109/L，H3為54.21×109/L，L1為0.16×109/L，L2為0.19×109/L，L3為0.17×109/L，經計算，攜帶污染率為0.02%。采用XN-20 WPC對出現異常淋巴細胞儀器報警的標本進行檢測，H1為48.61×109/L，H2為48.49×109/L，H3為48.33×109/L，L1為0.91×109/L，L2為1.01×109/L，L3為0.90×109/L，經計算，攜帶污染率為0.02%。

2.3 XN-20 WPC與人工鏡檢的符合率

共有257例標本出現原始細胞、異常淋巴細胞儀器報警，其中同時出現原始細胞及異常淋巴細胞儀器報警的標本共6例，對所有出現儀器報警的標本制作血涂片；共有878例標本未出現原始細胞、異常淋巴細胞儀器報警，隨機選取117例標本制作血涂片。XN-20 WPC與人工鏡檢的檢測結果符合率情況見表3。

表3 XN-20 WPC與人工鏡檢的檢測結果符合率

3 討論

XN-20針對前向散射光、側向散射光、側向熒光3種信號，運用獨創的數字技術和演算法，將血小板、網織紅細胞、有核紅細胞、白細胞、單核細胞等進行分類、計數，同時檢測異常細胞。WPC可對原始細胞及異常淋巴細胞進行檢測。溶血劑（Lysercell WPC）中的表面活性劑可使紅細胞及血小板溶血、溶解，還可使白細胞的細胞膜輕微受損。在此之后，染色液（Fluorocell WPC）中的熒光染料進入細胞內，對核酸等內容進行染色。根據細胞內核酸量的不同來檢測白細胞及異常細胞。不同臨床疾病患者的原始細胞和異常淋巴細胞的性質各不相同，因此溶血劑（Lysercell WPC）表面活性劑與染色液（Fluorocell WPC）熒光染料作用而產生的形態和染色性與正常細胞相比存在一定的差異，該差異由散射光強度和熒光強度所反映，根據獨創的演算法檢測異常細胞。

為了驗證XN-20 WPC對原始細胞、異常淋巴細胞檢測的可靠性，本研究首先對其重復性、攜帶污染率進行了驗證。結果表明，批內CV均＜1.5%，由此可見XN-20 WPC的重復性良好。XN-20 WPC檢測原始細胞、異常淋巴細胞的攜帶污染率均為0.02%，故XN-20 WPC的分析性能良好。

本研究共對374例標本進行了人工鏡檢。共有6例標本同時出現原始細胞及異常淋巴細胞儀器報警，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為83.3%，其中1例假陽性標本為急性淋巴細胞白血病患者治療后所采集的標本，其外周血血涂片中未發現異常細胞。出現假陽性的原因可能是由患者經治療后白細胞及異常細胞總數降低所致。

共有223例標本出現原始細胞儀器報警，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為42.2%，假陽性標本129例。115例標本人工鏡檢未發現異常細胞。4例標本發現淋巴瘤細胞，均來自伯基特淋巴瘤患者；1例標本發現漿細胞，來自多發性骨髓瘤患者；2例標本發現原始淋巴細胞，均來自骨髓增殖異常綜合征患者；7例標本發現原始淋巴細胞，均來自急性淋巴細胞白血病患者。另外，人工鏡檢共檢測出14例標本有異常淋巴細胞，而儀器卻將其認作原始細胞，這可能是由患者經一段時間治療細胞形態、結構發生變化所致，故儀器未能準確對其進行識別。

共有28例標本出現異常淋巴細胞儀器報警，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為42.9%，假陽性標本16例。14例標本人工鏡檢未發現異常細胞。1例標本發現早幼粒細胞，來自急性早幼粒細胞白血病患者。1例標本發現幼稚單核細胞，來自急性單核細胞白血病患者。儀器將這2例髓系早幼粒細胞和幼稚單核細胞認作異常淋巴細胞，這可能是由患者細胞結構發生非典型異常改變所致。

共有878例標本未出現原始細胞、異常淋巴細胞儀器報警，隨機選取117例標本制作血涂片，儀器與人工鏡檢的檢測符合率為97.4%。114例標本人工鏡檢未發現異常細胞。2例標本發現淋巴瘤細胞，分別來自彌漫性大B細胞淋巴瘤患者及T淋巴母細胞淋巴瘤患者。1例標本發現異型淋巴細胞，來自感染患者。儀器未能識別這3例假陰性標本，發生了漏檢情況，故在實際工作中需制定相關復檢規則以防止漏檢。

綜上所述，XN-20 WPC對原始細胞及異常淋巴細胞具有一定的檢測、識別能力，但檢測結果存在一定的假陽性和假陰性情況。國內外對此已做了大量的研究工作，建議每個實驗室應自行制定復檢規則[5-6]。當儀器出現原始細胞、異常淋巴細胞儀器報警時，需打開WPC，進而對異常細胞屬原始細胞還是異常淋巴細胞進行檢測、區分，同時應結合人工鏡檢結果進行分析，從而提高檢測的準確性。

[1] 尚紅，王毓三，申子瑜. 全國臨床檢驗操作規程[M]. 4版. 北京：人民衛生出版社，2015：16.

[2] National Committee for Clinical Laboratory Standards.User demonstration of performance for precision and accuracy[S]. EP-15A，NCCLS，2001.

[3] International Council for Standardization in Haematology. Guidelines for the evaluation of blood cell analysers including those used for differential leucocyte and reticulocyte counting and cell marker applications[J]. Clin Lab Haematol，1994，16（2）：157-174.

[4] Clinical and Laboratory Standards Institute.Reference leukocyte（WBC） differential count（proportional） and evaluation of instrumental methods[S]. H20-A2，CLSI，2007.

[5] PIERRE R V. Peripheral blood film review. The demise of the eyecount leukocyte differential[J]. Clin Lab Med，2002，22（1）：279-297.

[6] 孫芾，王厚芳，于俊峰，等. 血細胞顯微鏡復檢標準的制定及臨床應用[J]. 中華檢驗醫學雜志，2005，28（2）：155-157.