枯草桿菌二聯活菌腸溶膠囊聯合多烯磷脂酰膽堿治療NAFLD療效及對血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α的影響

劉揚河，龍登毅，貝箏，凌萌智，張艷,蔡篤雄

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是臨床常見的一種疾病，是指在非酒精因素作用下發生肝細胞脂質貯積和肝脂肪變性為主要表現的臨床綜合征。隨著人們物質生活水平的不斷提高以及飲食結構的復雜多樣，本病的發病率呈現逐年升高的趨勢，其發病率高達17%～33%[1]。若病變進一步發展可由單純性脂肪肝進展為脂肪性肝炎、肝纖維化以及肝硬化[2]。臨床上，對于本病的治療無論是中醫還是西醫均沒有特效的藥物。因此，尋找積極有效的醫治措施是極為重要的。多烯磷脂酰膽堿具有促進肝功能恢復、調節肝臟能量平衡和促進肝組織再生等作用，并可將中性脂肪和膽固醇轉化成容易代謝的分子形式，降低血脂水平[3]。枯草桿菌二聯活菌能夠抑制細菌生長，其可利用生物奪氧作用，制造厭氧菌生長環境，促進雙歧桿菌等的生長，并可產生多種消化酶，促進機體對物質的消化和吸收[4]。我們應用枯草桿菌二聯活菌聯合多烯磷脂酰膽堿治療NAFLD患者，獲得了滿意的臨床效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年6月～2016年6月我科診治的NAFLD患者78例，男性40例，女性38例；年齡30～68歲，平均年齡(45.76±4.25)歲。符合NAFLD診斷標準[5]。排除標準：（1）伴有嚴重的肝腎功能不全者；（2）近4周內接受過藥物治療者；（3）過敏體質者；（4）患肝豆狀核變性或血色病等遺傳性疾病；（5）妊娠或哺乳期婦女；（6）長期飲酒者；（7）病毒性、藥物性和自身免疫性肝炎者；（8）伴有惡性腫瘤。采用隨機數字表法將患者分為觀察組39例和對照組39例，兩組基線資料比較，無顯著性統計學差異（P>0.05），具有可比性。本研究取得患者知情同意，并獲得醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 治療方法 對入選患者進行健康教育、飲食指導，糾正不良生活習慣。給予對照組多烯磷脂酰膽堿膠囊[賽諾菲(北京)制藥有限公司]456 mg口服，3次/d；觀察組在對照組治療的基礎上給予枯草桿菌二聯活菌腸溶膠囊 (美常安,北京韓美藥品有限公司）500 mg口服，3次/d。兩組均治療3 m。

1.3 觀察指標 使用日本日立公司生產的生化分析儀檢測血脂水平（試劑盒購自寧波瑞源生物科技有限公司）；采用ELISA法檢測血清人尾肢同源蛋白2 （people end limb homologous protein 2，Pygo2，Biocompare公司）、高遷移率族蛋白 B1（high mobility group protein，HMGB1，上海西唐生物科技有限公司）、人缺氧誘導因子1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α,美國 eBioscience 公司）水平；采用硫代巴比妥酸染色法測定血清丙二醛（malondialdehyde，MDA，南京建成生物研究所）；采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶（superoxide disumutase，SOD，南京建成生物研究所）；常規行超聲檢查，脂肪肝分度標準：正常：肝臟近場回聲無增強，回聲略強于腎，肝臟遠場回聲不衰減，肝內管道結構顯示清晰；輕度：肝臟近場回聲略增強，回聲略強于腎，肝臟遠場回聲略衰減；肝內管道結構顯示不清；中度：肝臟近場回聲彌漫性增強，回聲高于腎臟，肝臟遠場回聲衰減；肝內管道結構顯示不清；重度：肝臟近場回聲彌漫性明顯增強，回聲明顯高于腎臟，肝臟遠場回聲明顯衰減。

1.4 統計學分析 應用SPSS 17.0統計學軟件，血生化指標、Pygo2、HMGB1、HIF-1α 水平等計量資料以±s表示，采用t檢驗，率的比較采用x2檢驗，P<0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 兩組治療前后血脂水平的比較 在治療3 m末，觀察組TG、TC和LDL-C水平顯著低于，而HDL-C水平顯著高于對照組（P＜0.05，表 1）。

2.3 兩組治療前后氧化應激反應指標的比較 在觀察結束時，觀察組血清MAD水平顯著低于，而SOD水平顯著高于對照組（P＜0.05，表 2）。

2.4 兩組治療前后血清學指標比較 與治療前比，兩組治療后血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α水平均顯著降低，且觀察組降低更顯著（P＜0.05，表3）。

2.5 兩組治療前后肝臟B超檢查結果的比較 治療后，觀察組患者脂肪肝改善情況顯著好于對照組（P＜0.05，表 4）。

表1 兩組血脂水平（±s）的比較

表1 兩組血脂水平（±s）的比較

與對照組比，①P＜0.05

觀察組對照組例數 TG（mmol/L） TC（mmol/L） LDL-C（mmol/L） HDL-C（U/L）治療前 39 2.9±0.2 6.5±1.3 4.3±0.5 1.1±0.1治療后 39 1.2±0.2① 4.1±0.2① 3.1±0.1① 3.9±0.3①治療前 39 2.8±0.3 6.4±1.2 4.2±0.4 1.2±0.2治療后 39 1.6±0.3 5.1±0.3 3.5±0.2 3.2±0.2

表2 兩組血清氧化應激反應指標（±s）比較

表2 兩組血清氧化應激反應指標（±s）比較

與對照組比，①P＜0.05

治療組對照組例數 MDA（μmol/L） SOD（U/L）治療前 39 6.9±1.3 123.4±13.5治療后 39 4.4±0.7① 168.9±15.7①治療前 39 6.8±1.2 123.3±13.6治療后 39 5.4±0.8 154.4±15.3

表3 兩組血清學指標（±s）比較

表3 兩組血清學指標（±s）比較

與對照組比，①P＜0.05

Pygo2（μg/L） HMGB1（μg/L） HIF-1α（μg/L）治療前 52.8±6.3 61.6±7.9 58.6±8.5治療后 41.5±3.4① 15.7±4.6① 24.5±4.6①對照組 治療前 52.5±6.6 61.3±7.4 58.2±8.3治療后 48.2±3.7 26.4±5.1 32.6±4.7治療組

3 討論

NAFLD是指除了酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細胞內脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征。根據疾病嚴重程度可將其分為單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及其相關的肝硬化[7]。該病在西方國家肝病中占據首位病因，也是我國發達地區常見的一種慢性肝病，其患病率高達20%～30%[8]。研究表明，NAFLD的發生與胰島素抵抗和遺傳易感性有著非常密切的關聯[9]。隨著人們物質生活條件的不斷改善，我國肥胖人群比例逐漸增高，導致NAFLD的發病率也不斷增高。如果該病得不到及時有效的治療，極易發展為肝硬化、肝衰竭，甚至肝癌，嚴重影響患者生命健康。

多烯磷脂酰膽堿膠囊可提供高劑量且容易吸收利用的高能多烯磷脂酰膽堿，其結構與內源性磷脂相一致，進入肝細胞后與肝細胞膜和細胞器膜相結合，并可分泌入膽汁，進而發揮促進肝功能恢復、調節肝臟能量平衡以及促進肝組織再生等作用，并可將中性脂肪和膽固醇轉化成容易代謝的形式，降低血脂水平[3]。NAFLD的發病機制至今尚未明確，在眾多致病因素中，小腸細菌過度生長、細菌移位、腸黏膜通透性改變等所致的腸源性內毒素血癥在NAFLD發病中起著重要的作用[10,11]。伴隨肝-腸軸的提出，腸道微生態失衡及腸粘膜屏障的損害正成為肝病研究的熱點。美常安含有屎腸球菌和枯草桿菌兩種活菌。屎腸球菌能較強地抑制致病菌生長，其繁殖比較迅速；枯草桿菌為過路菌，能通過生物奪氧作用，定植于腸道，并降低局部氧濃度和氧化還原電位，制成一種適合厭氧菌生長的環境，進而促進雙歧桿菌等生長，且枯草桿菌還可產生多種消化酶，促進機體對營養物質的吸收，并產生多種抗菌化合物，進而抑制有害細菌的生長[4,12]。

Pygo2在肝纖維化的發生過程中起重要作用，其血清水平可評估肝纖維化程度[13,14]。HMGB1是一種高度保守的核內非組蛋白，參與細胞的多種病理生理過程。有研究指出HMGB1參與了炎癥反應、細胞遷移以及腫瘤的發生、發展和侵襲過程[15,16]。在NAFLD發病過程中，由于脂肪堆積所致的肝細胞缺血缺氧也發揮了重要的作用[17,18]。HIF-1α的高表達在慢性肺病、腫瘤、酒精性肝病中都被證實，能夠誘導NF-κB的表達，而NF-κB具有促進炎癥反應的作用，進而參與NAFLD的發病過程[19,29]。本研究在聯合用藥治療3個月后，觀察組血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α水平明顯低于對照組，說明美常安聯合多烯磷脂酰膽堿可抑制NAFLD患者肝纖維化和降低機體炎癥反應。觀察組血清TG、TC、LDL-C、HDL-C水平的改善情況也明顯優于對照組。治療后，觀察組血清MDA和SOD水平分別為（4.4±0.7）μmol/L 和（168.9±15.7）U/L，明顯優于對照組的[（5.4±0.8）μmol/L和（154.4±15.3）U/L，P＜0.05]。兩組患者治療前B超檢查均提示不同程度的肝臟飽滿或增大，肝實質顆粒變細膩，回聲光點增強，肝內血管走行變細或顯示不清，后場回聲衰減，肝腎界面顯示不清晰。在治療3個月末，上述情況均得到不同程度的改善，表現為肝實質顆粒變粗，回聲光點増粗減輕，肝內血管走行顯示清晰，后場回聲增強，肝腎界面顯示清晰，而美常安聯合多烯磷脂酰膽堿治療的NAFLD患者更明顯，中重度脂肪肝患者的比例顯著下降，效果確切。

總而言之，枯草桿菌二聯活菌腸溶膠囊聯合多烯磷脂酰膽堿治療NAFLD患者近期效果顯著，可有效改善機體血脂紊亂水平，減輕氧化應激狀態，并可降低血清Pygo2、HMGB1和HIF-1α水平，使超聲檢查診斷的脂肪肝，尤其是中重度脂肪肝患者的比例大幅下降，具有良好的臨床應用價值。但本研究觀察時間較短，如何讓患者長期維持治療，何時停藥及停藥后觀察與隨訪問題，停藥后療效維持問題等等，都需要在臨床實踐中繼續觀察。