結(jié)腸鏡檢查人群肛門(mén)HPV感染情況調(diào)查及危險(xiǎn)因素分析*

唐湘嫘，張志強(qiáng)，夏宇

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830054）

人類(lèi)乳頭狀病毒（human papillomavirus, HPV）感染是人類(lèi)常見(jiàn)的性傳播疾病之一，它不僅可以引起人類(lèi)皮膚、黏膜等部位發(fā)生良性病變，還可以引起惡性腫瘤的發(fā)生。已有大量研究證明，HPV感染與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而肛門(mén)和直腸在細(xì)胞組織學(xué)結(jié)構(gòu)方面與宮頸存在著一定的相似性，并且肛門(mén)腺體豐富、易發(fā)生黏膜破損，有利于HPV病毒的侵入與生長(zhǎng)，越接近肛門(mén)部位，HPV感染率越高[1]。近年來(lái)研究表明，HPV感染與結(jié)直腸癌的發(fā)生存在一定的相關(guān)性。肛門(mén)癌雖然不常見(jiàn)，但近年來(lái)發(fā)病率呈現(xiàn)出逐漸增高的趨勢(shì)，尤其在年輕人群中逐漸增加[2]。王海江等[1]對(duì)新疆75例肛門(mén)癌手術(shù)切除的標(biāo)本行HPVDNA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HPV陽(yáng)性率達(dá)73.3%，提示肛門(mén)HPV感染與新疆人群肛門(mén)癌密切相關(guān)，其可能是新疆人群肛門(mén)癌發(fā)生發(fā)展的重要原因之一。

目前已發(fā)現(xiàn)200種以上不同類(lèi)型的HPV。HPV在不同病變中的亞型分布不同，低危型如6和11型，通常與尖銳濕疣等良性病變相關(guān)，高危型如16和18型，與宮頸癌、陰莖癌、肛門(mén)癌等惡性腫瘤關(guān)系密切[3]。因此，HPV的檢測(cè)和基因分型對(duì)HPV相關(guān)疾病的早期防治有著非常重要的意義。

研究發(fā)現(xiàn)，肛門(mén)癌與HPV感染的類(lèi)型、病毒感染量、宿主的免疫狀態(tài)等多種因素相關(guān)。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，某些消化系統(tǒng)疾病，包括腹瀉、肛周疾病、炎癥性疾病、免疫抑制劑、不良性生活、年齡、性別、吸煙等均能增加肛門(mén)HPV感染的風(fēng)險(xiǎn)[4]。但國(guó)內(nèi)尚無(wú)此類(lèi)研究報(bào)道，本研究是首次在國(guó)內(nèi)采用HC2法聯(lián)合基因芯片法調(diào)查結(jié)腸鏡檢查病人肛門(mén)HPV感染情況并分析其危險(xiǎn)因素。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014年11月-2016年11月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)鏡中心行結(jié)腸鏡檢查的同期所有檢查患者273例，年齡≥18歲。

1.2 調(diào)查方法

通過(guò)發(fā)放問(wèn)卷調(diào)查表的方式進(jìn)行相關(guān)因素調(diào)查，調(diào)查問(wèn)卷內(nèi)容包括年齡、性別、吸煙飲酒史、文化程度、消化系統(tǒng)病癥、免疫抑制劑、性生活等。調(diào)查問(wèn)卷由本研究的研究人員在參考國(guó)內(nèi)外類(lèi)似研究的基礎(chǔ)上自行設(shè)計(jì)和制定。

1.3 標(biāo)本收集

在行結(jié)腸鏡檢查前，用毛刷在肛門(mén)周?chē)杉撀渖掀ぜ?xì)胞，取樣后的毛刷刷在玻璃片上，然后放入4%多聚甲醛中固定待測(cè)。

1.4 病毒形態(tài)學(xué)分析

玻璃片經(jīng)巴氏染色，顯微鏡下觀(guān)察病理學(xué)改變。

1.5 HPV-DNA檢測(cè)

1.5.1 試劑及儀器 上海凱杰公司生產(chǎn)的HC2 HPVDNA檢測(cè)試劑及信號(hào)分析儀。

1.5.2 方法 DNA提?。簶?biāo)本中加指示劑及裂解液，水浴。雜交：吸混合液及探針至孔板，靜置，振蕩。65℃孵化，冷卻。捕獲：將液體轉(zhuǎn)移至捕獲孔，振蕩，吸出液體棄掉。反應(yīng)：吸檢測(cè)試劑1至各孔，靜置，倒掉液體，沖洗。收集信號(hào)：吸檢測(cè)試劑2至各孔，黑暗處?kù)o置。判讀：DML2000系統(tǒng)上判讀分析結(jié)果。

1.6 HPV分型檢測(cè)

1.6.1 試劑及儀器 晶芯HPV分型檢測(cè)試劑盒（微陣列芯片法）、BioMixer雜交儀、LuxScan 10K-B微陣列芯片掃描儀均購(gòu)自北京博奧公司。

1.6.2 方法 DNA提取：樣品離心，加裂解液及蛋白酶K，靜置。加異丙嗪，加75%乙醇洗滌沉淀，離心，倒掉乙醇，干燥。加TB緩沖液，靜置。PCR擴(kuò)增：擴(kuò)增試劑A、B，融化混勻，加樣本，擴(kuò)增儀中行擴(kuò)增反應(yīng)。雜交：擴(kuò)增產(chǎn)物加入雜交緩沖管，混勻，離心?；旌衔锛拥叫酒?，放于50℃的雜交儀器中，60 min。芯片于42℃洗滌液I中，震蕩。洗滌液Ⅱ中，震蕩。芯片于微陣列離心管，離心，甩干。掃描：芯片掃描儀和HPV分型檢測(cè)系統(tǒng)行信號(hào)讀取和判斷。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，多因素分析用Logistic回歸分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者的一般臨床特征

273例患者中，男性156例，女性117例；年齡18～75歲；漢族217例，維吾爾族36例，回族16例，其他民族4例；未婚10例，已婚263例，以及其他一般臨床特征見(jiàn)表1。

2.2 影響肛門(mén)HPV感染的相關(guān)危險(xiǎn)因素分析

273例標(biāo)本中檢測(cè)HPV-DNA陽(yáng)性8例，總感染率為2.93%，標(biāo)本同時(shí)行基因分型，其中4例（52+58）型，2例16型，1例35型，1例39型，均為高危型，273例標(biāo)本顯微鏡下觀(guān)察未見(jiàn)明顯病理改變。單因素分析表明，影響肛門(mén)HPV感染的相關(guān)危險(xiǎn)因素分別是患者的年齡、文化程度、消化道癥狀等因素。見(jiàn)表2。

2.3 影響肛門(mén)HPV感染的危險(xiǎn)因素分析

將上述單因素分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的危險(xiǎn)因素，以年齡、文化程度、消化道癥狀為自變量，以肛門(mén)HPV感染結(jié)果為因變量行多因素Logistical回歸分析，結(jié)果表明年齡、文化程度、消化道癥狀是影響肛門(mén)HPV感染的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表1 患者的一般臨床特征

表2 影響肛門(mén)HPV感染的相關(guān)危險(xiǎn)因素分析

表3 影響肛門(mén)HPV感染的多因素Logistical回歸分析

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查顯示，性行為是主要的HPV傳播途徑，性伴侶數(shù)量多、性伴侶不固定、性接觸頻率高、不潔性生活都是生殖道HPV感染的高危因素，而特殊性交行為，如肛門(mén)性交可增加肛門(mén)HPV感染的風(fēng)險(xiǎn)[5]。據(jù)報(bào)道，異性戀男性肛門(mén)HPV感染率為12%，同性戀男性肛門(mén)HPV感染率為47%[6]。本研究顯示，特殊性生活并不是肛門(mén)HPV感染的風(fēng)險(xiǎn)因素。但是，考慮我國(guó)社會(huì)對(duì)于特殊性生活的接受程度，不排除由于受試者對(duì)該問(wèn)題的敏感性，因此未能如實(shí)回答。

另外，研究發(fā)現(xiàn)年齡與宮頸HPV感染有關(guān)，宮頸HPV感染最常見(jiàn)于＞55歲及＜25歲的女性，其原因?yàn)?5歲以上女性的免疫力較差，女性激素的變化可導(dǎo)致處于潛伏期病毒復(fù)活，而25歲以下年輕女性性生活較頻繁，可通過(guò)不潔的性生活增加宮頸HPV感染[7]。相關(guān)研究顯示，男性生殖器HPV感染多見(jiàn)于21～40歲，可能與這個(gè)年齡段的男性性生活相對(duì)頻繁有關(guān)[8]。本研究顯示，肛門(mén)HPV感染多見(jiàn)于31～40歲。這與以往的研究結(jié)果是基本一致的。

國(guó)內(nèi)學(xué)者姚吾等[9]的研究結(jié)果顯示，文化程度和經(jīng)濟(jì)收入低、營(yíng)養(yǎng)狀況差以及健康衛(wèi)生習(xí)慣缺乏與生殖道高危HPV感染具有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，文化程度是影響肛門(mén)HPV感染的危險(xiǎn)因素。低等文化程度人群中HPV感染率高于中等及高等文化患者。其原因可能在于文化程度低，導(dǎo)致了健康衛(wèi)生習(xí)慣的缺乏，導(dǎo)致更加容易接觸和感染HPV。因此，應(yīng)加大衛(wèi)生保健知識(shí)的宣傳和教育，降低HPV的感染率[10-11]。

另外，本研究還顯示，消化道癥狀也是影響肛門(mén)HPV感染的危險(xiǎn)因素。HPV陽(yáng)性患者均有消化道癥狀，多數(shù)有消化道疾病病史。其原因可能在于消化系統(tǒng)疾病可降低腸道黏膜抵抗力，減弱局部清除病原體能力而增加感染HPV的風(fēng)險(xiǎn)。這是首次發(fā)現(xiàn)消化道癥狀是影響肛門(mén)HPV感染的危險(xiǎn)因素。

本研究方法采用HC2法聯(lián)合基因芯片法行HPVDNA檢測(cè)及基因分型[12-13]，能檢測(cè)22種HPV基因型，其中包含高危型17種：16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73和82。 低危型5種：6、11、53、70和81。該方法簡(jiǎn)單易行、安全性強(qiáng)、診斷迅速，癌細(xì)胞檢出率較高，適合大規(guī)模普查，不僅可以對(duì)HPV 感染者進(jìn)行準(zhǔn)確的早期診斷，而且可以對(duì)HPV進(jìn)行快速分型檢測(cè)。研究結(jié)果將為抗HPV疫苗的研制、肛門(mén)癌的預(yù)防、篩查、及肛門(mén)癌的早期診斷和治療提供客觀(guān)、準(zhǔn)確、科學(xué)的依據(jù)。

綜上所述，結(jié)腸鏡檢查人群肛門(mén)有一定的HPV感染率，但感染率較低。年齡、文化程度、消化道癥狀是影響肛門(mén)HPV感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。